什么叫巢式PCR
这种方法的关键在于它的“巢”式结构，每一次扩增都是基于上一次的产物，就像建造一个由PCR产物层层叠加的“巢”。通过这种方法，可以有效地提高PCR的灵敏度和特异性，尤其是在需要微量模板或处理复杂样本时，巢式PCR显示出其独特的优势。然而，需要注意的是，虽然巢式PCR能提供高纯度的产物，但扩增次数过多也可能导致非特异性扩增，因此在实际操作中，需要精细控制扩增次数以达到最佳效果。
干货分享 | 常用PCR技术及原理
热启动PCR通过在高温下释放酶修饰物激活DNA聚合酶，避免非特异性扩增。逆转录PCR将mRNA逆转录成cDNA，以此为模板进行PCR扩增，检测基因表达。荧光定量PCR在PCR反应体系中加入荧光基团，实时监测PCR进程，通过标准曲线定量分析模板。巢式PCR利用两套引物进行两轮PCR扩增，提升PCR特异性。降落PCR通过调整退火温度...
用同一种引物,同一种酶,对葡萄的DNA和cDNA进行pcr扩增,设置的pcr...
NestedPCR:巢式PCR,通过使用两套引物来进行两次连续的反应,用来增加DNA扩增的特异性。在第一次反应中产生的产物可能包含非特异性扩增产物,然后使用两个新的、结合位点位于原引物内部的引物进行第二次反应。第二套引物的使用可提高反应的特异性,增大单一产物产生的可能性。巢式PCR在提高特异性的同时,也增加了检测的...
巢式PCR相对普通PCR的优缺点有哪些?
巢式PCR相较于普通PCR，具有显著的优势和一些挑战。首先，巢式PCR的一大优点是解决了单次扩增时平台期效应的问题，提高了扩增效率，从而极大地提升了PCR的敏感性（通过连续多阶段扩增，有效避免了早期阶段的限制）。此外，通过调整模板和引物，巢式PCR降低了非特异性扩增的风险，确保了反应的特异性（内外...
巢式PCR的应用
一般应用于动物方面。如：病毒，梅毒螺旋体，HIV，肿瘤基因等。在RACE(rapid-amplification of cDNA ends)中，也利用巢式PCR增加特异性。在Illumina公司平台的第二代高通量测序中，也应用类似巢式PCR的原理，进行目的片段的扩增。如图，首先在目的片段通过TA克隆，引入一个片段，然后在特定的一个Flow Cell...
现在到底有多少 种类PCR
IPCR结合了酶联免疫分析的多功能性和PCR的扩增能力和灵敏性。其结果，ELISA的最低的检测限度被扩大了100－10000倍。由于PCR 产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比,因此免疫PCR 还可用于抗原的半定量试验。 3、巢式PCR 巢式PCR原理：是用内外两对引物扩增拷贝数较低的片段.先用外...
巢氏PCR第一轮扩增产物为模板直接做第二轮扩增有模糊条带,如果把第一...
巢式PCR的目标是提高扩增的特异性，也就是说第一轮扩增当中可能有非特异扩增。如果出现这种情况，可以尝试先检测第一轮产物的质量如何，如果不太好的话，是不是可以做一下纯化，或者胶回收，浓缩一下样品的浓度，再用于下一轮反应。第二轮反应做一个梯度PCR，看一下不通退火温度下，是否有条带变化，...
巢式PCR的巢式PCR的步骤
但只有一种产物是目的片断（图中未显示可能的多种产物）。第二步：使用图中红色标记的第二套引物对第一轮PCR扩增的产物进行第二轮PCR扩增。由于第二套引物位于第一轮PCR产物内部，而非目的片断包含两套引物结合位点的可能性极小，因此第二套引物不可能扩增非目的片断。这种巢式PCR扩增确保第二轮PCR产物...
巢式PCR中的引物怎么设计
巢式PCR的引物设计通常涉及两对引物：外引物（outer）和内引物（inner）。设计时，内引物的定位至关重要，通常直接针对目标序列进行设计，其方法与常规PCR引物设计相同。外引物的设计则稍有不同，从目标序列的两端出发，向内稍作延伸。理想情况下，外引物和内引物之间应有重叠区域，10个碱基的长度较为...
如何设计巢氏PCR的第一对引物
可以使用primer5 或者primerdesign设计 还是主要考虑发夹结构，GC含量，Tm值和引物交叉，还有减少引物二聚体的产生。如果是扩增启动子的话，建议选择引物的长度30-35bp，一般试剂盒里有接头引物的，只要在下游已知序列设计引物就可以咯
巢式PCR相对普通PCR的优缺点有哪些?
如果用普通PCR检测不到条带是因为扩增模板量太低造成的，为了提高检测灵敏度和特异性，可以采用巢式PCR。其优点是：1、克服了单次扩增平台期效应的限制，使扩增倍数提高，从而极大的提高了PCR的敏感性；2、由于模板和引物的改变，降低了非特异性反应连续放大进行的可能性，保证了反应的特异性；3、内侧...
止妻盖曲： 巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段.第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似.第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增. 巢式PCR通过两轮PCR反应,使用两套引物扩增特异性的DNA片断.第二对引物的功能是特异性的扩增位于首轮PCR产物内的一段DNA片断. 第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在内引物的存在下进行第二轮扩增.从而提高反应的特异性.
卓资县13171593531： 巢式pcr是什么意思?？
止妻盖曲： 巢式PCR(nested PCR),是指利用两套PCR引物(巢式引物)对进行两轮PCR扩增反应.在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增.河南省公安医院肝病治疗中心肝病专家解释说,由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)增加了检测的敏感性;又有两对PCR引物与检测模板的配对,增加了检测的可靠性.一般应用于动物方面.如:病毒,梅毒螺旋体,HIV,肿瘤基因等.
卓资县13171593531： 什么是巢式PCR?有什么应用? - ？
止妻盖曲：[答案] 巢式PCR是指利用两套PCR引物进行两轮PCR扩增反应.第一轮扩增中,外引物产生扩增产物,此产物在内引物的存在下进行第二轮扩增. 一般用于病毒基因的特异性检测,可以在10`6基因组背景下检测到一个拷贝的病毒基因.
卓资县13171593531： 请问谁能具体解释一下巢式PCR法? - ？
止妻盖曲：[答案] 就是多重PCR,第一次获得产物浓度不够,但循环数过多会造成产物质量不好,就会以第一次PCR产物为模板,设计内引物进行第二次扩增,获得高质量产物
卓资县13171593531： 巢式PCR是什么?？
止妻盖曲： 半巢式pcr 就是巢式的一种特殊类型,巢式pcr是在完成普通pcr前提下,继续扩增比普通pcr小的片断,可以增加特异性,而半巢式pcr是只换其中的一个引物,扩增比普通pcr小的片断.通俗的说,pcr是尺子上1-4厘米,那么巢式就是2-3厘米,半巢式就是1-3或2-4厘米,就这样子.
卓资县13171593531： (生物)详细解释下什么是巢式PCR - ？
止妻盖曲： 我自己写吧.希望你能理解. 巢式PCR就是用两对或多对引物进行的分歩PCR.以两对为例吧. 你的模板是个1000bp的DNA 片段,从5'至3'我们叫它1位-1000位,而你需要的序列是400-500位这100bp.如果直接用1000bp的模板去PCR,有可...
卓资县13171593531： 名词解释 套式pcr - ？
止妻盖曲： 套式PCR,又称巢式PCR.是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段.第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似.第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片断短于第一次扩增.巢式PCR的好处在于,如果第一次扩增产生了错误片断,则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低.因此,巢式PCR的扩增非常特异.
卓资县13171593531： 什么事巢式甲基化特异性PCR - ？
止妻盖曲： 巢式PCR的具体定义我没查,说白了就是进行二次PCR,第一次先用一对引物扩增一个比较大的片段,再用第二对引物以第一次扩增的产物作为模板进行扩增,从而得到你的目的片段.这种方法扩增的特异性比较好,但是对于甲基化PCR而言的话可能会比较困难,因为经过修饰后的DNA链变得极为简单,不好设计引物,但是如果对于甲基化来说却是是一种能够提高特异性的方法,前提是楼主必须对于甲基化引物的设计比较在行.希望能帮到你
卓资县13171593531： 什么是潮试PCR??? - ？
止妻盖曲： 不是潮试而是巢式 巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR),使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段.第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似.第二对引物称为巢式引物(因为他们在第一次PCR扩增片段的内部)结合在第一次PCR产物内部,使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增.巢式PCR的好处在于,如果第一次扩增产生了错误片断,则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低.因此,巢式PCR的扩增非常特异.http://baike.baidu.com/view/688277.htm 具体百度百科有
