微生物鉴定——酵母菌的培养及鉴定流程
在生物技术领域，酵母菌作为一类不可或缺的真菌，因其广泛应用在食品、酿酒、制药等多个领域，对其了解和鉴定显得尤为重要。接下来，我们将深入探讨酵母菌从样品处理、分离纯化，到属、种乃至株水平鉴定的全过程，助您掌握关键步骤。
步骤一：样品准备与分离纯化
首先，以种子样品为例，务必确保表面清洁无菌。使用无菌研磨设备将样品粉碎，然后配制成10^-6浓度的无菌水溶液。在无菌操作环境下，取100-150微升的稀释液，均匀接种到MEA、PDA或YPD等多种培养基上，每种培养基至少接种2-3个平行平板，于28℃恒温培养48-72小时。选择菌株分布均匀、数量适宜的平板，采用平板划线法将单菌落转移至新的MEA培养基上，继续培养后，挑取单菌落进行长期保存。
步骤二：DNA提取与PCR扩增
鉴定酵母菌的关键在于DNA的获取，可通过冻融法或专用试剂盒进行。冻融法需挑取菌落溶于无菌水中，经过沸水浴和冷冻处理，提取DNA。而试剂盒则遵循说明书步骤。接着，利用26S rRNA基因（约600bp）进行PCR扩增，使用NL⁃1（5’-GCATATCAATAAGCGGAAAAG-3’）和NL⁃4（5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’）引物。扩增条件为94℃5min，50s的预热，52℃和72℃各50s的循环，共30个循环，然后72℃保温8分钟。PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳检查，确认质量后，送至测序公司。
序列分析与系统发育树构建
在获得26S rRNA序列后，通过BLAST比对，查找GenBank数据库中的同源序列，通常要求同源性大于99%。构建系统发育树，与细菌鉴定相似，具体步骤可参考之前的文章。最终确定的序列将用于株级鉴定。
株级鉴定：RAPD技术
使用分子分型技术如RAPD，通过PCR随机多态性扩增来确认同类酵母菌是否属于同一株。挑选合适的引物（如OPA⁃02、OPA⁃18等），进行扩增，分析电泳结果，确定菌株的遗传多样性。
为什么细菌,霉菌,放线菌和酵母菌的菌落形态不同?
因为细菌，霉菌，放线菌和酵母菌是不同的。单个细菌用肉眼是看不见的，但是，当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，便会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。不同种类的细菌所形成的菌落，在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定的特征。例如，无鞭毛的...
酿酒酵母名词解释
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微生物限度检查法
再拿出来使用的话，如果时间不长，比如一周或半个月，可以直接使用，如果时间长了，建议活化后再用。先活化转第二代后再使用。培养方式，都可以，直立或者平放。等到菌都长好了，就可以放到冰箱里，一般细菌长的都比较快，24小时就差不多了。
如何在酵母中检测某种蛋白的表达位置
重组表达质粒线性化后电击转化至毕赤酵母宿主菌X-33,经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定后,得到重组酵母菌X-33\/pPICZαA-hrf2。用甲醇诱导重组酵母菌表达目标蛋白,发酵上清液经浓缩后进行SDS-PAGE电泳分析,在约18kD处有特异目标条带出现。Western blot检测表明表达产物具有良好的抗原性。生物活性检测表明酵母重组...
初三 生物 霉菌是真菌还是细菌还是什么 请详细解答,谢谢! (1 20:38...
霉菌是真菌。真菌分为大型真菌，霉菌，酵母菌等。除了酵母菌，其他真菌都是多细胞构成的菌丝。霉菌又分为青霉和曲霉，你经常在饭菜，点心，水果上见到的颜色怪异的毛毛就是霉菌。
公共场所 微生物检测 需要分离鉴定吗
根据各类微生物的形态结构和新陈代谢类型，利用选择性培养基和鉴别性培养基，结合显微镜的镜检以及菌落的特征，可以把混杂在一起的微生物分离或鉴定出来。假若某一样品中含有大肠杆菌、硝化细菌、酵母菌、光合细菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、乳酸菌微生物，你如何根据上述原理或方法，从理论上一一将其中...
比较狭义细菌、放线菌、四体、真菌(包括酵母菌和霉菌)
用已知菌种、型或菌株制成抗血清，然后根据它们与待鉴定微生物是否发生特异性的血清学反应，来确定未知菌种、型或菌株。· 噬菌反应 菌体的寄生有专一性，在有敏感菌的平板上产生噬菌斑，斑的形状和大小可作为鉴定的依据；在液体培养中，噬菌体的侵染液由混浊变为澄清。噬菌体寄生的专业性有差别，寄生...
一些真菌的生物学特性
真菌像细菌和微生物一样都是分解者,就是一些分解死亡生物的有机物的生物。真菌将生物分解为各类无机物,使土地肥力增强。 食物与真菌 还有些真菌也成为重要的食物来源。可食用的蕈菌有200多种,如冬菇、草菇、木耳、云耳等。以及真菌所侵入后的生(动)物空壳,如冬虫夏草。 还有的真菌用于食物加工,例如酵母菌用于...
食品微生物学检验标准
SNT 2565-2010 食品中志贺氏菌分群检测 MPCR-DHPLC法 SNT 2566-2010 食品中霉菌和酵母菌的计数 Petrifilm 测试片法 SNT 2567-2010 食品及包装品无菌检验 SNT 2582-2010 产黄曲霉毒素真菌PCR检测方法 SNT 2632-2010 微生物菌种常规保藏技术规程 SNT 2641-2010 食品中常见致病菌检测 PCR-DHPLC法 SNT 2660-2010...
菌落名词解释
各种微生物在一定条件下形成的菌落特征，具有一定的稳定性，是衡量菌种纯度、辨认和鉴定菌种的重要依据。菌落特征与微生物的菌体形态结构特征密切相关。细菌、酵母菌不形成菌丝，其菌落仅生长在固体培养基表面，与培养基结合不紧密，可用接种工具将其全部挑起;而放线菌、霉菌的菌体大多分化为营养菌丝与繁殖...
应子迪素： 酵母是兼性厌氧型生物,可以把两种菌体放在低氧环境中培养,看菌落发展情况,基本不变的是酵母,菌落增加或减少的就不是,最后鉴定下培养基中是否有酒精存在进一步确认.
鄄城县17525122373： 如何将酵母菌培养鉴定到种?举例说明 - ？
应子迪素： 酵母菌是一些单细胞真菌.酵母可以通过出芽进行无性生殖,也可以通过形成子囊孢子进行有性生殖.无性生殖即在环境条件适合时,从母细胞上长出一个芽,逐渐长到成熟大小后与母体分离.在营养状况不好时,一些可进行有性生殖的酵母会...
鄄城县17525122373： 如何将大肠杆菌,枯草杆菌和酿酒酵母这三种微生物分别分离出来并培养和鉴定 - ？
应子迪素： 给你简述吧,取6支试管,1.2加伊红美蓝,琼脂粉,制成固体陪养基,有紫色金属颜色为大肠杆菌,其中一个为备用,3.4高温,加琼,调PH7-7.5,制固体陪养基,最后为枯,一个为备用,5.6调PH4.8-6.加琼,制固体陪养基,最后为酿,一个为备用,再分别取三种菌在有牛肉膏蛋白胨等的陪养基里进行纯陪养
鄄城县17525122373： 微生物生理学的鉴定技术 - ？
应子迪素： 形态结构和培养特性观察 1、微生物的形态结构观察主要是通过染色,在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构(包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等)及染色特性进行观察,直观地了解细菌在形态结构上特性,根据不同微生...
鄄城县17525122373： 微生物学的思考题酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定1.酵母水浸片制作时应注意什么?2.在显微镜下,酵母菌有那些突出的特征区别于一般的细菌?3.(1)吕... - ？
应子迪素：[答案] 这问题好泛啊. 我就回答第二个问题好了,酵母菌比细菌大的多,很明显,酵母菌在低倍镜下就可以观察,细菌一般用高倍镜的油镜观察. 酵母菌经常能看到芽,就像长出个小脑袋出来一样.细菌一般没有. 细菌形态一般是杆状的多,当然也有球状的,...
鄄城县17525122373： 如何判断酵母菌 - ？
应子迪素： 酵母菌有多种繁殖方式,有人把只进行无性繁殖的酵母菌称作＂假酵母＂,而把具有有性繁殖的酵母菌称作＂真酵母＂. 酵母菌的无性繁殖 芽殖:酵母菌最常见的无性繁殖方式是芽殖.芽殖发生在细胞壁的预定点上,此点被称为芽痕,每个酵...
鄄城县17525122373： 如何用半固体培养基鉴别乳酸菌 硝化细菌和酵母菌? - ？
应子迪素： 1. 准备两种半固体培养基:蛋白质培养基、葡萄糖培养基2. 将三种菌分别接种在这两种培养基上,有氧培养3. 能在【蛋白质培养基】上生长的是【硝化细菌】,【只有硝化细菌能利用蛋白质】;4. 能在【葡萄糖培养基】上生长的是【酵母菌】,因为【兼性厌氧菌】5. 不能生长的是【乳酸菌】,因为【异养厌氧型】
鄄城县17525122373： 鉴别酵母菌、乳酸菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、硝化细菌的方法 - ？
应子迪素： 无氮培养基上可生长的是圆褐固氮菌、孟加拉红培养基上能生长且表面粗糙的是酵母、能在MRS上生长的是乳酸菌、血平板上有典型溶血环的是金黄色葡萄球菌、剩硝化细菌似乎没有在哪种平板上有典型菌落特征,要做生化鉴定
鄄城县17525122373： 微生物的菌种鉴定方法与步骤(鉴定到“株”一级) - ？
应子迪素： 首先如果你的菌株是自然界中分离得到,就只能鉴定到种,不能鉴定到株,因为多多少少和其他株系的细菌有区别,即便你做了一些特征的鉴定,发现和某一株细菌一模一样,你也没有理由说你的细菌就是那一株细菌,因为你不可能把所有的特征都做完,株和株之间的关系就相当于不同的人之间的关系,世界上不可能有完全相同的两个人.除非你知道你的细菌本来就是某一株细菌扩增出来的(而且要保证没有变异,否则就是一个新株),可是这样就没必要鉴定了.菌种鉴定一般就只要提取基因组DNA,然后PCR扩增16srDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon对比即可.一般序列相似度在97%以上就可以认为是同种细菌(当然也有例外,DNA序列仅仅是一个参考指标).
鄄城县17525122373： 酵母菌落如何辨别肉眼如何辨别培养基表面酵母菌落?与细菌、真菌菌落的差别?比较像细菌还是真菌菌落? - ？
应子迪素：[答案] 用伊红美蓝培养基 培养表面会有金属光泽 = =详情参见 选修1 最后几页
