trizol+ls
作者&投稿：牧季 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
邱唐18849367480问： Trizol法提取流感病毒 RNA - ？
安阳县百宁回答： 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管;2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀;3、13000rpm离心15min;4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...
邱唐18849367480问： 如何提取血RNA - ？
安阳县百宁回答： 都应该是可以的.不过提取RNA一般都用kit(试剂盒),RNA和DNA不一样,杂质多,易降解,所以基本上不用自己配的溶液提. 虽然我个人没有做过,但是全血和血清中提取RNA都是可以的,只是用的trizol和提取组织细胞中的不一样. 你尝试搜索一下Trizol LS,看看是不是你需要的.
邱唐18849367480问： 基因芯片细胞样品送检前是否应该加trizol液 - ？
安阳县百宁回答： 这样做降解的可能很大.你可以自己提取RNA,干冰运送.如果是细胞,建议保存在RNALATER溶液,室温下可以保存寄送.
邱唐18849367480问： trizol法提取RNA时在哪一步加入DNase来去除gDNA? - ？
安阳县百宁回答：[答案] 如果操作得当,一般RNA产物很少有DNA污染的.如果OD比值显示有污染,可以尝试在重悬RNA团块时用含DNase I的buffer切一会儿试试,最后重新用酚氯仿异戊醇抽提一次,最后用无水乙醇沉淀再离心重悬,但是不建议重新抽提,最好从优化正常...
邱唐18849367480问： TRIzol法提取流感病毒RNA每个步骤详细注意事项? - ？
安阳县百宁回答： 三、Trizol法提取法(这是提禽流感病毒的步骤,供参考) Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.1、取鸡胚尿囊液,加入5-10倍体积Trizol液,混匀;2、室温放置5分钟,然后以每1ml Trizol液加...
邱唐18849367480问： 怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA - ？
安阳县百宁回答： 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...
邱唐18849367480问： Trizol法提取RNA操作步骤? ？
安阳县百宁回答： 动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染.RNA可...
邱唐18849367480问： trizol方法提取RNA过程中哪一步加DNase处理 - ？
安阳县百宁回答： 我的方法里没用DNase,效果也不错,你可以参考一下:取约5*106个细胞,经PBS洗涤后,加入800μL TRIzol,混合后室温放置5分钟,再加入196μL氯仿,振动15至30秒,室温放置2至3分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,小心将上层液体转移至新管中,加入500μL的异丙醇,轻弹使其混匀,室温放置20分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,此时RNA沉淀于管底形成胶状小球,弃掉上清,用75%的乙醇清洗RNA沉淀,以4℃,8 000*g离心5分钟,弃掉上清,快速干燥RNA,加入30至50μL无RNA酶的水溶解RNA,用紫外分光光度计测量RNA浓度及OD260与OD280的比值.
邱唐18849367480问： trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多？
安阳县百宁回答： 1 血要新鲜.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,直接加三氯甲烷,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时,或再适当延长一点时间.迅速离心,之后加75%乙醇.只洗一遍,洗2遍易损失部分RNA. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系.干燥一会就迅速加DEPC水少量.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存. RNA直接冻存会降解.也会影响以后反转的效率.
邱唐18849367480问： 为什么.trizol提取RNA 经典三条带显示rna完整性？
安阳县百宁回答： 电泳时,三条带中,核糖体RNA(rRNA)在距离胶孔较近的位置上,28s、18s为核糖体的大、小两个亚基,第三条带,也就是最下面那条为5.8s和5s(以上为真核生物).因为长度差距不大,故很难在电泳中区分出来. 在提取过程中,有时会出现RNA酶的污染,导致RNA降解.降解时,越大的RNA越容易降解,且降解为较小的片段,在电泳时也会跑得更快. 所以,电泳时,若缺失28s条带,28s条带亮度较弱,5s和5.8s条带变强或条带下方有弥散,则说明RNA完整性被破坏.且条带越弱,越模糊,说明RNA完整性越差,RNA中所含的信息就越不完整
