pet32a+his标签蛋白大小

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钊盆18757626876问： pET - 32a携带标签大小究竟是多少? - ？
和林格尔县德路回答： xiewen83(站内联系TA)我也不知道,学习一下!zysshine(站内联系TA)6个组氨酸和19KD左右的硫氧还蛋白再加上你的 目的蛋白sin_007(站内联系TA)载体上有Trx.Tag , His.Tag , S.Tag. trx-tag 有12KD,2个HIS标签,每个有0.8KD,若...

钊盆18757626876问： 用pet - 32a做载体,自己本身的序列有44kda,表达的蛋白应该多大 - ？
和林格尔县德路回答： 用pet-32a做载体,自己本身的序列有44kda,表达的蛋白应该多大1)噬菌体DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表达菌株,噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株,构建好的表达载体可以直接转入表达菌株中,诱导蛋白的表达方式与lac启动子一样都是iptg诱导.2)表达菌株BL21(DE3)上带有lacI基因,T7 RNA 聚合酶编码基因以及lacUV5启动子,lacUV5启动子可以启动T7 RNA 聚合酶的表达;3)表达质粒如pET-28质粒带有T7启动子和编码阻遏蛋白lacI的基因,在插入目的基因后,lacI是失活的;

钊盆18757626876问： 用pET - 32a表达含起始密码子的目的蛋白时,翻译是从载体上的起始密码子开始还是从目的蛋白上的开始? - ？
和林格尔县德路回答： 当然是从载体上已有的融合蛋白开始,你的目的蛋白是在Trx和His-tag后面的

钊盆18757626876问： pet载体原核表达基因的终止密码子要加吗 - ？
和林格尔县德路回答： 主要是看载体谱图和你自己需要的,一般pET系列载体有时候会为了表达的蛋白纯化方便,会在你的蛋白C端后面添加一些标签(如His Tag),这些标签后面都带有终止子.如果你觉得你不需要载体所自带的这些标签,你可以自己添加上终止子.如果你需要载体后面的一些东西的话,你可以不添加.当然,有些早期载体是没有带终止子的,需要你自己添加.对于要不要添加终止子,还是那句话,先研究具体载体的图谱结构,根据自己需要来选择添加或者不添加,如果实在看不懂载体结构,那么你就直接添加终止子上去,因为载体如果本身带有终止子的话也在你的序列后面,对你的蛋白本身并没有影响.

钊盆18757626876问： pgex - 4t - 2诱导蛋白标签多大 - ？
和林格尔县德路回答： pGEX系列质粒载体一般是用来构建GST标签的融合蛋白的 GST标签蛋白一般表达出来的分子量为26KDa左右.不管用pGEX系列哪个载体质粒表达出来都差不多大.

钊盆18757626876问： 我做原核表达,PET32a连入目的基因用的是BamHI和SalI两个位点,请问表达时目的蛋白的长度是目的基因加上载？
和林格尔县德路回答： 这说明你的目的蛋白没有表达,因为PET32a空载表达的蛋白就有20KD左右,当然诱导时间长了表达量就会越大

钊盆18757626876问： 【求助】请教:加HIS标签的引物如何设计 - ？
和林格尔县德路回答： ?肿急赴涯康幕?蚶┰龀隼矗??艘院蟠炕?鞍追奖悖?朐谙掠我?锛亲IS标签,那是18个碱基,再加酶切位点和目的基因引物就大约40多个碱基,而我的上有引物加酶切位点也就30多个碱基,这个上下游引物的差别对以后的扩增,克隆P恍徊恢?滥阌玫氖鞘裁幢泶镌靥澹?泻芏嘣靥迳鲜谴鴋istag的,比如pet28a,pet26b,等,这样你只要选择好酶切位点就可以了,如果用NOCI和HindIII的话就可以在后端带histag,如果用EcoRI和HindIII的话就两端都带.

钊盆18757626876问： 跪求原核表达蛋白PET - 32a切除办法.急急急急急急急急急急急急!!？
和林格尔县德路回答： 你是想切掉表达出来的融合蛋白的His,还是想在载体上就把标签去掉啊! 想切掉His可以说不可能,pET载体上就没有提供可用的蛋白酶切位点,而且6个His也不大,应该没事吧.想切标签的话就换GST的吧,那个都是在纯化后切下去的. 要是切载体的话就没法纯化了. His-tagged真的没法切!我们表达的十几kD的小蛋白都带着标签和载体上的一堆氨基酸呢.不知道你做什么用,如果非要除掉那些氨基酸,我觉得要么你换个GST标签的,要么重新设计一下插入的酶切位点,少留几个载体上的序列. 对不起,这事真没什么好办法!

钊盆18757626876问： pet28a载体中连在目的蛋白前的标签和酶切位点有几KD? - ？
和林格尔县德路回答： 3kd左右. 但是通常6*his带大量正电,使得跑SDS-PAGE时电泳行为异常. 所以这个3kd通过电泳是看不出来的.

钊盆18757626876问： 求助蛋白表达中的his标签的作用 - ？
和林格尔县德路回答： his标签蛋白就是:六个组氨酸.一般存在于重组蛋白氮端或碳端,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的.也就是在表达载体上面,特别加六个组氨酸的碱基序列,目的就是纯化.…………………… ……………………………… 更多具体材料请参考: 蛋白表达 http://product.bio1000.com/100182/

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