pcr体系dna加多了会咋样
同源重组简介
同源重组，简称HR，是一种复杂的生物学过程，主要涉及姐妹染色单体或同源DNA分子间的DNA重组。在原核生物细胞中，这个过程由如RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等一系列蛋白质催化，而在真核生物细胞中，关键酶包括Rad51、Mre11-Rad50等。HR反应通常分为三个阶段：前联会体阶段、联会体形成和Holiday结构...
Cr化学式介绍
确切地说，铬的生理功能是与其它控制代谢的物质一起配合起作用，如激素、胰岛素、各种酶类、细胞的基因物质（DNA和RNA）等。铬的生理功能主要有：1.体内葡萄糖耐量因子（glucose tolerance factor,GTF）的重要组成成分：GTF是由三价铬、烟酸、谷氨酸、甘氨酸和含硫氨基酸组成的活性化合物，它能增强胰岛素的...
请问下白血病L2能治好吗?骨髓移植能治好吗!
70年代后联合化疗、维持、巩固治疗等策略逐渐完善，近年来随着新的抗白血病药物的应用，白血病的治疗疗效有了长足的进步，最新研究结果表明，儿童ALL完全缓解（CR）率已达85%-95%。5年无病存活≥50%-70%。成人ALL的CR率接近75%-85%。5年无病存活期≥40%-50%，成人急性髓性白血病的CR率65%-85%。
病毒的增值方式是什么
DNA病毒的RNA病毒在复制的生化方面有区别,但复制的结果都是合成核酸分子和蛋白质衣壳,然后装配成新的有感染性的病毒。一个复制周期大约需6～8小时。 (一)双股DNA病毒的复制 多数DNA病毒为双股DNA。 双股DNA病毒,如单纯疹病毒和腺病毒在宿主细胞核内的RNA聚合酶作用下,从病毒DNA上转录病毒mRNA,然后转移到胞浆核...
同源重组构建质粒原理是什么?
非姐妹染色单体 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等，以及真核生物细胞内的Rad51、Mre11-Rad50等等。同源重组反应通常根据交叉分子或Holliday结构（Holliday Juncture Structure) 的形成...
【手把手教你发高分文章】5步法教你构建KO细胞系
gRNA可以识别靶基因区域并将Cas9引导至DNA的靶部分。对于gRNA的制作，需要设计和合成gRNA寡核苷酸序列。然后将合成的寡核苷酸克隆到合适的表达载体中并验证寡核苷酸序列。研究人员可以用几种不同的形式去构建 敲除细胞株 ，如单gRNA，双oligo系统的cr:tracrRNA，体外转录 RNA，质粒和 慢病毒 。 其中，基于...
谁能帮我解释Cr+6对人体的危害?
3.促进蛋白质代谢和生长发育 某些氨基酸掺入蛋白质受铬的影响。在DNA和RNA的结合部位发现有大量的铬，提示铬在核酸的代谢或结构中发挥作用。铬对最适生长也是需要的，缺铬动物生长发育停滞。需要人群 血糖高、血压高的人可适当补铬。生理需要 中国营养学会2000年制订铬的适宜摄入量为50ug\/d，可耐受最...
同源重组!在线等!～～～
同源重组（Homologus Recombination) 是指发生在姐妹染色单体（sister chromatin) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化，如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等；以及真核生物细胞内的Rad51、Mre11-Rad50等等。同源重组反应通常...
同源重组应用之基因敲除
基因敲除的应用不仅限于停止基因表达，还能引入新基因或定点突变。它可以是将突变基因替换正常基因，或者用正常基因取代突变基因，以研究其影响。基因敲除技术的发展与DNA同源重组原理的运用密切相关。1980年代中期，胚胎干细胞（ES细胞）的成功分离和体外培养为这一技术提供了基础。1985年，哺乳动物细胞中同源...
悬赏50分!大家帮帮忙!有几道肿瘤学的名词解释和简答题帮忙答一下!谢...
也称杂合性丧失(loss of heterozygosity,LOH),与同一对象的非肿瘤性DNA相比较,肿瘤DNA中杂的合基因座上缺少或夫丧失两个区别的等位基因之一。Allogeneic transplant? 同种移植,从一个体移植细胞、组织或器官给另一个同的个体,在受体中,细胞、组织和器官继续有功能能作用。All-trans-retinoic acid(ATRA)? 全反式维...
乌苏市珍芪回答： 没什么影响~但是不能太多~模板正常量要尽量少~毕竟PCR是指数扩增~
攸货17256183422问： PCR时人模板DNA的量加到5μg会不会有点多? 用的是TaKaRa Taq,50ul的反应体系 - ？
乌苏市珍芪回答： 5μg的确有点多,看来你的DNA原液的浓度很高,一般PCR需要的模板量是有一定范围的,也是根据你要做的分子实验所需的PCR情况而不同的,模板量太高也许会有拖带或变性不完全现象,50ul你可以试着DNA终模板量为1μg或做几个不同模板量的梯度PCR,看看哪种效果最好,得以优化DNA模板量!
攸货17256183422问： 模板DNA过高是否会导致PCR产物减少 - ？
乌苏市珍芪回答： 博凌科为-为你解答:会的.1.模板浓度过高,引物就更多的与模板结合而与PCR产物结合的少,是的前几个循环的扩增数较少;2. 过高的模板会螯合Mg离子,降低Taq酶的活性3..会产生非特异性扩增
攸货17256183422问： 如何消除PCR的拖尾 - ？
乌苏市珍芪回答： 消除PCR拖尾的方法: 1、纯化模板 2、更换Buffer 3、适当提高退火温度 4、适量用酶 5、适当降低dNTP和镁离子的浓度 6、减少循环次数 PCR拖尾产生的原因: 1、模板不纯 2、Buffer不合适 3、退火温度偏低 4、酶量过多 5、dNTP、Mg 2*浓...
攸货17256183422问： pcr产物酶切 - ？
乌苏市珍芪回答： 体积与质量换算肯定是需要测浓度的.你需要准确计算的话就像楼上说的一样,用紫外分光光度计测DNA浓度.其实酶切的浓度不用算得那么精确,DNA加多了可以多反应一会嘛.你可以通过PCR产物的电泳条带亮度估算一下大致的浓度(与已知浓度的Marker比较),由此算出的DNA浓度用来酶切是没有问题的.
攸货17256183422问： PCR - SSCP时,向聚丙烯酰胺凝胶中点的PCR扩增产物为什么不能过多(有资料上这样说 但没给原因 也没查到)? - ？
乌苏市珍芪回答： 2ul如果是DNA的量确实够了,再加上buffer保持再10ul以内就可以了,具体的要根据你DNA的浓度来决定.上样量大了最有可能的结果就是电泳时条带跑不开.你如果希望加大上样量,还不如跑琼脂糖胶,而且你只是检测扩增产物而已,水平胶也OK的.
攸货17256183422问： PCR产物的酶切问题 - ？
乌苏市珍芪回答： PCR-RFLP技术我曾经做过,说实话这并不是一个稳定有效的鉴定方法,当时我也遇到和你一样的问题. 有这样的情况,一种是你选择酶的时候选择错误,在你该段基因上根本不存在这个酶切位点. 二是你根据别人发表序列确定了存在该酶切位点,但是因为基因突变等情况,导致你的病例酶切位点发生变化. 三是即使你病例存在了酶切位点,因为酶切体系的不合适,比如底物浓度过高,酶失活等,使得酶切失败.
攸货17256183422问： 请问大神,在DNA的PCR扩增反应中加入过量的Taq酶会不会发生什么严重的后果? - ？
乌苏市珍芪回答： 正常情况下如果酶量偏高则会出现很多非特异性扩增,比如引物二聚体、非目的片段等,跑胶的时候也会出现很多乱七八糟的条带,但是如果酶量非常的多,则会对反应产生抑制作用,就像可逆反应一样,酶量太多会抑制反应的正向进行,严重的时候甚至没有目的条带,加酶的时候尽量按照产品说明书去配,这样可以有效避免上述发生可能性.
攸货17256183422问： 錭dna的纯度,浓度对pcr扩增结果成败起着什么作用 - ？
乌苏市珍芪回答： 做PCR的话,模板DNA要加得少一些,加多了会P不出来.
攸货17256183422问： PCR原理为什么不能持续复制?为什么只能复制三十多次就不能继续了呢? - ？
乌苏市珍芪回答： 1.酶有半衰期,时间长了活性就会下降 2.体系中DNA浓度高了,就会面临非特异性扩增的问题
