2000bp+marker
作者&投稿：都雷 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
毋枯15562382002问： dna扩增时的marker怎么使用 - ？
湘潭市黄藤回答： 你说的是分子量DNA marker吧,主要是用来指示扩增产物片段的大小,用的比较多的是200bp DL,就是200bp到2000bp,共10个条带.你上样的时候单独加在样品旁边的孔里.
毋枯15562382002问： AL2000 DNA Marker使用起来方便吗?博凌科为这个品牌的好不好? - ？
湘潭市黄藤回答： AL2000 DNA Marker 为已含有1*loading Buffer的DNA溶液,可取5μl直接电泳,使用十分方便.AL2000 DNA Marker 由DNA片段2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp以及100bp构成,每条带的DNA量约为50ng.但是在使用时要注意: ...
毋枯15562382002问： 电泳时marker是如何选择的?100bp DNA ladder是指什么 - ？
湘潭市黄藤回答： 电泳时marker选择方法: 如果是核酸marker比较简单吧,就是看marker条带的大小和你的目标条带的关系,尽量选择目标条带接近分子量的marker,或是在目标分子量附近条带较多的marker. 另外就是,如果目标分子量很小,凝胶通常选择的浓...
毋枯15562382002问： PCR扩增1000bp左右的产物反应体系和温度一般怎样设定? - ？
湘潭市黄藤回答： 反应体系要看你引物和模板的量、性状,一般反应总体积为25微升的话,引物各1微升,10*buffer 2.5微升即可,DNA聚合酶参照其说明书加量,一般0.3-0.5微升. 循环参数:94°变性30-45s足够,72°延伸也可设45s-1min,复性温度很关键,要看引物的特性(G+C%、是否容易形成发卡、二聚体等)和特异性(与模板DNA的同源性)等,一般在50°左右. 此外,要根据出带与否以及带的亮度、性状(sharp与否)不断调整退火温度和Mg的浓度.
毋枯15562382002问： dna marker Ⅰ和dna marker Ⅱ这两种产品有什么区别?？
湘潭市黄藤回答： Trans2K Plus DNA Marker由8条线状双链DNA条带组成(100 bp,250 bp,500 bp,750 bp,1000 bp,2000 bp,3000 bp,5000 bp);Trans2K® Plus II DNA Marker由9条线状双链DNA条带组成(100 bp,250 bp,500 bp,750 bp,1000 bp,2000 bp,3000 bp,5000 bp,8000 bp).
毋枯15562382002问： 如何通过电泳对PCR的产物大小进行检测?？
湘潭市黄藤回答： 通过电泳进行产物定量只是相对的大概估算,一般的marker都有这样的功能,比如你的产物小于2000bp的话,你在泳道加入5ul 的TAKARA的DL2000marker,其中最亮的一条带750bp含量约为150ng,其他的条带约为50ng,根据你的条带的明暗和marker进行比较,即可粗略的估算你的产物的量.
毋枯15562382002问： 我要p一个2000+bp的片段 pcr条件怎样设 - ？
湘潭市黄藤回答： 原因分析:二聚体问题,基本可以确定为引物设计不当——你的引物很长,一般2kb的片段,有22bp的引物就足够了,你这么才长的引物,非常容易形成发夹结构,或者其他互补情况,最后形成二聚体.另外,你的引物CG含量有点低,弄到55%会稳定很多.解决方法:首先,你应该尝试低温退火+热启动的PCR方法,具体为:首次循环加热到95度后,暂停PCR,开盖,逐个加入PCR酶,然后降低退火温度,可以做一个梯度,每次降低一度试试.如果上述方法不行,你应该重新设计引物,保证16-18个配对碱基的前提下,用软件模拟避免发卡结构和引物互补,保证GC含量在55%左右.再P不出来,你就查你的目的基因序列去,肯定弄错序列了
毋枯15562382002问： dl2000 dna marker的琼脂糖浓度多少 - ？
湘潭市黄藤回答： 于500bp的片段,一般选择1%的就可以了.可参考如下:凝胶浓度(%) 线性DNA长度(bp) 0:琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分离范围参数.5 1000~30000 0.7 800~12000 1.0 500~10000 1.2 400~7000 1
毋枯15562382002问： DNA ladder 和DNA maker是同样的东西么 - ？
湘潭市黄藤回答： DNA ladder 在不同文献中的含义不很相同.我估计你在问 电泳中的分子量对照的商品名称吧?若这样的话 参考我的答案.DNA maker: 标准分子量的DNA混合物,一般商品按照分子量分段,比如500bp-2000bp , 2500bp-3000bp等,一般含有5-6条DNA. DNA ladder 是指这种混合物中的DNA分子量呈现 等差 特征.比如 500-1000bp 就含有 500 600 700 800 900 1000 bp,step=100bp 而 通常maker则不一定呈现step规律.
毋枯15562382002问： 有些文章中WB结果中有Marker,是怎么做到的 - ？
湘潭市黄藤回答： 可能可以通过下面几个方法实现(仅供参考): 1. 使用预染 Marker,不过分子量不是特别准; 2. 所使用的 Marker 条带与待测蛋白质带有相同的抗原表位,比如都带有 His 融合标签; 3. 可以使用普通的 Marker 转膜使用 丽春红 等染色,然后在膜上标记出 Marker 各条带的位置.
