逆转录pcr实验步骤
PCR鉴定具体操作是什么?怎么用它来鉴定某个基因的表达?
fengzhe79同学只提到逆转录PCR，这只是半定量PCR。mRNA一般使用RT-qPCR进行“定量”PCR。步骤前三步同于“半定量”PCR，第四步PCR的时候，用的PCR试剂，必须带有荧光素，用实时定量PCR仪检测。通过数据分析，得到mRNA的含量。（基因是通过mRNA进行翻译成为蛋白质）...
反转录PCR的操作
1. 总RNA的提取。2. cDNA第一链的合成（Reverse Transcription）：如今试剂公司有多种cDNA第一链试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。现以GIBICOL公司提供的SuperScriptTM Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。（1）在0.5ml微量离心管中，加入总RNA 1-5μg，...
如何证明是否mRNA反转录cDNA第一链成功
如果要反转录特定的mRNA，就根据它设计特异性引物反转录，这样理论上只有目的cDNA产生。mRNA如何反转录成cDNA？ 逆转录生成单链DNA和MRNA的杂交链 后来单链DNA在与游离的核苷酸合成双链 mRNA反转录形成cDNA的步骤 mRNA反转录形成cDNA的步骤如下： 将mRNA置于PCR仪中，经过95度变性、72度延伸、Tm温度...
求助Real-Time PCR的详细步骤及注意事项
实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物检测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。主要实验步骤如下：1. 设计并合成Realtime PCR引物。2. 引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶进行含SG（SYBR&#...
HIV核酸检测的HIV核酸检测方法及程序
实时荧光定量PCR扩增的实验检测过程可分为:(1)样品制备,抽提和浓缩目标RNA分子,并除去可能存在的抑制因子。(2)Real-time PCR,检测PCR的产物使用荧光标记的寡核苷酸探针。检测的原理基于荧光信号增长曲线与循环数相关。(3)RT-PCR反应,病毒RNA利用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA,然后通过DNA聚合酶对特定片段进行扩增。(4...
mRNA反转录形成cDNA的步骤
mRNA反转录形成cDNA的步骤如下：将mRNA置于PCR仪中，经过95度变性、72度延伸、Tm温度退火，来回30~35个循环，最后4度就能得到反转录的cDNA。
rt pcr的扩增检测需要首先经过什么程序后才能进行pcr循环?
1、PCR引物设计 PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。引物设计的基本原则：引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。引物...
转录组学分析的流程?
结果解释和验证：解释分析结果并进行验证。这可能涉及到进一步的实验验证，如实时定量PCR（qPCR）验证差异表达基因；或进行功能实验验证，如基因敲除、过表达、RNA干扰等.转录组学分析流程因实验目的、技术平台和数据分析方法的不同而略有差异，但总体上是以上的基本步骤。这些步骤的设计和选择应根据研究问题...
求RT-PCR 流程和注意事项
记得我开始我的RT-PCR时,按常规方法,提取总RNA后,首先用自己设计的下游引物进行逆转录,不断改变反应条件,进行了N次均没有结果。后来考虑到 本人的克隆的PCR的片断位于我们实验另一位同学克隆的片断当中,而该同学已经用RT-PCR克隆出她的片断(尽管她用这些RT-PCR产物做模版再进行 PCR时也没办法重复出她的产物),...
荧光定量PCR的操作步骤
荧光定量PCR 实验步骤： ①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA...
蚌埠市甘油回答： 是RT-PCR啊. 一、实验器具与材料: 1、移液枪:1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头:1ml、200μl、20μl 3、匀浆管:5ml 4、吸头台:放置1ml吸头的一个,放置20μl吸头的一个 5、EP管:1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶:2个60ml的棕色...
明瞿13424909733问： 反向PCR怎么做 - ？
蚌埠市甘油回答： 反向pcr(inverse pcr)反向pcr是一种多聚合酶链式反应(pcr)应用的方法,可使已知序列的核心区边侧的未知rma成几何级数扩增.用适当的限制性内切裂解含核心区的rma,以产生适合于pcr扩增大小的片段,然后片段的末端再连接形成环状分子.pcr的引物同源于环上核心区的末端序列,但其方向可使链的延长经过环上的未知区而不是分开引物的核心区.这种反向pcr方法可用于扩增本来就在核心区旁边的序.
明瞿13424909733问： RT - PCR原理及操作 - ？
蚌埠市甘油回答： 原理:RT-PCR 为反转录RCR(reverse transcription PCR)和实时PCR(real time PCR)共同的缩写.逆转录PCR,或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR),是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条...
明瞿13424909733问： 谁有半定量RT - PCR的方法步骤,谢了,急用 - ？
蚌埠市甘油回答： 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒精脱水,室温干燥. 2)原位扩增: (1)切片滴加特异性序列引物30μLPCR扩...
明瞿13424909733问： 荧光定量PCR的前试验准备及流程 - ？
蚌埠市甘油回答： 首先是获取菌体,再提总RNA,不用再分离mRNA,直接做反转录RT-PCR,得到cDNA后直接进行荧光定量PCR. 得到的得到cDNA可以保存的时间比较长.这样荧光定量PCR就可以集中一起做.
明瞿13424909733问： rt pcr的扩增检测需要首先经过什么过程后才能进行pcr循环? - ？
蚌埠市甘油回答： RT-PCR 称逆转录聚合酶链式反应 1、从RNA(或mRNA)反转录合成cDNA第一链: 2、于95℃加热5~10min,灭活反转录酶,使RNA—cDNA杂交体变性,然后迅速冰浴冷却.扩展资料 影响因素 RT-PCR反应受多个因素影响,如硫酸镁的浓...
明瞿13424909733问： 逆转录PCR的PCR各步骤的目的是什么呢? ？
蚌埠市甘油回答： 一步法操作简便,而且可以降低反应的污染风险,价格相对来说也贵一点,BIOG的一步法荧光定量PCR试剂我们实验室用过,实验效果的确还不错,特别方便.
明瞿13424909733问： pcr的实验步骤是什么样子的?pcr实验步骤 ？
蚌埠市甘油回答： BIOGHC Elitefast SYBR Mix包含dNTP Mix、Mg2 、SYBR Green I;BIOGHC Elitefast Enzyme Mix包含BIOG超级逆转录酶、RNase 抑制因子和BIOG热启动聚合酶.一般来说...
明瞿13424909733问： pcr技术扩增 - ？
蚌埠市甘油回答： PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95度时解旋,55度时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至72度左右DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链.由PCR技术制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能...
明瞿13424909733问： 要做Real - time PCR,都要准备什么? 已解决 - ？
蚌埠市甘油回答： 细胞按要求培养,抽RNA, 反转录为cDNA.有细胞计数,测RNA 浓度(分光光度计)等环节.选择反应物,待测样本:0hr, P4, L4, P12, L12, P24, L24, P36, L36 九种 阴性对照:即无模板对照, NTC 作为标准的样品:如果有必要做标准曲线...
