HIV核酸检测的HIV核酸检测方法及程序

随着生物技术的发展,核酸检测得到了人们越来越多的重视,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染,而且比P24抗原检测方法更灵敏。简单的说就是病毒感染人体后，一般情况下可通过一系列检测被发现，而最早能被检测到的是病毒核酸。现有的酶联免疫等血清学检测方法检测的是抗原或抗体，而核酸检测技术检测的是病毒核酸，所以能更早地发现病毒感染。HIV核酸检测将艾滋病病毒的检测“窗口期缩短至11天，并且核酸检测这项技术目前可将乙肝、丙肝病毒的检测“窗口期”分别由原来的50天、72天缩短到25天、59天。血液安全由此可得到更好保障。

　　不是最好的方法，有些时候感染者是测不出核酸的。要查抗体，无手术、大出血，一般人6-8周足以。否则请等三个月。
　　如果没有高危（无套XJ）就不用查了，恐多了不好。如果确实高危了，又想补救一下，请按如下方法：
　　艾滋病病毒暴露后的预防性用药
　　（一）工作中发生艾滋病病毒（HIV）暴露（如针头刺伤）后，应请专家进行危险评估，决定是否需要用药及怎样用药。
　　（二）选择药物，齐多夫定（AZT）是已被证明可以减少针头刺伤后HIV感染的药物，现已证明AZT加拉米夫定（3TC）具有更强的抗病毒活性，而且3TC的耐受性很好，一般不会增加预防用药的毒副作用，这一组合更具合理性。双汰芝就是含有AZT和3TC两种药物的联合制剂。
　　（三）确定方案，暴露后预防性用药的推荐方案是至少两种药物。如果伤害程度严重，应使用AZT+3TC，再加一个蛋白酶抑制剂（PI），这样的组合具有更强的抗病毒活性，并且可以防止因污染源中的病毒对AZT或/和3TC耐药而发生的治疗失败。在我国因获准的药物品种有限，目前可采用的基本用药方案是单用双汰芝，强化用药方案是用双汰芝，同时合并使用蛋白酶抑制剂佳息患（茚地那韦）。处方如下：
　　1、 基本用药方案
　　两种逆转录酶抑制剂，使用常规治疗剂量，连续服用28天。如双汰芝（AZT与3TC联合制剂）300 mg/次，每日2次，用药时间为连续服用28天（或参考中国疾病预防控制中心抗病毒治疗指导方案）。本程序适用于轻度低危暴露。
　　2、 强化用药方案
　　基本用药加一种蛋白酶抑制剂，如佳息患或利托那韦。均使用常规治疗剂量，连续服用28天。本方案适用于严重暴露。
　　（四）用药时间及注意事项
　　1、 暴露后预防性用药的开始时间越早越好，最好在意外事故发生后1～2小时之内。动物实验显示，预防用药的时间推迟至24～36小时之后将无预防作用。不过，美国疾病预防控制中心仍推荐，高危的职业性暴露后1～2周仍应该给予预防用药。剂量同前。用药一般为四周。
　　2、 育龄妇女使用AZT作为预防用药期间应避免或终止妊娠。动物实验表明AZT可使怀孕的小鼠增加癌症的危险。在妊娠期间服用3TC和佳息患的安全性报告很少。
　　3、 每种药的详细用法和注意事项见药品说明书或咨询有关专家


　　每天都上演很多高危事件，而高危刚刚过后，人们都会后悔不已。接下来能做啥，疾控中心的大傻子医生可能告诉你，等3个月！于是还没等到3个月大家都被恐死了。疾控中心的医生和一些综合医院的医生很不负责，本身对有可能感染艾滋病的人就持有排斥的态度。更不会提出合理的补救方案，就告诉你等死。
　　其实，如果及时发现自己有高危行为，并有可能感染的话，应该参照下面的方法：

　　在怀疑自己有可能被艾滋病感染后的24小时～72小时内，应立即采取补救措施。
　　（一）局部处理
　　1、立即用肥皂和清水冲洗伤口或沾污的皮肤。若发生粘膜暴露，应用生理盐水反复冲洗。
　　2、若伴有皮肤破损，则应在伤口旁轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，再用肥皂液和流动水进行冲洗；禁止进行伤口的局部挤压。
　　3、受伤部位的伤口冲洗后，用消毒液（如75%酒精或0.5%碘伏）进行消毒，并包扎伤口。
　　（二）预防性用药
　　根据暴露级别和暴露源病毒载量水平对发生艾滋病病毒职业暴露的人员实施预防性用药。
　　1、预防性用药分为基本用药程序和强化用药程序，由艾滋病病毒职业暴露防护技术小组根据职业暴露情况确定。
　　2、发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，可以不使用预防性用药；发生一级暴露且暴露源的病毒载量水平为重度或者发生二级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度时，使用基本用药程序；　　发生二级暴露且暴露源的病毒载量水平为重度或者发生三级暴露且暴露源的病毒载量水平为轻度或者重度时，使用强化用药程序；　　暴露级别与暴露源的病毒载量水平不明时，可以使用基本用药程序。
　　3、预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早使用（最好在1-2小时内实施）。对于感染危险性很高的暴露者，即使间隔时间很长也应考虑使用预防性用药。预防性治疗用药时间应持续4周。
　　4、用药后，若证实暴露源未感染艾滋病病毒，则应立即中断治疗。用药期间若出现毒副作用，应在专家的指导下，减少剂量或更换药物种类，并详细记录药物毒副反应情况。
　　5、预防性用药期间，应避免怀孕，妊娠3个月内者建议终止妊娠。
　　6、预防性治疗期间和服药两周后应进行全血和肝、肾功能检测。


　　艾滋病病毒职业暴露紧急处理措施
　　2010-12-07 18:55:19 作者：佚名 来源：本站整理
　　绝密：名师+真题=通过检验资格考试

　　坚持预防为主和安全操作，是避免艾滋病防治工作中因职业暴露感染艾滋病病毒的重要措施。现已证明，职业暴露后感染艾滋病病毒的危险性是存在的，但是发生率很低，这取决于暴露的性质、接触病毒的多少等诸多因素。及时
　　坚持预防为主和安全操作，是避免艾滋病防治工作中因职业暴露感染艾滋病病毒的重要措施。现已证明，职业暴露后感染艾滋病病毒的危险性是存在的，但是发生率很低，这取决于暴露的性质、接触病毒的多少等诸多因素。及时联合使用2至3种抗-HIV药物，可以明显降低实验室和医护人员职业暴露后感染艾滋病病毒的危险性。
　　一、职业暴露是指实验室、医护、预防保健人员以及有关的监管工作人员，在从事艾滋病防治工作及相关工作的过程中意外被艾滋病病毒感染者或艾滋病病人的血液、体液污染了破损的皮肤或非胃肠道粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、体液污染了的针头及其它锐器刺破皮肤，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情况。
　　上述人员职业暴露后，存在感染艾滋病病毒的危险性，但实际感染艾滋病病毒的机率是很低的。研究资料表明，医务工作者被艾滋病病毒污染的针具刺伤后，发生艾滋病病毒感染的机率为0.33%，粘膜表面暴露的感染艾滋病病毒的机率为0.09%，无破损皮肤暴露者无发生艾滋病病毒感染。影响针头刺伤后的危险性因素包括：伤口的深度；有可见的血液从伤口溢出；针头刺破了静脉或动脉；污染源来自于晚期艾滋病病毒感染者。
　　二、艾滋病病毒暴露后紧急局部处理：
　　1、用肥皂和水清洗沾污的皮肤，用生理盐水冲洗粘膜。
　　2、如有伤口，应尽可能挤出损伤处的血液，用肥皂水或清水冲洗。
　　3、受伤部位的消毒：伤口应用消毒液（如70%酒精，0.5%碘伏等）浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。被暴露的粘膜，应用生理盐水或清水冲洗干净。
　　三、暴露后预防性用药
　　抗艾滋病病毒药物的使用，是作为减少HIV职业感染的最后一个环节。暴露后预防性用药的推荐方案是至少两种药物。在我国因获准的药物品种有限，目前可采用的基本用药程序是单用双汰芝（两种逆转录酶抑制剂的联合制剂），强化用药程序是用双汰芝的同时合并使用佳息患（蛋白酶抑制剂）。
　　暴露后预防性用药的开始时间越早越好，最好在意外事故发生后1~2小时之内。预防用药的时间推迟至24~36小时后将无预防作用。由于上述药物的毒副作用较大，因此确定使用适应症非常严格。
　　数据分析表明，医护人员对艾滋病病毒和艾滋病病人从事医疗和实验检测活动是比较安全的。执行严格的安全操作及防护措施，医护及检验等人员的暴露事件是可以避免的。当不慎受到暴露后，除立即进行局部处理外，还应及时报告，以得到进一步处理和追踪随访。

　　请尽量不要高危，请帮忙转发，希望大家都平安！ 再次强调没有高危不用查了！就是因为恐的人多，这个阻断方案才推广不了。这方案很多权威不会说出来，但是他们自己要是病毒暴露了，你不让他们吃药，他们会杀你全家，哎，希望大家都平安

1.1 方法和试剂
1.1.1 方法
（1）检测方法为商品化试剂盒和实验室自建方法，商品化试剂应严格按说明书操作。下面介绍的方法是实验室自建方法，供参考。
（2）检测血浆或血清样品使用逆转录PCR（RT-PCR）方法，建议第一轮PCR扩增使用RT-PCR一步法；检测血细胞或组织样品使用PCR方法。一般使用扩增两轮的套式PCR方法。
（3）设立阳性、阴性及空白对照。阳性对照为与待测样品同质、含有目的基因的样品；阴性对照为与待测样品同质、不含有目的基因的样品。阳性和阴性对照样品应与待检样品处理程序一致。阴性对照的设置数量应根据实验样品的数量设置在不同的位置。
1.1.2 试剂
（1）PCR引物：一般使用扩增HIVgag和/或pol和/或env和/或LTR等引物。进行RNA逆转录时可使用下游特异性引物或随机引物。引物设计可参考文献或自行设计，应尽量涵盖常见的HIV流行毒株，也可使用兼并性引物。
（2）主要试剂：包括核酸提取纯化、逆转录、PCR所需的试剂。使用商品化核酸提取纯化试剂、逆转录酶反应试剂和PCR扩增试剂。
（3）抗污染试剂：实验室自建检测方法可使用抗污染试剂，参考尿嘧啶DNA糖基化酶抗污染方法。
1.2 扩增目的基因片段
1.2.1 样品的采集和处理
1.2.2 核酸提取
可使用硅胶柱离心、磁性硅胶颗粒分离方法以及自动化仪器等商品化试剂或设备并按说明书操作。提取RNA时应注意防止RNA降解。DNA应置于-20℃保存，RNA和需长期保存的DNA应置于-80℃保存。
1.2.3 逆转录合成cDNA
使用商品化试剂并按说明书操作。逆转录cDNA合成反应需使用逆转录引物、dNTPs、逆转录酶、RNA酶抑制剂、DTT、缓冲液和适量无RNA/DNA酶的超纯水以及RNA模板。在扩增仪或水浴箱中，在规定的温度和时间下进行逆转录反应。建议使用商品化RT-PCR一步法试剂进行第一轮扩增反应。
1.2.4 PCR扩增反应
使用商品化试剂按说明书操作。PCR反应需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、缓冲液、和适量无RNA/DNA酶超纯水、以及模板（DNA或cDNA）。在扩增仪中，按照设定的程序进行扩增。一般使用二次扩增的套式PCR扩增方法。
1.3 扩增产物分析及结果报告
1.3.1 扩增产物分析
扩增产物常用分析方法是琼脂糖凝胶电泳法，与分子量标准比较，判断扩增片段是否在预期的分子量范围内。其它扩增产物分析方法还有限制性内切酶酶切分析、特异性探针杂交分析以及DNA序列分析等。自动化核酸扩增仪使用酶联比色分析或荧光探针杂交等原理测定。
1.3.2 结果判定和报告
（1）实验成立的条件：每一次检测需同时做两个阳性对照、两个阴性对照，只有阳性对照扩增出预期的片段、阴性对照没有扩增出任何片段、双份平行样品结果一致的情况下实验才成立，可以作出核酸阳性或阴性反应结果的判定。
（2）HIV核酸检测阳性：使用商品化检测试剂，发现核酸阳性反应，应该重复采集样品进行复测，复测结果呈核酸阳性反应则判定为核酸阳性，复测结果为核酸阴性反应则判为不确定结果，需进一步随访检测。
（3）HIV核酸检测阴性：只可报告本次实验结果阴性。
（4）应在完成检测后7个工作日内发出检测报告。 2.1 方法
HIV核酸定量检测主要基于靶核酸扩增RT-PCR和信号放大扩增两种方法。国内常用的方法中，NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1采用国际单位（IU/ml），与NASBA的拷贝数关系基本为1:1；Amplicor Cobas 的拷贝数约为1.2～1.5国际单位；bDNA方法的拷贝数约为0.8～1.0国际单位。不同方法的关系与HIV的亚型有关。
2.2 试剂
必须使用经中国药品生物制品监督管理局注册批准的商品化试剂并严格按说明书操作。
2.2.1 靶核酸扩增试剂和性能
（1）RT-PCR扩增试剂
1）Amplicor HIV-1 Monitor v1.5（RT-PCR微孔板捕获比色分析法），核酸手工提取（异丙醇沉淀），比色分析测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。标准法的检测线性范围是400～750，000；超敏法的线性范围是50～100，000 RNA拷贝/毫升。
2）COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5, 核酸手工提取（异丙醇沉淀），仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。标准法的检测线性范围是400～750，000；超敏法的线性范围是50～100，000 RNA拷贝/毫升。
3）COBAS AmpliPrep/COBAS Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 （COBAS Amplicor 分析仪）,仪器提取核酸，仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。标准方法的检测线性范围是400～1，000，000；超敏方法的线性范围是50～100，000 RNA拷贝/毫升。
以上三种试剂均采用基于PCR扩增靶核酸检测法，仅在设备的使用、自动化程度和样品制备的方法有所不同。
4）COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test（实时荧光探针RT-PCR分析法）, 仪器提取核酸,实时荧光探针PCR扩增仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，可扩增HIV-1M组的A-H基因亚型。检测线性范围是40～10，000，000 RNA拷贝/毫升，比上述三种方法的检测线性范围要宽，样品可不经稀释一次完成检测。
以上四种试剂均使用一个内部定量标准品，1个阴性、1个弱阳性和1个强阳性外部外部质控品。均使用dUTP/UNG防污染试剂。
5）LCx HIV RNA Quantitative Assay（竞争性RT-PCR微颗粒酶免疫分析法）,手工或仪器提取核酸（活化硅胶柱纯化），仪器测定。扩增靶核酸位置是pol（整合酶）基因区，可扩增HIV-1基因M组的A-G亚型和0组病毒，尤其可检测M组C基因亚型和一些重组病毒。检测线性范围是50～1，000，000 RNA 拷贝/毫升；使用一个内部定量标准品和六个外部定量标准品。
6）RealTime HIV-1 Assay（实时荧光探针RT-PCR分析法）,使用独特的双链荧光探针。手工或仪器提取核酸（磁性颗粒纯化），仪器测定。扩增靶核酸位置是pol（整合酶）基因区，扩增HIV-1基因亚型是M组的A-G亚型和0组以及N组病毒。检测线性范围是40～1，000，000 RNA 拷贝/毫升。使用一个内部定量标准品。检测结果与LCx HIV RNA Quantitative Assay结果高度相关。
（2）基于核酸序列扩增试剂（NASBA扩增技术）：以等温方式直接扩增HIV-1 RNA。
NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1（实时荧光探针分析法）, 使用荧光标记的分子信标探针技术检测扩增子。手工或仪器提取核酸（硅胶纯化，异丙醇沉淀）,仪器测定。扩增靶核酸位置是gag基因区，扩增HIV-1基因亚型是M组的A-G亚型。检测线性范围是50～3，000，000 RNA 国际单位/毫升；使用一个内部定量标准品，没有阴阳性外部外部质控品。每次检测8的整数倍样品，直至48个。检测结果与Versant HIV-1 RNA、和Amplicor HIV-1 Monitor v1.5 方法的结果有着高度的相关性。国际上已经推荐使用V2.0试剂盒。
2.2.2 信号放大扩增试剂和性能
Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA（分枝状DNA探针杂交微孔板捕获比色分析法）, 利用分枝状DNA多级信号放大原理。无需RNA纯化和PCR扩增步骤。离心浓缩病毒子并用去垢剂和蛋白酶K消化病毒释放病毒RNA，仪器测定。扩增靶核酸位置是pol基因区，扩增HIV-1基因亚型是M组的A-H亚型，检测线性范围是50～500，000 RNA 拷贝/毫升；使用六个外部定量标准品，1个阴性、1个弱阳性和1个强阳性外部外部质控品。每次可检测12的整数倍样品。
以上试剂均可使用EDTA和ACD作为样品的抗凝剂，NucliSens HIV-1 QT和NucliSens Esay Q HIV-1 v1.1以及Versant HIV-1 RNA 3.0.bDNA试剂还可以使用肝素作为抗凝剂。如果必须使用经肝素处理的血浆样品进行RT-PCR扩增，则必须在样品中直接加肝素酶消化肝素。
2.2.3 实时荧光定量PCR技术
实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值）。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
实时荧光定量PCR扩增的实验检测过程可分为：（1）样品制备,抽提和浓缩目标RNA分子，并除去可能存在的抑制因子。（2）Real-time PCR，检测PCR的产物使用荧光标记的寡核苷酸探针。检测的原理基于荧光信号增长曲线与循环数相关。（3）RT-PCR反应，病毒RNA利用逆转录酶将RNA逆转录为cDNA，然后通过DNA聚合酶对特定片段进行扩增。（4）扩增产物的检测，基于检测阈值的设定，当病毒载量高时，低循环数即能检测到荧光信号，当病毒载量低时，高循环数时才能检测到荧光。循环数与样品载量成线性关系。利用标准品制作循环数与载量的标准曲线就能对样品载量进行定量检测。 使用集合核酸扩增检测技术和方法，利用核酸检测方法的高度敏感性，对高度怀疑感染人群且抗体阴性的样品进行集合核酸检测，可及时发现窗口期感染者。该方法较单份样品的核酸检测具有更高的成本效益。
3.1 样品集合程序
3.1.1 根据预处理样品量，计算预形成一级和二级集合数量，在登记表格上记录一级和二级集合及对应的原始样品编号。
3.1.2 吸取130mL样品，移入标记二级集合的离心管中；10份样品形成一个1300mL的二级集合样品，充分涡旋震荡混匀。
3.1.3 从5个二级集合管中分别吸取210mL样品，移入标记有一级集合的离心管中，形成由50份样品1050mL体积组成的一级集合样品，充分涡旋震荡混匀。
3.1.4 从每个一、二级集合管中吸取500mL集合样品，分装至另一相应标记的离心管，用超敏感核酸检测试剂进行检测。
3.1.5 制备阴性集合外部质控品：使用50份HIV抗体和核酸阴性样品，按上述步骤，分别集合成5个阴性二级集合外部质控品和1个一级集合外部质控品。
3.1.6 制备阳性集合外部质控品：从9份HIV抗体和核酸阴性样品和一份至少含有HIV RNA10c/ml阳性样品中，分别移取130mL加入离心管中，形成一个1300mL的阳性二级集合外部质控品。再分别从4个已制备好的阴性二级集合外部质控品和上述阳性二级集合外部质控品中，移取210mL至标记为一级阳性集合外部质控品的离心管中，形成一级阳性集合外部质控品。
3.1.7 一级和二级阴、阳性集合外部质控品分别用于RT-PCR中每一轮一级和二级集合样品的检测。
3.2 集合样品的检测和分解路线
使用商品化核酸检测试剂，应严格按照试剂说明书操作。按照各商品化核酸试剂集合PCR的方案进行检测，集合样品的数量根据各试剂方案操作。方法简述如下：
3.2.1 用HIV RNA RT-PCR超敏检测方法对一级集合样品进行检测，阳性反应的一级集合样品进入下一检测步骤。
3.2.2 用HIV RNA RT-PCR超敏检测方法对所有组成阳性一级集合的二级集合样品进行检测，阳性反应的二级集合样品进入下一检测步骤。
3.2.3 用HIV RNA RT-PCR标准检测方法检测所有组成阳性二级集合样品的的10份单个样品，确定核酸阳性的单个样品。 HIV感染产妇所生婴幼儿在出生后18个月内可应用HIV核酸（DNA或RNA）检测进行早期HIV感染诊断。尽管HIV RNA检测敏感性在感染早期较高（出生后1个月内），但是HIV DNA检测不受母亲围产期抗逆转录病毒治疗和人乳汁中抗逆转录病毒药物以及婴幼儿预防性抗逆转录病毒治疗的干扰而影响早期诊断。另外，考虑母亲血液污染因素，不推荐使用脐带血进行HIV核酸检测。婴幼儿的抗体检测流程和结果判断见第二章（HIV抗体检测）。
4.1 适用范围
未满18个月的HIV感染产妇所生婴幼儿；未满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染者。
4.2 检测程序及结果报告
4.2.1 于婴儿出生后6周（42天）采集第一份血样本（血样本可制备成DBS或EDTA抗凝全血），送检。
4.2.2 若第一份血样本检测呈阳性反应，尽快再次采集第二份血样本进行检测。若两份血样本检测均呈阳性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”，诊断儿童HIV感染。及时对HIV感染儿童进行追踪和病情监测，将其转介到儿童抗病毒治疗医疗服务机构，并为其提供机会性感染预防等服务措施；若第二份血样本检测呈阴性反应，待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。若第一份血样本检测呈阴性反应，继续提供儿童保健和随访服务，待婴儿满3个月再次采集血样本进行检测。
4.2.3 若婴儿满3个月再次检测呈阴性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”，按照未感染儿童处理，继续提供儿童保健随访服务；于儿童满12个月时，按照“HIV感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”（图4），开始HIV抗体检测，最终确定儿童感染状态。若婴儿满3个月再次检测呈阳性反应，尽快再次采集血样本进行检测。第三份血样本检测呈阳性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阳性”；若第三份血样本检测呈阴性反应，报告“婴儿HIV感染早期诊断检测结果阴性”；分别按照前述流程提供相应服务。
4.2.4 不同时间“婴儿HIV感染早期诊断”检测均呈阴性反应的喂哺母乳的儿童，应在完全停止喂哺母乳后的6周和3个月（若6周时检测结果为阳性可尽快）再次采血进行核酸定性检测，进行早期诊断。儿童满18个月后则可直接进行抗体检测。
4.2.5 如果婴儿第一次采血时已满3个月，但未满12个月，则应尽快在不同时间采集两份血样本；同时将两份血样本送检，按照前述流程进行检测。如果儿童第一次采血时已满12个月，则应首先按照“艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程”（ 图4）进行HIV抗体检测。若两种不同原理或厂家生产的HIV抗体检测试剂检测结果均为阴性，则排除儿童感染；若HIV抗体检测试剂检测结果呈阳性反应，不能通过抗体检测确定儿童感染状态，则可在不同时间采集两份血样本，按照前述流程进行“婴儿HIV感染早期诊断”检测。如果儿童第一次采血时已满18个月，则应按照HIV抗体检测流程（图1）进行HIV抗体检测，无需进行“婴儿HIV感染早期诊断”检测。