蓝白斑筛选只长了白斑

作者&投稿:国呼 (若有异议请与网页底部的电邮联系)

蓝白斑筛选的原理是什么?
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法。野生型大肠杆菌(E.Coli)产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后,突变型大肠杆菌的β半...

蓝-白斑筛选原理
导致载体上的α肽段与菌株中的C-段无法互补,从而丧失切割X-gal的能力,无法形成半乳糖和5-溴-4-靛蓝的反应,这样就产生了所谓的"白斑"。在筛选过程中,我们通过观察菌落的颜色变化来识别是否成功导入并表达出所需的基因,阳性克隆即表现为带有白斑的菌落,这是蓝-白斑筛选的基本原理。

蓝白斑筛选的蓝白斑筛选原理
是重组子筛选的一种方法,一些载体带有β-半乳糖苷酶N端α片段的编码区,该编码区中含有多克隆位点,可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。因此,宿主和质粒编码的片段虽都没有半乳糖苷酶活性,但它们同时存在时。α片段与ω片段可通过α-互补形成具有酶活性...

蓝-白斑筛选概述
在蓝白斑筛选实验中,通常的步骤是将连接产物转化后的细菌接种在含有钙化菌的平板上,在37℃温箱中倒置培养12到16小时。结果显示,只有带有重组质粒的细菌会形成白色菌落,而其他没有重组质粒的细菌则不会出现这种现象。筛选完成后,可以通过挑取这些白色菌落进一步进行质粒的提取和电泳分析,以证实其内部的...

蓝白斑筛选挑蓝斑还是白斑
蓝斑。蓝白斑筛选是一种根据菌落颜色筛选重组子的方法,用于从细菌中筛选质粒,是通过在含有X-Gal-IPTG的LA培养基中,观察菌落颜色来筛选白色菌落中含有的重组子质粒,同时丢弃含有野生型质粒的蓝色菌落,所以挑选蓝斑。

α互补筛选后,很多白斑,为什么说不好?
根据蓝白斑筛选的定义,蓝斑表示无目的基因的空载体质粒成功转化大肠杆菌,其数量体现的是质粒穿透细胞膜的能力,白斑除了表示带有目的基因的重组载体的成功转化以外,还表示质粒根本就没进入大肠杆菌细胞。如果白斑很多,蓝斑相当少说明很多质粒都没进入到大肠杆菌细胞,白斑里面很多为假阳性。

蓝白斑选择中重组体和空载体的颜色分别是什么
在该筛选方法中重组体和空载体的颜色分别是白色和蓝色。在蓝白斑筛选中,使用的培养基含有X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷),这是一种可以被β-半乳糖苷酶切割的底物,切割后会产生深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝,使菌落呈现蓝色。对于空载体(即未插入外源DNA的质粒),当其在宿主细胞(...

在蓝白斑筛选实验中,转化了重组质粒的细菌长出的菌落为()
在蓝白斑筛选实验中,转化了重组质粒的细菌长出的菌落为()A.蓝色 B.白色 C.黑色 D.红色 正确答案:B

在含有x-gal 和iptg 的筛选培养基上,为什么会长出蓝色菌落,和白色菌 ...
这个是蓝白斑筛选试验。蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS),它并...

蓝-白斑筛选适用方面
在基因工程领域,蓝白斑筛选是一种常用的技术,其主要应用于筛选特定基因的表达。设计的筛选策略是基于一种特定的缺陷型菌株,即β-半乳糖苷酶缺陷型菌株。这种菌株的染色体基因组中,编码β-半乳糖苷酶的基因发生突变,导致编码的酶失去活性,无法催化X-gal转化为蓝色物质。蓝白斑筛选的关键在于载体,如...

陆房13862524872问: 蓝白筛选只有白斑 -
江洲区杏香回答: 是的 我也常遇到这样的情况 我猜想你插入的片段是300-1500BP之间 这样大小的片段是最好连接的 所以有很高的重组率 这是正常的 如果你还不放心可以挑一个单菌落 作一下酶切检定

陆房13862524872问: 蓝白斑筛选实验,结果都是白斑说明所有的细胞都插入基因成功了吗? -
江洲区杏香回答: 我觉得你更可能是培养基出问题了或者其他的蓝白斑筛选不可能所有的都是白斑的,连接效率没有那么高建议你再检查下自己的实验

陆房13862524872问: 蓝白斑筛选实验,结果都是白斑说明所有的细胞都插入基因成功了吗?
江洲区杏香回答: 我觉得你更可能是培养基出问题了或者其他的 蓝白斑筛选不可能所有的都是白斑的,连接效率没有那么高 建议你再检查下自己的实验


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