最后一次pcr为什么一分钟
经过pcr扩增后又扩增一次会有影响吗
没影响。。就是一次一次的复制呗。。
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应?
做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应 －－－ 这个问百题比较好理解，因为在循环结束后，体系中的taq酶可能很多正处于复制状态，如果此时降到室温，将会影响最终产率。所度以再留出5分钟，以使正在复制中的taq酶能够复制完全，以合成更问多的目的分子。--- 看来可能我的表述不够清楚，那我稍...
PCR一定循环数之后有一步5或10分钟的延伸,它有什么作用?什么情况下可 ...
使之前某些延伸不完全的片段扩增完全。我认为是这样在扩增过程中由于活性或者偶然因素，有极少量的DNA片段没有延伸至尾端，这一步就是尽可能的使它们也能延伸到目标长度。如果你的扩增长度很短，可以考虑省略这步
PCR产物作为模板继续PCR反应,稀释前后产物不同,怎么回事?
况且第一轮PCR的产物中会有很多不需要的组分，因此第一轮的产物通常都要进行稀释后作为第二轮的模板，稀释100倍是起步，另外你的PCR体系模板量太大了，10%的模板是很多的，会引入大量第一次PCR的杂质，一般加1~2微升即可。另外第二轮PCR通常设计的引物退火温度要大于第一轮比较好 ...
PCR产物作为模板继续PCR反应,稀释前后产物不同,怎么回事?
A根本没P出来呗 那个条带就是你加进去的模板 模板浓度太高了 光是模板跑胶的亮度跟你目的条带扩增出来的都一样了
pcr扩增实验中为什么最后再加酶啊
酶比较容易失活。即便是耐高温的taq酶，在常温状态下，也有一个最佳时间。先把其他物质加好，最后加酶，一般是考虑到这一点的原因。
pcr最后一个步骤10分钟?
最后延伸 、 在最后一个循环后， 反应在 72℃维持 5-15 分钟。如果你在现场的话，等补充延伸过程运行完直接拿出来一点问题也没有.我们设4℃保温是因为当初没在场，所以要把产物在低温保存着，以防DNA降解，保温这一步是根据自己的情况安排的，有时我晚上做，就直接设定4℃保温过夜（10h）.不会影响...
DNA割胶回收后电泳检测有一条带,然后将回收的DNA做模板再次PCR...
这是模板浓度过高，造成引物相对稀释引起的。将回收产物梯度稀释，再扩增即可。
经过PCR技术扩增之后 为什么要经过3轮才能得到如图中所示DNA分子_百度知...
你好，在PCR扩增中，目标片段的长度主要是由引物的特异性结合来控制的。在第一次扩增中，因为DNA两条链分别只有一条引物结合，这样taq聚合酶理论上是延伸很长的距离的，但由于我们控制了延伸时间，新合成的链不会长的非常多。所以第一次扩增得到的DNA是两条长（原始链），两条中等长（新链）。第二次...
测序反转录后为什么要进行扩增
1、首先测序反转录是由于巢式PCR反应有两次PCR扩增。2、其次从而降低了扩增多个靶位点的可能性(因为与两套引物都互补的引物很少)。3、最后增加了检测的敏感性。
含山县舒神回答： 做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应 ------------------ 这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率.所以再留出5分钟,以使正在复制中的taq酶能够复制...
习琳13219879256问： 做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应?是指整体35次循环结束后的5min延伸反应 - ？
含山县舒神回答：[答案] 做PCR反应为什么在循环结束后要有5min延伸反应------------------这个问题比较好理解,因为在循环结束后,体系中的taq酶可能很多正处于复制状态,如果此时降到室温,将会影响最终产率.所以再留出5分钟...
习琳13219879256问： 做pcr时最后保存4度的时间应该以多少为宜?程序设定是10分钟,我在做PCR时由于赶时间,十分钟还没有到就结束了PCR过程,请问会影响到结果吗? - ？
含山县舒神回答：[答案] 不会影响结果的,你说的那10分钟可有可无,如果你在现场的话,等补充延伸过程运行完直接拿出来一点问题也没有.我们设4℃保温是因为当初没在场,所以要把产物在低温保存着,以防DNA降解.保温这一步是根据自己的情况安排的,有时我晚上...
习琳13219879256问： PCR在每次循环中,变性所用的时间是一样多的? - ？
含山县舒神回答： 有一些问题.在普通PCR中,第一个循环的第一次变性,时间是要比其他循环的变性时间长的,一般为5~10min.其他的每个循环的变性时间是一样的.
习琳13219879256问： 用重叠延伸PCR连接片段为什么不出目的条带? - ？
含山县舒神回答： 因为概率太低了,建议你程序先设置成五个循环94,68,72,时间自定,然后再接正常的PCR循环30个overlapping有好多种做法呢,你试试看不用取出反应液的办法吧,就是我回答里的那五个循环 首先 ,配置体系,酶和引物都加,然后,把第一...
习琳13219879256问： 电转化感受态细胞最后一次洗涤为什么要用10%甘油洗 - ？
含山县舒神回答： 电转化感受态细胞最后一次洗涤为什么要用10%甘油洗 大肠杆菌电转化感受态细胞制备 第一天: 1. 将适合菌株(如XL1-Blue, DH5α)置于LB或其他营养丰富的培养基上,在37°C下过夜培养 2. 高温灭菌大的离心瓶(250-500ml)以备第二天摇...
习琳13219879256问： pcr的关键性技术 - ？
含山县舒神回答： 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失. 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分...
习琳13219879256问： FastDNA03 SPIN kit for Soil 实验操作步骤说明 怎样去除腐植酸 - ？
含山县舒神回答： 试剂准备:1. 使用前先在SEWS-M Wash Solution中加入100 ml 100%的乙醇,混匀.在瓶子上做好标记,密闭储存于室温条件.提取步骤:1. 在样品处理管E中加入至多500 mg的土壤样品2. 将978 μl的Sodium Phosphate Buffer加入到样品处理...
习琳13219879256问： PCR反应最适条件谁了解啊?生物学方面的论坛有哪些？
含山县舒神回答： 在早期进行的PCR反应中,使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段,,即Klenow片段.也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶.这两种酶的共同弱点是对热不稳定性,DNA合成反应只能在370C进行.PCR时每一循环的解链温度都在90C以上进行,...
习琳13219879256问： 片段翻译成中文 - ？
含山县舒神回答： 扩增进行了一个PTC公司- 200 thermocycler (仪)在3000万升反应混合物containing10mM三盐酸( pH值8.3 ) , 1.5氯化镁,氯化钾50毫米, 150毫米的每个核苷酸,每个引物0.3 (合成试剂盒) ,一点○毫升(约100毫微克)模板DNA ,和1U ...
