无酶ep管的原理
双荧光素酶报道系统详解
2. 双荧光素酶检测程序的设定：Protocols Run Promega Protocol DLR-O-INJ OK 3. 将50μl LAR II加入1.5ml EP管中（专用的进口EP管），取10μl 细胞裂解液加入装有LAR II的1.5ml EP管中，吹打2-3次...
用试剂盒提细胞RNA时需做什么准备
准备RNA用的试剂：70%乙醇（用DEPC处理后的水稀释新开封的无水乙醇），DEPC处理后的水，新开封的三氯甲烷等，容器：玻璃试剂瓶需要180度，8个小时以上烘烤 Eppendorf管和“枪头”：RNase-free的管子和“枪头”（可以直接买到）；或者普通的ep管和“枪头”，但是需要DEPC水浸泡后，高温灭菌（121度，...
coip实验原理
四、操作步骤1. 预冷PBS洗涤细胞3次，最后一次吸干PBS;2. 每个含细胞的1.5ml EP管中加入预冷的等体积的IP细胞裂解缓冲液700ul(预先加入5ul的蛋白酶抑制剂)，混合器上4℃裂解30min；3. 16000g，4℃离心15min，取80ul上清作为Input，另分别取300ul及300ul上清于新的1.5ml EP管中，作为IP样及...
酚和氯仿等体积混合后用0.1mol\/l tris·ci抽提,怎么抽提
2) 细菌收集：取1ml培养物于1.5ml EP管,室温8000rpm离5min,弃清,沉淀重新悬浮于1ml TE（pH8.0）（用ddH2O行).3) 菌体裂加入6μl 50mg\/ml溶菌酶,37℃作用2h.再加2mol\/LNaCl50μl,10%SDS 110μl,20mg\/ml蛋白酶K 3μl,50℃作用3h或37℃夜.（菌液应透明粘稠液体）4) 抽提：菌液...
chip实验原理及步骤
e. 关于解交联：虽然说明书上说4小时已经足够，但是我还是希望你可以解交联过夜。因为在那样的环境里，DNA不会降解，过夜解交联更充分些。只是不要忘记在EP管口封上封口膜。f. 关于DNA片段的回收：需要注意的是：样品中SDS样品较高，普通的PCR产物回收试剂盒回收，很有可能会在终的样品中混入SDS，...
GAPDH有什么作用?
3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上均有定位。如在细胞核内,GAPDH参与tRNA出核、mRNA稳定性调节、DNA损伤...
western blotting 的过程和原理
每片NBT\/BICP可溶解于30ml水中,使用前将一片分装在30个EP管中,每张3×9cm的膜取一管配成1ml即可。将PBST或TTBS洗涤过的膜用去离子水稍加漂洗,滤纸贴角吸干,反贴法覆于NBT\/BICP溶液液滴上,并用不透明物体(如报纸)遮挡光线,显色20s后每10s观察一次,至条带明显或有本底出现时将膜揭起置去离子水中漂洗后...
RNA的提取方法步骤及原理.
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成...
提取细菌RNA前所用器皿的准备,普通枪头,怎样变成无酶的?求具体步骤,谢 ...
所有器皿一律需经硅烷化处理。DEPC配制：买来的DEPC是液体装， 取1ml DEPC 加至1000ml蒸馏水，该液体便可以用来浸泡RNA提取过程中所用的EP管，枪头等，需浸泡至少24小时，用时取出，高压15分钟以去除DEPC的毒性。如果是用来配制溶液，也是千分之一的浓度，充分混匀后高压待冷却后便可用于配制溶液。
从-80度冰箱取出的蛋白怎么做wb
从-80度冰箱取出的蛋白要做Western Blot实验，需要先进行组织蛋白的提取和总蛋白的测定。一、组织蛋白的提取：1. 准备组织细胞裂解液，将1000ul RIPA和10ul PMSF加入到1.5ml EP管中，充分混合。如果发现RIPA有沉淀，可放室温半小时或常温水域使其溶解。如果PMSF为粉剂，将其配置成100 mM液体备用。2....
沿河土家族自治县参百回答： 金属、陶瓷器皿:200℃干热灭菌过夜. 枪头等经DEPC水浸泡后灭菌. 详细版本:... 加至1000ml蒸馏水,该液体便可以用来浸泡RNA提取过程中所用的EP管,枪头等,...
娄博17294263007问： 质粒的提取原理 - ？
沿河土家族自治县参百回答： 质粒提取是指去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒. 目录 一、质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA,是进行DNA重组的常用载体.作为一个具有自身复制起点的复制单位...
娄博17294263007问： 过氧化氢同工酶染色机理 - ？
沿河土家族自治县参百回答： 过氧化氢(化学式:H2O2),纯过氧化氢是淡蓝色的黏稠液体,可任意比例与水混溶,是一种强氧化剂,水溶液俗称双氧水,为无色透明液体.其水溶液适用于医用伤口消毒及环境消毒和食品消毒.在一般情况下会缓慢分解成水和氧气,但分...
娄博17294263007问： 质粒DNA的提取方法总共有哪些,回答的全给高分??? - ？
沿河土家族自治县参百回答： 碱裂解法: 此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析.方法如下: 1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基. 2、37℃振荡培养过夜. 3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3...
娄博17294263007问： 细胞总RNA提取用什么方法?？
沿河土家族自治县参百回答： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室. 1、 取出EP管、做好标记 2、 取出细胞、收集上清保存备用 3、 用冷PBS冲洗细胞两次 4、 加入1ml Trizol (24孔板每孔加0.5ml即可),调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清(生化:摇动混匀后室温孵育10min) 详细的操作步骤,生物帮上面有的,底座/架(自动化) http://product.bio1000.com/101206/
娄博17294263007问： 请问环氧乙烷灭菌可以去除RNA酶吗?想用于处理提取RNA之前的用品,譬如收集组织标本用的塑料冻存管. - ？
沿河土家族自治县参百回答： 不可以. 塑料制品用DEPC处理. 将要处理的冻存管或者EP管,泡在0.1% DEPC溶液中,时间尽量在6小时以上,然后带着溶液高压灭菌,灭菌后放在烘箱中,将溶液全部烘干后使用,即可.
娄博17294263007问： 培养细胞如何提取mRNA,如何逆转录?培养细胞提取mRNA的原理是什么?如何用所提取的mRNA进行逆转录? - ？
沿河土家族自治县参百回答：[答案] 1 细胞总RNA的提取 1)、6孔板细胞(CNE-2)汇合度为90-100%时,取出无菌室,去其上清,用PBS洗两次后,每孔加... 用Buffer OW2 400 ul重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀,然后将这些加到套有1.5 ml EP管的SPIN柱子上,高速离心1分钟. 7)、将...
娄博17294263007问： 简答题:酶促反应高效性的机制 - ？
沿河土家族自治县参百回答： 在无酶催化的情况下,底物需要越过一个较高的活化能才能发生反应,变成产物.酶作为催化剂所起的作用就是降低活化能,从而使反应速度加快. 从底物角度来说,当底物进入酶活性中心区域得到集中、浓缩后,由于酶与底物的相互作用,致使两者的构象都发生了变化,此时底物分子内某些基团电子密度发生了变化,形成所谓电子张力,使与之相连的敏感键一端变得更加敏感,更易断裂. 稳定的酶-底物共价中间物,此中间物很容易变成过渡态.使反应活化能大为降低,这样底物就可以越过较低活化能屏障形成产物.同时酶和底物的相互作用时要释放一些结合能,以使酶-底物复合物稳定,同时可用来降低化学反应所需的活化能了.
娄博17294263007问： 无酶水能当dd水用吗? - ？
沿河土家族自治县参百回答： RNase-free dd水是无RNA酶的,dd水是经过两次蒸馏过的超纯水, 去离子水是经过去离子水处理过的基本不含离子的超纯水 一般实验中二者没有区别的. RNase-free dd水的制备过程高纯水加DEPC 37°摇过夜 然后高温灭菌 DEPC水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate,焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水,无色液体.经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质. DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等
娄博17294263007问： 酶切后加热灭活时间长了会怎么样?70度30分 - ？
沿河土家族自治县参百回答： 没有太大影响 EP管的盖子盖紧封严,经常会出现水分丢失严重的问题,尤其是在小体系酶切后金属浴灭活时,灭活后发现EP管里干了,如果是水分蒸发后凝结在管壁上倒好说,轻甩下就哦了
