影响pcr结果的各种因素
影响PCR反应效率的因素有哪些?如何有效地提高PCR反应的效率?
Taq酶具有依赖DNA合成的5’→’3’外切酶活性,因此,模板上有一段退火的3’-磷酸化的“阻断物”,会被逐个切除而不会阻止来自上游引物链的延伸,而对于5’-32P标记的合成寡核苷酸引物,则无论是单链或是与模板复性,都未发现降解,所以该种活性不会影响PCR结果。Taq酶没有3’→’5’外切酶活性,如果发生dNTP错误掺...
pcr的静置步骤少了会影响结果吗
pcr的静置步骤少了会影响结果，每一个步骤都是不可缺的，一个步骤错了可使检测结果得出错误结论。影响PCR结果的因素有引物、酶及其浓度、dNTP的质量与浓度、模板(靶基因)核酸模板核酸的量与纯化程度。Mg2+浓度Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响、温度与时间的设置、循环次数。
pcr模板浓度太高会有什么结果
3、抑制性效应：高浓度的模板DNA会对PCR反应产生抑制性效应，影响PCR的进行和产物的扩增。
以下哪些会影响pcr扩增检测的结果标本采集时间
影响pcr扩增检测的结果标本采集时间因素为：1、标本采集时间。2、标本采集部位。3、标本类型和标本采集量。4、采样及运输容器
pcr测定中的污染主要是指
一、污染在PCR中的影响及类型：污染会导致PCR结果的错误解读，主要分为两种类型：外源性污染和内源性污染。外源性污染是指来自实验环境、试剂、仪器等的DNA或RNA污染，内源性污染是指实验样本中存在的未被完全灭活的DNA或RNA。二、外源性污染的来源：1、试剂污染：PCR试剂、引物和探针可能含有外源性DNA...
.取材多少会影响qPCR的结果吗
影响PCR因素，1。引物，引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。2。酶及其浓度目前有两种TaqDNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。3。dNTP的质量与浓度dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如...
影响pcr扩增效率的因素有哪些
主要考虑是否在模板稀释过程中出现问题，是否存在高浓度样品污染低浓度样品的情况。具体的要看了你的扩增曲线、溶解曲线以及标准曲线的结果才能判断。其次题主提到的两个问题1、模板浓度过高会抑制PCR反应，可能会导致扩增效率降低。但同时可能会出现非特异性扩增导致结果的Ct值不可信，最终导致扩增效率不可信...
pcr错误率是什么意思
PCR是一种广泛用于生物学和医学领域的分子生物学技术，英文全称为Polymerase Chain Reaction，中文为聚合酶链式反应。简而言之，PCR是通过放大DNA分子使其可被检测的技术。而PCR错误率则指PCR难免存在的检测失误和误判的概率。在PCR过程中，各种因素如反应体系、温度、反应时间、DNA质量等都可能影响PCR的结果...
荧光定PCR中的注意事项
4. 反转录 反转录所得cDNA的量必须精确地等于相应的mRNA的量，反转录对于实时定量PCR来说是非常关键的一步。目前常用的反转录酶有2种：AMV-RT和MMLV-R。反转录常用的引物有随机引物、Oligo-dT和特异引物。相比之下Oligo-dT和特异性引物更适合实时定量PCR。5.利用实时定量PCR研究基因表达时，一般用...
原位PCR获得特异原位PCR结果需要考虑哪些关键因素
PCR环节中，特异的扩增引物设计是决定PCR结果特异性的关键。引物需要与目标DNA序列高度匹配，以避免非特异性扩增。此外，Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶的用量以及精确的循环条件（如温度、时间）也都会影响PCR的效率和产物质量。对于间接法的原位杂交检测，探针浓度的选择直接影响杂交的灵敏度和特异性。过高或过低...
容县复方回答：[答案] 有RP、RP、还有RP 开玩笑啦 LZ是问影响成功率么……这个每个溶液都有影响不是 镁浓度、酶量影响酶活 dNTP、引物太少连不完,太多容易错配 模板质量,这个比较重要…DNA模板不能太浓,当然也不能特别特别稀,总之往稀了去比较好 程序...
叶成18590582181问： PCR结果不稳定的原因是什么 - ？
容县复方回答：[答案] 1、操作者不熟练,加样时存在取样误差 2、PCR仪器不稳定,如温度,湿度影响 3、试剂不稳定,如你的DNA模板降解,Taq酶活性下降等
叶成18590582181问： 影响pcr反应效率的因素有哪些 - ？
容县复方回答： 影响 PCR 的主要因素 PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工...
叶成18590582181问： 影响PCR扩增结果的因素 - ？
容县复方回答： 最重要的应该就是引物的特异性了,要不然连PCR出来的片段是不是所需的片段都不能确定...引物的设计很有技巧的,既要保证特异性,又不能过长,两端的引物退火温度还要相似才好.现在有很多软件可以帮助你设计软件,推荐Primer Premier 5,很好用~ ps 注意事项就是东西都要加全了,一般要设计对照组,PCR仪的稳定性和你使用的不同公司的酶的效率很不同,不成功也不要灰心.反应的条件不是所有都一样的,你要看你使用的那个公司的酶给的说明书,上面很详细~生物实验失败还是很常见的,千万不要轻易放弃,耐心找原因,祝你成功~!
叶成18590582181问： 影响PCR反应效率的因素有?以及如何有效地提高PCR反应效率? - ？
容县复方回答：[答案] 引物的设计:引物的设计不好可能产生非特异,造成假阳性. 聚合酶:酶是影响PCR的关键,酶的失活造成PCR的失败,不同的酶扩增的片段也有差异. 其次就是PCR反应体系,不现成份的尝试对PCR也造成影响.例如Mg2+,dNTP,
叶成18590582181问： 影响PCR的主要因素有哪些呢? ？
容县复方回答： 如操作范例所示,其变性、退火、延伸的条件是:94℃60s,37℃60s,72℃120s,共25~30个循环,扩增片段500bp
叶成18590582181问： 有哪些条件可影响PCR反应 - ？
容县复方回答： PCR反应条件为温度、时间和循环次数.温度与时间的设置: 基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三个温度点.在标准反应中采用三温度点法,双链DNA在90~95℃变性,再迅速冷却至40 ~60℃,引物退火并结合到靶序列上,然后快速...
叶成18590582181问： 影响PCR最终产物的因素有哪些 - ？
容县复方回答： pcr扩增产物的特异性与哪些因素有关 pcr产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失. 假阴性,不出现扩增条带 pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④pcr循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究. pcr非特异性扩增指的是你进行pcr所扩增出来的条带不是所要的,引物与模板在非目的条带处有错配,导致延伸产物不是目的条带.非特异性扩增在琼脂糖电泳时可以看到在目的条带外出现了其他条带. 引起非特异性扩增的原因有很多,mg2+浓度过高、退火温度太低、引物特异性不好等等原因
叶成18590582181问： 影响PCR的主要因素有哪些? ？
容县复方回答： 低浓度尿素、DMSO、DMF或甲酰胺影响不大,吐温20/NP40可消除SDS(0.01%及0.1%)的抑制作用
叶成18590582181问： PCR失败的原因及如何改善 - ？
容县复方回答：[答案] PCR反应的五要素 1、引物 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度.理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增. 设计引...
