原位PCR获得特异原位PCR结果需要考虑哪些关键因素
原位PCR技术是一项结合了组织学、PCR、原位杂交和免疫组化等多种技术的复杂实验。在进行特异原位PCR时，确保获得可靠结果的关键因素主要包括：
首先，组织的有效固定至关重要，这直接影响到后续步骤的核酸提取和PCR反应。合理的固定过程可以保护核酸结构，防止降解，保证PCR的准确性。
在PCR前的准备阶段，酶消化步骤尤为重要。它能够促使组织中的核酸分子暴露，使扩增引物能够准确地结合到目标序列上。因此，选择合适的酶和消化时间是不可忽视的步骤。
PCR环节中，特异的扩增引物设计是决定PCR结果特异性的关键。引物需要与目标DNA序列高度匹配，以避免非特异性扩增。此外，Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶的用量以及精确的循环条件（如温度、时间）也都会影响PCR的效率和产物质量。
对于间接法的原位杂交检测，探针浓度的选择直接影响杂交的灵敏度和特异性。过高或过低的探针浓度都可能导致假阴性或假阳性结果。同样，抗体浓度和显色时间也需要精细调控，以确保杂交信号的清晰和稳定。
总的来说，每个步骤都需要严格控制和优化，以确保原位PCR获得准确、特异的结果。只有在所有这些因素得到充分考虑和精确操作后，才能得到理想的研究数据。
扩展资料
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。
普通PCR、原位PCR、反向PCR和反转录PCR的 基本原理和操作步骤(三)_百度...
该方法的不足是：①需要从许多酶中选择限制酶，或者说必须选择一种合适的酶进行酶切才能得到合理大小的DNA片段。这种选择不能在非酶切位点切断靶DNA。②大多数有核基因组含有大量中度和高度重复序列，而在YAC或Cosmid中的未知功能序列中有时也会有这些序列，这样，通过反向PCR得到的探针就有可能与多个...
原位PCR的怎样设定原位PCR对照实验
间接法：先进行细胞内目的DNA基因原位扩增，然后用标记的探针进行核酸分子原位杂交以定位检测扩增的DNA的技术，步骤相对较多，需时长，但结果可靠。获得特异原位PCR结果需要考虑哪些关键因素原位PCR技术操作包括了组织学技术、PCR技术、原位杂交技术及免疫组化学技术，因此在复杂的操作过程中，有很多因素影响实验...
什么是PCR技术PCR的基本原理是什么
PCR技术是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。PCR技术的基本原理：类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，...
PCR的特异性指什么??
由于碱基互补配对原则导致的PCR在进行反应时所合成的DNA永远是特异性的（和起始DNA相同）
哪些因素决定了pcr反应的特异性
PCR反应条件为温度、时间和循环次数。温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq。
什么是原位、梯度、定量、普通PCR?
原位PCR 就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术.原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有...
原位PCR(in situ PCR)
【答案】：是Hasse等于1990年建立的技术，是指直接用细胞涂片或石蜡包埋组织切片在单个细胞中进行PCR扩增，然后用特异探针进行原位杂交检测含该特异序列的细胞的一种方法。
pcr检测如何细菌的特异性DNA序列
首先要对相应序列进行比对，blast，找到特异位点或区间，然后再根据位点或区间设计相应PCR引物进行扩增，如果仅有位点是特异的，可将位点设计为引物的3‘端，如果是一段DNA特异，只要扩增这一段就可以了。
基础实验重新认识(5)——PCR相关
通过较高温度获得特异性匹配较高的模板后,再以较低温度高效率扩增。 2.RT-PCR 逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的原理是:提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因...
PCR的原理是什么 的原理是什么,它有什么用途
PCR全称多聚酶链式反应，原理是DNA的体外扩增。具体来说：在EP管里加入DNA、合成原料（dNTP、引物）、耐热的DNA聚合酶（taq）后，放入PCR仪，PCR仪会利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，进而达到基因复制的目的。用途：1、核酸的基础研究：基因组克隆 2、不对称PCR制备单链DNA用于...
万桦帕朱： 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/L HCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37℃ 30min; (5)梯度酒精脱水,室温干燥. 2)原位扩增: (1)切片滴加特异性序列引物30μLPCR扩...
古县17237438895： 原位PCR的基本方法 - ？
万桦帕朱： ① 固定组织或细胞:将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上,并用多聚甲醛处理,再灭活除去细胞内源性过氧化物酶. ②蛋白酶K消化处理:用60ug/ml的蛋白酶K将固定好的组织细胞片55℃消化处理2h后,96℃2min以灭活蛋白酶K. ...
古县17237438895： 用PCR扩增目的基因,要想得到特异性产物需注意哪些事项 - ？
万桦帕朱：[答案] 首先,引物特异性要好 再,注意操作,避免交叉污染等
古县17237438895： 何为原位PCR? - ？
万桦帕朱： 原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术,使得靶基因检测有了极大的改进.此技术是在细胞(爬片、甩片或涂片)或组织(石蜡、冰冻切片)上直接对靶基因片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法.
古县17237438895： 什么是原位PCR(In situ PCR)？
万桦帕朱： 博凌科为-为你解答:原位PCR是指在组织或细胞标本片上直接进行PCR,对细胞中的靶DNA进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法.可分为直接法 和间接法.基本步骤:组织切片或细胞固定 蛋白酶消化原位PCR扩增冲洗产物检测优点:灵敏度高,可进行细胞内定位
古县17237438895： 原位PCR的探针种类 - ？
万桦帕朱： 与原位杂交一样,检测原位PCR结果的探针可以是DNA探针,也可以是寡核苷酸探针,DNA探针的长度在100-200bp为宜,寡核苷酸探针为多个,在20-40bp为宜.
古县17237438895： 怎样获得不同碱基末端的PCR产物?我需要做一个实验,需要测不同碱基末端的PCR产物与载体的连接效率. - ？
万桦帕朱：[答案] 只有Taq酶可以在pcr产物末端加上A,可以与T载体连接. 你不如用限制酶切,比如Fnu4HI,酶切位点GCN/GC,N随便改都行. ╮(╯▽╰)╭这么简单就告诉你了,好便宜你……
古县17237438895： PCR技术如何获取目的基因呢,另外PCR的过程为什么会扩增出不同长度的链 - ？
万桦帕朱： PCR扩增出目的片段,需要自己提取模板,可以是RNA,或者DNA. 引物会结合模板,如果特异性不够好,比如引物与模板的其他位点结合,在PCR过程中就会产生很多不同条带.
古县17237438895： PCR技术原理是什么? - ？
万桦帕朱： 原发布者:yqjklhq 一.简述PCR基本原理?PCR技术的基本原理 类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物.PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右...
古县17237438895： 什么是原位、梯度、定量、普通PCR? - ？
万桦帕朱： 原位PCR 就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术.原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞,又能标出靶序列在细...
