同型对照流式图
流式细胞仪分析shrna效率结果怎么看
shRNA的效果一般是测目标基因的表达量。1. 先用iso-type control，也就是非特异性的同型抗体染的细胞测，设好了阴性的阈值。2. 再用特异性抗体测用对照序列shRNA转染的细胞，看阳性细胞的比率 3. 再测用shRNA转染的实验组的细胞，看阳性细胞的比率。4. 最后对比2和3的阳性细胞的比率有无变化。
什么叫同型对照抗体?
要看抗体属于IgM\/D\/G\/A\/E的那种，因为其轻链种类相同，而重链分别对应为μδγαξ五种。估计你要流式之类，如果用的抗体是抗CDXX小鼠来源的IgG，那同型抗体就为未用CDXX免疫小鼠的IgG。其目的就是取消掉特异性抗体FC段与细胞其他非目的蛋白结合而产生的荧光 ...
影响流式细胞术实验结果的主要因数有哪些
3、正确的补偿；4、正确的染色方法，抗体的比例，染色步骤，固定等都会影响结果，虽然有的影响很小；5、抗体的搭配，主要是荧光素的搭配，以及好的克隆号；6、机器的校验，但通常很少有人会天天校正机器；7、对细胞的处理，这里说的是培养的细胞。比如培养前数目是否一致，药物量是否有可比性 流式的...
简述流式细胞免疫分析仪免疫检测的质量控制。
(1)同型对照：为免疫荧光标记中的阴性对照，选用相同源性的未标记单抗作为同型对照来调整及设置电流电压，在此基础上进行的样本检测可使荧光标记单抗的信号保持其特异性。(2)全程质控：流式细胞检测中，样品标记、溶血、洗涤、仪器质控和上机检测是流式细胞检测的一个连贯过程，该过程的准确性与标准化...
流式细胞术做封闭抗体时对照组为什么加ab型血清
做封闭的时候是不应该加AB型血清的。做封闭的目的就是用非特异性的抗体和蛋白质结合掉细胞上那些可以和抗体非特异性结合的位点。血清的目的就是因为含有白蛋白和抗体，所以一举两得。不过不应该用AB型。这是人的血清。流式检测一般都是使用小鼠单克隆抗体，所以封闭的血清也应该是用种的小鼠血清。
流式细胞术散点图参数中FSC-A与FSC-H是什么意思
fsc代表的是forward scatter，这个参数和细胞的大小成正比，A是area的缩写，H是height的缩写。这是机器在记录信号时所采用的参数（不显示在用户界面，在调试机器的时候可以显示）每个细胞通过激光的时候，机器都会记录一个波状信号（一个拱形的信号），H就是这个拱的高度（代表的是信号的强度），A就是这个...
流式细胞术的步骤?
细胞因子的检测：随着多标记及胞内细胞因子标记流式细胞技术的出现，使对细胞内细胞因子的研究推向了一个新的阶段。本文主要对胞内细胞因子流式细胞技术作介绍。 血液学应用：文向您介绍流式细胞仪在血液研究领域的应用，包括DNA倍体分析及细胞周期分析，淋巴细胞亚群测定，白血病免疫分型，淋巴瘤免疫...
如何用流式细胞仪检测细胞凋亡?
尽管，经典的流式检测资料给出的图是认为凋亡的细胞是紧挨着G0-G1期峰的一个峰，死亡的细胞峰离G0-G1期峰较远，但是这种典型的结果似乎很难获得。有其它的替代方法，完全可以不用这种方法。晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂，因而可以出现DNA ladder，从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel...
流式细胞术:原理、操作及应用的目录
序前言1 概述1.1 流式细胞术基本概念1.2 分析型流式细胞仪介绍1.3 分选型流式细胞仪介绍参考文献2 流式细胞仪的原理2.1 液流系统2.2 光路系统2.3 检测分析系统2.4 分选系统参考文献3 流式图3.1 流式通道3.2 流式直方图3.3 流式散点图3.4 流式等高线图参考文献4 流式细胞术的基本...
流式荧光补偿调节不对的话会怎么样
流式细胞术中荧光补偿该如何调节？以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。那么荧光补偿该如何调节呢？l 调节电压 l 检测荧光通道的自发荧光 l 每个荧光通道做单染管对照检测 何为单染管对照？l 细胞 l 补偿微球 细胞通常...
南湖区基瑞回答： 博凌科为解答:FCM数据的存贮的方式是FCS2.0(flow cytometry standard),采用列表排队(List Mode)方式.易于加工处理分析,但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种;由数据还可以做出标准曲...
悟广19670191194问： 关于细胞流式的同型对照的问题 - ？
南湖区基瑞回答： 所谓同型对照,就是因为担心抗体会有非特异性的结合而设置的一种对照. 选用和特异性抗体同种亚型的,同样荧光素标记的抗体,采用同样的染色步骤染同样浓度的细胞.然后上机检测.如果细胞有非特异性的结合,那同型对照的荧光强度可能会比未染色的阴性对照要高一些. 同型对照只用于那种阳性和阴性之间没有明确分解的情况.如果阳性细胞群非常清楚,是不需要同型对照的.另外,在多色同染的情况下,也不采用同型对照,而是采用FMO(fluorensence minus one)对照. 另外,对于同型对照的使用,也有很多反对意见.就算是同型抗体,也可能会有不同的亲和力,并不一定就能真实反应非特异性的结合.
悟广19670191194问： 如何看流式细胞图 - ？
南湖区基瑞回答： 流式的图一般是两种形式.一是柱状图,X轴是信号强度,Y轴是计数.数据通常显示为峰值.比如阴性或者信号弱的峰在左侧,而阳性或者信号强的就位于右侧.柱状图一次只能显示一个通道信号,通常用来判断阳性,阴性的区别或者单个通道信号在不同样本间的变化. 另外一种形式是散点图.就是把两个通道的信号同时显示在图上.优点是由于同时显示两个通道的信号,可以提供比柱状图更多的信息.多色流式样本检测一般都是通过上下级关系的图来显示不同的图.比如在上一级的图中先针对某个细胞群画了个门,然后该门内所有细胞又可以用其他通道的信号显示到另外一个图上进行进一步的分析.
悟广19670191194问： 流式细胞术中非特异性显色是如何产生的 - ？
南湖区基瑞回答： 流式的isotype对照(同型对照),就是使用相同标记,相同亚型的非特异性抗体,在另外一个管子的样本,采用同样的染色步骤染色.比如,你使用了小鼠IgG1,PE标记的特异性抗体,那就选用小鼠IgG1,PE标记的非特异性抗体.下面这个图,是一个比较典型的使用了同型对照的结果图灰色的曲线是未染色的样本,黄色是同型对照,红色是特异性抗体染色.由于细胞对抗体的非特异性结合,一般同型对照都会比未染色样本的荧光信号要强.所以设置阴性阈值的时候,要根据同型对照,而不是未染色的细胞.
悟广19670191194问： 流式细胞术中为什么要用同型对照?如何选择同型对照?？
南湖区基瑞回答： 同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白,用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色.同型 对照是真正意思上的阴性对照,它不但可以用来设定流式细胞仪的电压,而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤.
悟广19670191194问： 流式细胞图怎么看?？
南湖区基瑞回答： 有两种,一种散点图,每一个点代表一个细胞,如FSC-SSC散点图,FSC代表细胞大小,SSC代表细胞颗粒度,根据散点图,可以对细胞进行分群.另一种为直方图,与统计学中直方图相似,x轴表示一个通道的值,如荧光强度,y轴表示细胞数量.
悟广19670191194问： 如何选择同型对照 - ？
南湖区基瑞回答： 同型对照的主要目的是确定一抗的结合是特异性的,而不是非特异性的Fc受体或与其他蛋白的相互作用.同型对照要与一抗的来源、Ig分型和标记完全一 致.例如:一抗是FITC标记,其抗体分型是小鼠的IgG1,则同型对照要选择是FITC标记的小鼠的IgG1.这里如同使用流式抗体一样,同样的不可离 开说明书!
悟广19670191194问： 请教,流式细胞图应该怎么看? - ？
南湖区基瑞回答： 从左到右,从上到下,第一个图横轴是FSC,纵轴是SSC,一个前向角,一个侧向角,具体定义就不说了,这两个指标主要用于判断细胞的大小.利用这个图可以去除细胞碎片以及粘连在一起的细胞,只挑单个细胞进行后续分析. 你可以继续问.
悟广19670191194问： 影响流式细胞术实验结果的主要因数有哪些 - ？
南湖区基瑞回答： 1、样品处理,去除杂细胞、碎片等对正常细胞的计数;2、对照:设立负对照、同型对照、弱阳性对照,帮助你正确判断阴阳的界定;3、正确的补偿;4、正确的染色方法,抗体的比例...
悟广19670191194问： 流式细胞仪做mhc - ii检测 时同型对照怎么选 - ？
南湖区基瑞回答： 所谓同型对照,就是和你所使用的特异性抗体同样亚型,同样荧光素标记的抗体,但是没有抗原特异性.比如你用anti-MHC-II,mouse IgG1-FITC,那同型就用非特异性的mouse IgG1-FITC,同样浓度
