为什么要做ta克隆
急啊!最近做TA克隆一直无法得到结果,涂完平板后长的斑很少,而且都是假...
你用PMD19T simple试试，我一直都是用这个做的，效果还挺好的，这种载体消除了LacZ基因上的多克隆酶切位点，效果更好一些。
如何用pcr测未知基因的序列
cDNA除了进行PCR，也可以用来做cDNA文库 第三个问题完全听不懂，不知道你的基因未知到什么程度，如果你完全不知道他的序列，你怎么确定他是一个什么基因，跟什么比较接近，又怎么设计引物呢，不清楚你要的是个什么标准。测序的话都是用TA克隆将PCR产物克隆到质粒上，拿单克隆去测的。这样测序不需要特异...
TA克隆正反向测序结果都找不到扩增目的条带的引物(载体通用引物也找不...
poly结构可以尝试测序下去，应该没有太大问题，至于你说的引物问题，将已知的载体序列去掉开始那部分就应该是你的引物序列，因为是简并引物，所以只会出现一种引物情况，或者是你 PCR的时候，上下游的简并引物之间是不是特异性不好，所以出现不是你需要的扩增产物，你挑选的单克隆只是其中的一种，或者...
...为什么测序公司不能测序,说是信号中断,什么原因?
测序结果就出现突然信号减弱或消失。出现这些现象的原因由DNA模板本身立体结构所造成的。当DNA碱基中含GC含量高的时候，从某一位置开始聚合酶的聚合反应便无法进行下去。这样的情况，建议可以尝试换用反向引物进行测序。或者是将PCR产物做一个TA克隆后再测序，可以根本上解决测序信号中断的问题。
我要做荧光定量RT-PCR,产物长度是73bp,可以吗?
我研究过中山达安公司09年的H1N1检测试剂盒，通过TA克隆得知，他们的检测H1N1病毒的H1跟N1两管混合液中扩增目的片段的长度都是70bp左右。如果你的引物探针以及合成好的了话，就做实验吧，要是还没合好的话，可以让合成公司设计，告诉他们基因名称就可以免费设计，付合成费就行了。
...又缺乏相应试剂说明书,到宝生生物也没搜到rTap,请问rTap是什么...
不管我们怎样乱搞，牵手心肠断，不断变换的人们来到，我们说不出他们的名字，他们的生辰忌日——说他不快乐，等于说得太多 想慈颜，教导详，哈哈
为什么说腾讯微博停服是C2C模式终结的标志性事件?
再过三周，腾讯微博就将停服，金盆洗手，退出江湖。这个腾讯做了十年的产品终于寿终正寝，或许是腾讯自我觉醒的结果。中国互联网有个著名的C2C模式，跟电商那个C2C同名，不过说的是“Copy To China”的缩写。从九十年代开始，基本上美国有哪个应用做起来了，就有人把Ta克隆到中国，像新浪搜狐那一代...
生物技术 生物工程
1 你用的T载体是T载体还是T-simple载体？前者有多克隆位点而后者没有。2 你的酶切位点用的是载体上的还是你的插入片段上的？如果是载体上的，请仔细考虑我的第一个问题。至于双切载体的图，那要看你选择的酶切位点。一个圆上切几刀就成为几段，这个总知道吧。对了，我看到你的插入片段很小，...
龙江县易妥回答： 一、缺点: 1、PCR产物的酶切和判断比较困难. 2、另外酶切连接过程本身也相当地费时费力. 二、优点: 1、克隆PCR产物较简便、快捷的方法. 2、不需使用含限制酶序列的引物,不需将 PCR 产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理...
苍梧征15676714880问： 克隆 测序 - ？
龙江县易妥回答： 如果你只是要部分序列,直接进行PCR,产物送测序公司测序;如果你要得到全长序列,就把PCR产物进行TA克隆,将阳性菌液或者自己提取质粒然后送测序公司测序或者自己把质粒PCR后再交给测序公司测序.
苍梧征15676714880问： TA克隆的具体原理是什么? - ？
龙江县易妥回答：[答案] TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)把PCR片断与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法.因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性,通常在3加上A.例如:Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产...
苍梧征15676714880问： DNA a - tailing kit的作用是什么..简单的酶切酶连? - ？
龙江县易妥回答： ■ 制品内容 (20 次量)A-Tailing Enzyme (5 U/μl)10 μl10*A-Tailing Buffer100 μldNTP Mixture (each 2.5 mM)80 μlA-Tailing Control Insert* (50 ng/μl)10 μlBlunting Control Insert* (50 ng/μl)50 μl * A-Tailing Control Insert 和Blunting Control Insert各为5...
苍梧征15676714880问： bsp甲基化扩增得到的pcr产物可否直接测序,为什么需要构建ta克隆后测序 - ？
龙江县易妥回答： 不能直接测序.该PCR产物理论上是一个复合物,测序结果理论上是套峰,因为单个CpG岛甲基化是有概率的,0%-100%都可能.
苍梧征15676714880问： 请问用PCR克隆已知基因的步骤中为何要将回收的目的基因重组在大肠杆菌质粒上去呢?谢谢啦 - ？
龙江县易妥回答： 1、这是作为保藏的手段,不然你怎么保存你的基因?2、这是获得自引物之间完整序列的必要途径,因为测序是无法获得待测序列起始部分和约800-1000bps之后的序列,因此需要连接到质粒上测序,俗称TA克隆.为什么会这样我就不说了,懒得打字.
苍梧征15676714880问： PCR纯化产物为什么能直接连接,什么情况下直接连接?求高手指教. - ？
龙江县易妥回答： PCR纯化产物直接连接通常分为两种情况, 一是TA连接,如phusion,高保真的taq,PCR后会有一个A末端,和T载体的T末端互补相连. 另一是平末端连接,如pfu,PCR后是平末端,可以和blunt II vector这一类的载体直接相连,但顺序是随机的,可能是正的,也可能是反的.
苍梧征15676714880问： 什么是T - A克隆? - ？
龙江县易妥回答：[答案] TA克隆方法(Original TA Cloning Kit)即利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端.Invitrogen公司TA克隆系统和Topo TA克隆系统都提供一个线性含3`-T突出端的载体用于直接高效地连接...
苍梧征15676714880问： pcr产物的t - vector克隆方法,应注意哪些操作环节 - ？
龙江县易妥回答： 1 平末端的PCR产物,首先需要用普通的taq酶让其末端加上A(一般跑完PCR,直接加少量普通taq,72度继续20-30min,就行了,如果你不放心,可以纯化一下,然后按PCR体系加入taq,dATP,buffer等,72度,30min),然后和普通PCR产物一样进行TA克隆; 2 具体的克隆方法,参考所用T载体的说明书.比如TAKARA的pMD-19T,里面有详细的介绍和注意事项.最重要的就是要注意目的片段和载体间的摩尔比要合适(一般3-8:1)
苍梧征15676714880问： DNA建库时末端修复后要加A,它是具体怎么做到只加一个A的?(注意是具体) - ？
龙江县易妥回答： Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能,PCR反应时在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端.只有用经过特殊处理的具有3'-T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接. 所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物,不需将PCR产物进行优化,不需把PCR产物做平端处理(Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆).不需在PCR扩增产物上加接头,即可直接进行克隆. 可以用超声波进行DNA的打断!
