液相色谱仪使用步骤是什么?

~ 高效液相色谱仪使用步骤详解
1. 色谱柱准备
色谱柱是液相色谱中的核心部分，通常由内壁抛光的不锈钢管构成，内径约为4-5毫米，长度在100至250毫米之间。在使用前，需要按照气相色谱法清洗空柱，并通过匀浆法装填固定相。将色谱柱安装到仪器管路中，使用柱式机械往复泵输送脱气的流动相。在基线稳定后，可以使用苯、萘、菲等混合试液进行测试。色谱柱效率（柱效）和分离度是评价色谱柱性能的关键指标，柱效应在2至3万/毫升以上，分离度应大于1.5。为防止柱污染，通常会安装一个50毫米长、内径4-5毫米的保护柱（预柱），以延长色谱柱的使用寿命。
2. 流动相洗脱
流动相是溶解样品组分并在色谱柱中传递组分的溶剂。配制好的流动相应放置在贮液瓶中，并通过高压泵进入色谱柱。洗脱方式包括恒溶剂脱洗法（等度洗脱）和梯度洗脱法。等度洗脱中，溶剂配比在整个过程中保持恒定。而梯度洗脱法中，随着色谱过程的进行，溶剂的极性强度逐渐增强，这需要按照一定程序不断改变流动相的浓度配比，以便在一次色谱过程中分离性质相近的组分。需要注意的是，梯度洗脱法不适用于分子排阻色谱和用电化学检测的反相高效液相色谱。
3. 检测器使用
针对血药浓度检测，常见的检测器有紫外线吸收检测器、荧光发射检测器和电化学检测器。紫外检测器适用于对紫外光有吸收的药物，荧光发射检测器适用于能产生荧光的药物，而电化学检测器常用于检测儿茶酚胺类及具有酚类基团的药物和代谢物。这些检测器能够提供定性和定量分析，其灵敏度和重现性均较好。
4. 数据处理
现代高效液相色谱仪配备了数据处理系统，能够记录和分析色谱图，自动积分计算峰面积，并根据预设程序进行计算和报告分析结果。
高效液相色谱仪使用过程中常见问题及解决方法
1. 液相色谱仪系统问题
高效液相色谱仪的核心部件包括色谱柱、泵和检测器，这些也是容易出现问题的部位。
2. 常见问题及解决方法
- 柱压问题：柱压的稳定性直接影响色谱图峰形、柱效和分离效果。需要定期检查和维护，确保压力波动在合理范围内。
- 保留时间漂移问题：保留时间的改变可能由多种因素引起，需要针对具体情况进行排查。
- 异常色谱峰问题：色谱图中出现的无峰、负峰、宽峰、双峰、肩峰或不对称峰等情况，可能由样品前处理不当、色谱柱损坏或检测器问题引起。
3. 高效液相色谱仪的保养
日常操作条件包括恒温、恒湿的工作环境，以及远离高电干扰和高振动设备。还需要定期对泵、进样器、色谱柱和检测器进行清洗和保养，以维持仪器的最佳工作状态。
结语
在使用高效液相色谱时，要注意样品的处理、仪器的正确操作和维护。良好的记录习惯对于故障排除至关重要。遇到问题时，可以参考专业网站或向行业专家咨询。

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鹰潭市17687414826： 如何使用液相色谱 - ？
沈璐新杰： 原发布者:jing2595832液相色谱基础知识2017年04月11日一、什么是色谱色谱是一种分离工具,而不是传统意义上的分析仪器.色谱法也叫层析法,它是一种高效能的物理分离技术,将它用于分析化学并配合适当的检测手段,就成为色谱分...

鹰潭市17687414826： 高效液相色谱仪器怎么操作啊?简单吗? - ？
沈璐新杰： 一.开机程序1.打开氮气总阀,拧紧分压阀.2.打开稳压电源和色谱仪开关.3.启动计算机,运行软件,调用预先编辑好的控制方法,下载到色谱仪.4.待柱箱温度达到控制方法设定的初始值后,测量柱流量:在皂膜流量计里加入几滴检漏液...

鹰潭市17687414826： 如何使用液相色谱仪 - ？
沈璐新杰： 1、先查找你需要分析样品的分析方法:波长,流动相类型,流动相比率,流量,色谱柱规格型号等分析条件; 2、根据分析条件准备好流动相试剂,连接色谱仪; 3、开机预热,设定检测器波长,设定泵的流量,梯度分析还要设定梯度比率和时间程序; 4、启动泵,开始置换试剂;打开工作站,查看基线情况; 5、基线稳定后,可以进样分析

鹰潭市17687414826： 液相色谱仪的使用方法 - ？
沈璐新杰： 液相色谱仪使用及维护 液相色谱仪使用时要非常的注意. 使用卡套柱时,两端的卡套应时刻连接在柱芯上.不管您是平衡色谱柱或是清洗,任何时候都不能将卡套取下来,否则会造成填料的流失. 液相色谱柱使用注意: 卡套柱的安装(加预柱...

鹰潭市17687414826： 液相气相色谱的操作步骤 - ？
沈璐新杰： 气相色谱操作规程及注意事项: 1.气相色谱仪简单操作流程 1.1 反时针方向开启载气钢瓶阀门,减压阀上高压压力表指示出高压钢瓶内贮气压力. 1.2.顺时针方向旋转减压调节螺杆,使低压压力表指示到要求的压力数. 1.3开启主机电源总开关...

鹰潭市17687414826： 高效液相色谱仪操作 - ？
沈璐新杰： 准备好流动相(比如甲醇和水),开机(开泵,检测器,有柱温箱和自动进样器的也一同打开),开工作站,设定流动相比例和流量,设定检测波长,然后启动泵,等基线平稳后即可进样了.老弟你好相一点不懂呀,最好找一个明白人现场给你操作一次,和你讲一讲,免得把仪器弄坏.我是济南的.希望能解决您的问题.

鹰潭市17687414826： 液相色谱操作都有什么注意事项? - ？
沈璐新杰： 转载:《分析测试百科网》 液相色谱仪的一般操作步骤和注意事项 一、一般的操作步骤: 1). 首先对流动相进行过滤,根据需要选择不同的滤膜,一般为有机系和水系,常用的孔径为0.20um和0.45um. 2). 对抽滤后的流动相进行超声脱...

鹰潭市17687414826： 液相色谱的操作规程 - ？
沈璐新杰： 一、液相色谱要放置在平稳牢固的台面上.二、液相色谱要有可靠的接地.三、高压气瓶要放置在阴凉、通风处,通过减压阀和机器连接.四、使用氢火焰时,应先开助燃气,后开氢气,关闭时应先关氢气,后关助燃气.注意检查氢瓶、减压 阀、连接管线是否泄漏,如有泄漏应立即处理.五、温控设备,压力表应按规定进行检定.六、仪器工作室,应放置足够数量的消防器材.

鹰潭市17687414826： 请问高效液相色谱仪的使用方法是什么?急用.拜托 - ？
沈璐新杰： 看你用的哪种型号,一般将流动相配好后,用微孔滤膜超滤,再用脱气装置脱去流动相中溶解的小气泡,然后换上流动相,开机,按你的条件进行设置就行了.

鹰潭市17687414826： 最近做液相,想请问高效液相色谱仪器是如何操作的,新手!务必详细!谢谢,还有那些条件,数据,等~~ - ？
沈璐新杰： 1、配制缓冲液 2、用滤膜过滤缓冲液 3、根据你的出峰时间需要,配制不同乙腈比例的流动相,比如说乙腈:缓冲液=1:6或1:4之类 4、将配好的流动相进行超声脱气15-20min 5、流动相配好之后,打开色谱工作站,设置方法,查看基线,并进行零点校正 6、取样进样检测