荧光显微镜用什么染料较好

作者&投稿:可缪 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
荧光显微镜滤过波长和荧光染料发射波长的关系~

1、你的荧光染料的激发波长(excitation)在显微镜的激发波范围内,激发没问题。
2、荧光染料的发射波长(emission)是有一定范围内的,比如550-650nm,称之为发射光谱。通常所说的发射波长615nm,一般指的是其发射光谱中强度最高的波长(最强发射波长)。
3、显微镜的滤过波长范围是大于570nm,还是570nm及其左右多少nm范围?如果是大于570nm,那就没什么问题;如果是570nm及其左右多少nm范围,那就要看你的荧光染料的最强发射波长或其附近较强的发射波长是不是在显微镜滤过范围内,如果落在显微镜滤过范围内的发射波长的强度非常弱的话,则会严重影响观察,甚至可能无法观察到。
4、建议最好先确定显微镜的滤过波长到底是多少,察看一下荧光染料的发射光谱。

看显微镜的光路配置,包括光源及绿色块模组

荧光显微镜是最经典的灵敏的荧光染料,它可对细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光,DNA呈绿色荧光,RNA呈橙红色荧光。EB:染色DNA和RNA荧光素双醋酸酯(FDA):FAD 本身无荧光,无极性,可透过完整的原生质膜。 一旦进入原生质体后,由于受到酯酶分解而产生 具有荧光的极性物质荧光素。它不能自由出入原 生质膜,因此有活力的细胞能产生荧光,无活力 的原生质体不能分解FAD无荧光产生。5mgFDA溶于1ml丙酮中,避光4℃下贮存,使用 时取0.22mlFDA贮存液加入5ml0.65mol/L甘露醇中.使用时,使最终浓度为0.01%。荧光染料Ho33342和若丹明123: 活细胞双荧光染色观察细胞核和线粒体。一般的生物染料不能穿透细胞膜,只有当细胞被固定后改变了细胞膜的通透性,染料才能进入细胞内。但有些活体染料能进入活细胞,并对细胞不产生毒性作用。荧光染料Ho33342和若丹明123都是活体染料。Ho33342能与细胞中DNA进行特异的结合,若丹明123能与线粒体进行特异的结合。采用两种荧光染料的混合染液可对一个活细胞的核和线粒体同时染色。


显微镜观察白细胞可以用什么染色
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医学DAPI是什么意思?
DAPI是医学中常用的荧光染色剂之一。DAPI的全称是4',6-diamidino-2-phenylindole。它属于一种天然存在于细菌和酵母的蓝色紫色荧光染料,可以通过荧光显微镜来观察活细胞和组织中的细胞核DNA。DAPI能够与DNA碱基配对形成复合物,同时对胞质的荧光无抑制作用,细胞核荧光更加明亮,因而被广泛应用于细胞生物学、...

cy5激发波长和发射波长是什么?
cy5波长范围 Cy5属于水溶性3H-吲哚菁型小分子生物荧光标示染料。CY5标记物发红色荧光,最大发射波长为670nm,其标记的抗体适用于所有配备633nm氩离子激光器的流式细胞仪,检测通道一般是FL4通道。除流式细胞术外,Cy5同样适用于传统的荧光显微镜技术。需注意的是,Cy5与单核细胞和粒细胞的非特异性结合多...

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为什么荧光显微镜显示的视野大小不一样
2、目镜倍数不同。同样的物镜倍数下,不同的目镜倍数也会导致视野大小的不同。3、光源亮度不同。荧光显微镜采用了特殊的荧光染料和激发光源,光源的亮度不同也会影响到视野大小的呈现。4、摄像头或者显示器的分辨率不同。荧光显微镜通过摄像头和显示器将观察到的图像呈现出来,不同分辨率的设备会影响到...

如何选择流式荧光
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我用荧光显微镜拍的照片亮度不均匀怎么调整
这种情况一般的解决办法是使用荧光染料或荧光抗体进行荧光增强 然后再进行显微镜拍摄 不过对所拍摄样本有一定的局限性, 不是所有的样本都能拍摄的 只能试

在明视野显微镜下观察微生物形态时,用染色标本好还是用未染色标本好,为...
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dapi染色能否区分活死细胞
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什么方法可以既看到叶绿体又看到细胞核
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本溪市19265128807: 荧光显微镜最常用的激发有哪几种? -
巴昨小儿: 紫外 蓝色荧光 如DAPI染料 蓝光激发 绿色荧光 如FITC染料 绿光激发 红色荧光 如罗丹明染料

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巴昨小儿: 对细胞膜染色需要的染料如下: DiO(细胞膜绿色荧光探针),呈现绿色荧光. 荧光素双醋酸酯(FDA),绿色荧光. 细胞染色方法: PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶...

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本溪市19265128807: 请教可以长时间染活细胞的荧光染色剂 -
巴昨小儿: 示踪染料有很多种,跟据你的目的和实验方法来选取,比如calcein,dri,cfda,还有bcef等.这些染料都非常成熟,光毒和淬灭都很低,当然要考虑到你采集图像时的显微镜参数.比如calcein,常用的示踪,绿光(虽然这些颜色只是根据光谱加上去的伪彩),但要考虑你的实验过程中结合细胞结构,是否会伴随calcein的泄漏,就是荧光降低.dri,还可以看膜啊 cfda也不错 bcef虽是ph指示,但你试验时不仅可观察细胞,还可看细胞ph变化,也行.当然你或许还要结合其他方法,如细胞免疫化学等手段去双染或多染,都需要综合考虑染料之间特性.单独染一个染料,有点浪费,不如多染,数据和图像也好看些.现在流行细胞成像.

本溪市19265128807: 大肠杆菌用什么荧光染料染色? -
巴昨小儿: 吖啶橙

本溪市19265128807: 用什么荧光染料标记lc3比较好啊,说说他们的激发和发射波长,谢谢 -
巴昨小儿: 做单荧光标记的话各种颜色的荧光染料均可以.你是要构建融合蛋白还是标记抗体?普通荧光显微镜观察还是Confocal下观察?若是要构建融合蛋白的话可以接上GFP或RFP. 抗体标记的话可以自己制作或购买,二抗可标记FITC或rodanmin,这些都是可以的.至于激发和发射波长,一般的普通荧光显微镜不是很严格是蓝色激发绿色,绿色激发红色,紫色激发黄色;要是在confocal上有特定的激发波段,会给出标识.具体的参数记得不是很清楚了,FITC的激发波长是490~495nm,发射波长大约是520~530nm,可查阅具体的每台机子.

本溪市19265128807: 荧光显微镜的使用方法 -
巴昨小儿: (1)打开灯源,超高压汞灯要预热15min才能达到最亮点. (2)透射式荧光显微镜需在光源与暗视野聚光器之间装上所要求的激发滤片,在物镜的后面装上相应的压制滤片.落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片、双色束分离...

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