trizol提取RNA时，最后的RNA为什么不能完全干燥，其干燥后不易溶解的原理是什么?
RNA可溶解于碱性溶液中，
或者用可以短期保存RNA的专门的溶液TE溶液。
提取RNA时如何去除DNA的污染的方法：
注意实验室的标准化问题，注意污染的存在，同时严格按照说明书上的操作应该没有
问题。发现DNA污染，用DNAse I 消化1小时，37度
离心取上清的时候，一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体。
直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌,然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液,而DNA不可溶,离心后的上清液就不含有DNA了。
RNA提取步骤：1. 匀浆处理：① 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。② 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。③ 细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106 动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。2. 将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。3. 可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。4. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60%。6. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。8. 用75%乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml TRIzol至少加1ml 75%乙醇。2-8℃不超过7500×g离心5分钟，弃上清。9. 室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可。不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200μl无RNase的水或0.5%SDS，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS溶液。RNA也可用100%的去离子甲酰胺溶解，-70℃保存。注意事项：
从少量样品（1-10mg组织或102-104细胞）中提取RNA时可加入少许糖原以促进RNA沉淀。例如加800ml TRIzol匀浆样品，沉淀RNA前加5-10μg RNase-free糖原。糖原会与RNA一同沉淀出来，糖原浓度不高于4mg/ml是不影响第一链的合成，也不影响PCR反应。
匀浆后加氯仿之前样品可以在-60至-70℃保存至少一个月。RNA沉淀可以保存于75% 酒精中2-8℃一星期以上或-5至-20℃一年以上。
分层和RNA沉淀时也可使用台式离心机，2600×g离心30-60分钟。预期产量：1mg组织或1×106细胞提取RNA分别为：肝和脾6-10μg，肾3-4μg，骨骼肌和脑组织1-1.5μg，胎盘1-4μg，上皮细胞8-15μg，成纤维细胞5-7μg 。
75%酒精洗涤，干燥的时候酒精容易挥发，水应该慢一点，只要酒精全部挥发掉了，就不影响后续PCR等实验，干燥5-10min即可
系泼儿童：[答案] 最后的到RNA的上一步是酒精洗涤,提取的RNA当然不是完全干燥,提取后可以用小号枪头洗出较多的液体,剩下就在空气中自然干燥;但是太干就不容易溶解,因为太干的话RNA之间就结合的非常紧密.
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： RNA提取过程中rRNA来源?一般方法(比如Trizol法)提取总RNA,包括mRNA,rRNA,tRNA,hnRNA,siRNA等,其中这些rRNA都是来源于游离的35s、28/25s... - ？
系泼儿童：[答案] 认为会的路过,等牛人回答
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： 为什么.trizol提取RNA 经典三条带显示rna完整性？
系泼儿童： 电泳时,三条带中,核糖体RNA(rRNA)在距离胶孔较近的位置上,28s、18s为核糖体的大、小两个亚基,第三条带,也就是最下面那条为5.8s和5s(以上为真核生物).因为长度差距不大,故很难在电泳中区分出来. 在提取过程中,有时会出现RNA酶的污染,导致RNA降解.降解时,越大的RNA越容易降解,且降解为较小的片段,在电泳时也会跑得更快. 所以,电泳时,若缺失28s条带,28s条带亮度较弱,5s和5.8s条带变强或条带下方有弥散,则说明RNA完整性被破坏.且条带越弱,越模糊,说明RNA完整性越差,RNA中所含的信息就越不完整
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： trizol法提完rna后怎么纯化mrna - ？
系泼儿童： 有专门的试剂盒,这个一般都是买的,用oligo(dT)亲和mRNA(polyA结构).
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： TRIzol法提取流感病毒RNA每个步骤详细注意事项? - ？
系泼儿童： 三、Trizol法提取法(这是提禽流感病毒的步骤,供参考) Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.1、取鸡胚尿囊液,加入5-10倍体积Trizol液,混匀;2、室温放置5分钟,然后以每1ml Trizol液加...
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： 求TRIZOL提取RNA的详细步骤 - ？
系泼儿童：[答案] 厚百提供:1、在提取组织RNA时,每50~100mg组织用1ml Trizol试剂对组织进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10 ╳106个细胞加1ml Trizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞.2、将组织或细胞的Trizol裂解液...
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： trizol方法提取RNA过程中哪一步加DNase处理 - ？
系泼儿童： 我的方法里没用DNase,效果也不错,你可以参考一下:取约5*106个细胞,经PBS洗涤后,加入800μL TRIzol,混合后室温放置5分钟,再加入196μL氯仿,振动15至30秒,室温放置2至3分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,小心将上层液体转移至新管中,加入500μL的异丙醇,轻弹使其混匀,室温放置20分钟,以4℃,12 000*g离心15分钟,此时RNA沉淀于管底形成胶状小球,弃掉上清,用75%的乙醇清洗RNA沉淀,以4℃,8 000*g离心5分钟,弃掉上清,快速干燥RNA,加入30至50μL无RNA酶的水溶解RNA,用紫外分光光度计测量RNA浓度及OD260与OD280的比值.
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： Trizol法提取RNA操作步骤? ？
系泼儿童： 动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌,样品量从几十毫克至几克.用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染.RNA可...
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： trizol提取烟草组织100mg叶片总RNA,最终浓度大概多少?30ul溶解RNA.每次提的OD260/OD280较低, - ？
系泼儿童：[答案] 我做过Trizol法提取RNA实验,在这方面之前也有困惑,不过查了很多资料后才知道:Trizol提取的RNA用DEPC处理的水溶解的话,A280/A260比值为1.4、1.5左右比较正常,若用TE溶解的话,其比值≥1.8.不知道你的OD260/OD280较低,是不是因...
阿克塞哈萨克族自治县17898807394： Trizol法提取流感病毒 RNA - ？
系泼儿童： 1、取200ul样品数+阴性对照+阳性对照加入1.5ml灭菌eppendorf管;2、加600ul异硫氰酸胍,然后加入对照和样品,再加200ul氯仿,颠倒混匀;3、13000rpm离心15min;4、在第3步离心快结束时,另取同样多eppendorf管,加入400ul于-20℃...
