反转录法的原理是什么？
逆转录PCR （ RT-PCR ）的原理
逆转录PCR (RT-PCR )具有较高的灵敏性、操作简单等优点，常用于基因定量分析、生物学检测等，此外常用逆转录PCR克隆目的基因。 本文主要讲述了逆转录PCR的原理、重要参数以及操作注意事项。
cDNA的合成是RT-PCR 的重要环节。以mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，随机引物、oligo(dT)或基因特异性引物的引导下合成互补的DNA(complementary DNA，cDNA)，再按照普通PCR的方法用两条引物以cDNA为模板，则可扩增出不含内含子的可编码完整基因的序列。
逆转录PCR 重要参数
不同mRNA拷贝成cDNA的效率不同;因此，适合于一种mRNA拷贝的条件可能对另一种mRNA不适合。一般来说，从事不均一mRMA群体时，所使用的条件是导致cDNA合成的终产量达到最大，下述参数十分重要。
1.逆转录酶 有两种不同的逆转录酶可以催化以mRNA为模板，oligo(dT)作为引物，合成与mRNA互补的cDNA链。一种来自纯化的禽成髓细胞瘤病毒(AMV)，由两条肽链组成，具有聚合酶活性和很强的RNA酶H活性，它最适温度是42℃，最适pH8.3。在高反应温度时可消除mRNA的二级结构对逆转录的阻碍，然而高水平的RNA酶H的活性既抑制cDNA产生也限制其长度。另外，禽源逆转录酶制剂可被能切割DNA的核酸内切酶污染。
另一种来源于鼠白血病病毒(Mo-MLV)，是单肽链的，有RNA聚合酶活性和相对较弱的RNA酶H活性，最适温度37℃，最适pH7.6，较弱的RNA酶H活性对获得2-3kb的mRNA的全长cDNA有很大好处。
在第一链反应前可用氢氧化甲基汞处理，破坏mRNA的二级结构，这一步对于最适反应温度较低(37)℃的鼠源逆转录酶催化的反应可能更为重要。临合成cDNA第一链之前加入过量的巯基试剂，可以使氢氧化甲基汞从RNA上解离。
2.单价阳离子 离子条件基本上影响各种模板的转录效率。用钾比用钠离子可获得较长的转录产物。对于cDNA长度的最适钾离子浓度为140-150mM。
3.二价阳离子 对于反转录酶活性来说，二价阳离子是必需的。低于4mM Mg2 未能观察到活性;产生全长转录产物的最适浓度是6-10mM。
4.脱氧核苷三磷酸 使用四种脱氧核苷三磷酸(dNTP)中每一种的高浓度对于有效合成cDNA是特别重要的。如果其中只有一种的浓度下降到10-50微摩尔以下，全长转录物的产量将明显下降。常用的dNTP的浓度为200-250微摩尔。
材料与方法
操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水
65C反应10min,冰上放置5min后：这一步是让RNA变性，把RNA的二级结构打开；
再加dNTP，RNaseA，BUFFER, MTV逆转录酶，
反应25℃10min：这一步是让反转录引物（oligodT，随机引物）和模板RNA退火结合
37℃60min：这一步是反转录酶的工作温度
70℃10min：这一步是变性，把合成的cDNA和RNA变性开，就拿到单链的cDNA
反转录法意思是以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA（cDNA），然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获取所需的基因。是基因工程中提取目的基因的重要方法之一。
反转录法是以rna为模板。来提取出DNA的过程。是一种特殊的合成酶
反转录：以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程
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阜宁县15648597461： RNA反转录成cDNA只要一个引物还是一对引物,原理是啥,我有点糊涂了 - ？
释娅芩胆：[答案] 一个,运用反转录,以一条DNA单链为模板,以一个引物为转录的开始,通过DNA聚合酶进行链接(反转录的最终长度是不确定的,可能无限长)
阜宁县15648597461： 基因工程中 目的基因的提取 如果用人工方法(转录法和反转录法) 分别是怎么实现的只需简单说明 是 已知 什么 再得到 什么(如“知道RNA 就可求出DNA... - ？
释娅芩胆：[答案] 这是中心法则转录 已知DNA,通过转录得到mRNA反转录和转录的过程正好相反,已知RNA,反转录出DNA转录和反转录都是有模版链,通过基因互补配对得到另一条链,并非人工合成.
阜宁县15648597461： 反转录法获得目的基因的过程? - ？
释娅芩胆：[答案] 1.mRNA的纯化 2.cDNA第一链的合成 3.cDNA第二链的合成 4.cDNA克隆 5.将重组体导入宿主细胞 6.cDNA文库的鉴定 7.目的cDNA克隆的分离和鉴定 大概就这7个过程把.
阜宁县15648597461： 什么是反转录 - ？
释娅芩胆： 反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程,是DNA生物合成的一种特殊方式.反转录与逆转录不等同.反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工合成DNA的过程;逆转录是RNA类病毒自主行为,在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程.二者虽同为RNA→DNA的过程,但地点不同,相对性的来说,反转录在体外,逆转录在体内.
阜宁县15648597461： 什么是反转录？
释娅芩胆： 反转录 以反义RNA为模版,通过反转录酶,进行的RNA转录
阜宁县15648597461： 反转录是什么 - ？
释娅芩胆： 反转录是以RNA为模板,通过反转录酶,合成DNA的过程,是DNA生物合成的一种特殊方式.
阜宁县15648597461： 重组DNA技术中,如何采用逆转录PCR方法直接从mRNA获得特定基因的cDNA.(即逆转录PCR的基本原理) - ？
释娅芩胆：[答案] 一般是由DNA的一条链为模板,合成mRNA,逆转录由mRNA,密码子,氨基酸中一种合成DNA,mRNA是A,T,U,C组成,而且要遵守碱基互补配对原则,所以根据mRNA上的碱基推算出模板链碱基组成,同时将U换成T,然后由DNA模板链推算出对应...
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