血块中提取RNA的步骤
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:
Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
Trizol作用原理:
在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。
水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后，用乙醇可从中间相沉淀得到DNA，加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。
扩展资料与DNA不同，RNA一般为单链长分子，不形成双螺旋结构，但是很多RNA也需要通过碱基配对原则形成一定的二级结构乃至三级结构来行使生物学功能。
RNA的碱基配对规则基本和DNA相同，不过除了A-U、G-C配对外，G-U也可以配对。
在细胞中，根据结构功能的不同，RNA主要分三类，即tRNA（转运RNA），rRNA（核糖体RNA），mRNA（信使RNA）。mRNA是合成蛋白质的模板，内容按照细胞核中的DNA所转录；tRNA是mRNA上碱基序列（即遗传密码子）的识别者和氨基酸的转运者；rRNA是组成核糖体的组分，是蛋白质合成的工作场所。
参考资料来源：百度百科-RNA
1、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb
2、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
3、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。
4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）
5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。
6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
7、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。
扩展资料：
DNA提取原则：
1、保证核酸一级结构的完整性；
2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；
3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除。
参考资料来源：百度百科——DNA提取
像以上全血的RNA提取有两种思路：
1）直接处理抗凝的全血，即加入如Trizol的裂解液直接往下做。此方法有个缺点：处理的体积血液体积有限，一般1ml Trizol处理100ul血液，最多不超过200ul.
2) 先去除血液中的红细胞分离出其中的白细胞（即淋巴细胞），然后提取白细胞的RNA。此方法的缺点：只能提取得到淋巴细胞的RNA，血液中游离的如病毒RNA无法提得。
如果按照一般的标准，我个人觉得RNA提得还是可以的。一般我们用BIOG离心法提取RNA后测完RNA后按照浓度电泳只上样1ug，太多反而会影响电泳效果（有次我们有个博后电泳上样量高了，跑完之后5s亮的吓人，16、23很弱，都以为是降解了；后来降低浓度跑了一次电泳，结果就正常了。所以RNA电泳控制在上样1ug左右就可以，不要高出太多；而且你的od达到了5000ng，这个时候测得数值往往不准，可以取少量样品适当稀释后，再测）。一般初始菌量过高，会导致trizol法提得RNA杂质（包括蛋白、DNA等等）太多，所以建议降低初始菌量。如果rna杂质多，可以通过DNA酶处理，然后酚仿抽提去蛋白，最后用70%乙醇沉淀得到RN
RNA提取步骤是什么
1．提取 称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g，倒入 100ml三角瓶中，加 NaCl 2.5g，水25ml，搅拌均匀，置于沸水浴中提取lh。2．分离 将上述提取液用自来水冷却后，装入大离心管内，以4000r／min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。3．沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内，并置入放有冰块的...
组织蜡块如何提取RNA
1楼存在错误，因为是组织蜡块在使用Trizol法之前，应该先用二甲苯去除石蜡。用过Trizol法效果不是很好，建议用QIAGEN试剂盒FFPE RNA提取试剂盒。QIAGEN试剂盒毕竟是全世界核酸提取的老大。
科普讲堂 | RNA样本提取与判读的方法及常见问题分析
1．取样，研磨（组织）： 迅速取出组织样本，在电子天平中称重约0.3-0.5 g（也可根据实际经验估测取样量），放入液氮预冷的研钵中，边研磨边加液氮，整个过程都不要使组织融化。2．裂解：（1）组织：按每100 mg组织加入1 mL TRIzol，继续研磨至较细粉末，将组织裂解液转移到1.5 mL 离心管中，...
如何选择正确的RNA提取方法
3）、立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm），这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。4. 选择合适破壁方法 细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说...
石蜡包埋组织RNA如何提取
12. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 离心管内，加入50-100 μL 洗脱液，静置3分钟，12,000 rpm 4℃离心2分钟，收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-70℃保存。注意事项：1. 为防RNA酶污染，实验过程中最好戴一次性干净手套、口罩，使用处理过的无RNA酶的容器和无RNA酶的超纯水 。2. ...
RNA的提取方法
4、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）5、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。6、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。
pcr实验步骤详细
一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层...
提rna没看到rna沉淀咋回事
rna．提取称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 2.5g,水25ml,搅拌均匀,置于沸水浴中提取lh. 2．分离将上述提取液用自来水冷却后,装入大离心管内,以4000r／min离心10min,使提取液与菌体残渣等分离. 3．沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内,并置入放有冰块的250ml...
提取RNA相关
因为提取的组织，在加入 Trizol 后增加了一步简短的离心，可以帮助去掉一些无法降解的组织，比如纤维和杂质之类，然后取上清再加入氯仿，可以帮助提高氯仿的效率。然后就是在加入 Trizol 后，可以将裂解液放到-80 冻存半小时以上，据说冻融过程中可以再次帮助更加充分的裂解细胞，分离蛋白和 RNA。我试了一...
从哪些植物种提取RNA
1. 利用RNeasy Plant Mini Kit提取总RNA 1) 于1.5 ml离心管中加入0.5 ml RLT缓冲液和5ul β-巯基乙醇；2) 称取约100 mg材料，液氮研磨后转移到提取液中，涡旋混匀，56℃，2 min；3) 加入紫色柱子，23℃， 12000 rpm，离心2 min；4) 滤液转入一新的1.5 ml离心管中，加入1\/2体积的...
易周脉安： 方法与细胞组织提RNA基本相同.具体有以下几种方法. A:分离淋巴细胞群再提取 1. 新鲜血液2ml,肝素钠抗凝,D-HANK'S对倍稀释.2. 将稀释液轻置于4ml淋巴细胞分离液上层.3000rpm x 20min, 4度.3. 取淋巴细胞层,PBS对倍稀释,3000...
辽源市17541474963： 怎样用TRIzol 法提取动物血清总RNA - ？
易周脉安： 1、将组织在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg组织加入1ml的Trizol液研磨;每2E6个细胞加入1mLTrizol.注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%.2、研磨液室温放置5min,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧离心管...
辽源市17541474963： trizol法提取血中的RNA,怎样做量会更多 - ？
易周脉安： 或再适当延长一点时间.迅速离心,少加些血.混匀之后放置10分钟左右,混匀再去离心. 可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷1 血要新鲜,之后加75%乙醇.只洗一遍. 3 每个步骤操作要快,用的时间药短些,防止降解 4 异丙醇沉淀的时候,放-20°C的冰箱半个小时.一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水. 6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存,洗2遍易损失部分RNA.如果是冻存的,在解冻时要完全,之后再加Trizol. 2 可以稍多加一些Trizol,直接加三氯甲烷.干燥一会就迅速加DEPC水少量. 5 不要过分干燥,管内稍有点残余的乙醇也没关系
辽源市17541474963： 如何提取血RNA - ？
易周脉安： 都应该是可以的.不过提取RNA一般都用kit(试剂盒),RNA和DNA不一样,杂质多,易降解,所以基本上不用自己配的溶液提. 虽然我个人没有做过,但是全血和血清中提取RNA都是可以的,只是用的trizol和提取组织细胞中的不一样. 你尝试搜索一下Trizol LS,看看是不是你需要的.
辽源市17541474963： 如何提取和研究血液DNA,RNA与蛋白 - ？
易周脉安： 如何选择最佳的全血DNA、RNA提取方法?从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了,提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析,可供选择的方法非常多,乱花渐欲迷人眼,如何选择最适合的方法,成了很多人实验...
辽源市17541474963： 从全血里提取RNA的方法? - ？
易周脉安： 10月13日 13:35 RNAgents总RNA提取系统 1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA? 2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样? 3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少? 4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的...
辽源市17541474963： RNA提取用什么方法,具体的步骤?？
易周脉安：1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积不应超过TRIzol体积10℅. b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用...
辽源市17541474963： 如何提取全血中的线粒体 - ？
易周脉安： 要用试剂盒提取.首先,用线粒体提取试剂盒分离并富集线粒体;其次用线粒体裂解试剂裂解线粒体;最后,用RNA提取试剂提取RNA.
辽源市17541474963： RNA病毒的提取方法 - ？
易周脉安： 1、 TROzlo试剂、氯仿、75%乙醇(0.1% DEPC配制). 2、 塑料器皿需用0.1% DEPC水浸泡. 3、 0.1%DEPC水:100ml dd水中加入DEPC0.1ml,充分振荡,37℃孵育12h以上,121℃高压灭菌20min,于4℃保存. 1、 样品处理 (1) 组织...
辽源市17541474963： 抽全血做二代测序抽rna用什么方法 - ？
易周脉安： 提取RNA是吧,可以用酚氯仿提取,也可以用凯杰生物的RNA提取试剂盒的
