为什么在制作单克隆抗体时,对已经选出的杂交瘤细胞还需要进一步的进行筛选啊??

作者&投稿:家樊 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
单克隆抗体中为什么要进行第二次筛选?书上说因为要选出人们所需要抗体的杂交瘤细胞,但在开始时都给小鼠~

因为细胞的融合是随机得而且概率小于100%,所以筛选前培养基里的细胞好多种:B细胞与B细胞融合,瘤细胞与瘤细胞融合,未融合的细胞,B细胞与瘤细胞融合,这还只是考虑细胞两两融合的情况,还有可能多个细胞融合在一起,所以要经过筛选得到需要的细胞

第一次筛选:

(1)筛选对象:脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞(即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液)。另有少量多细胞聚体,因寿命短而迅速死亡,故无需特殊筛选。

(2)筛选方法:用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。(注重:HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路,而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。)

(3)筛选结果:脾-瘤细胞正常生长,其它细胞都会死亡。(析因:脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,虽有核酸合成的旁通路,但不能长期增殖;瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶,核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断,因核酸合成障碍而死亡;脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶,虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。)

第二次筛选:

(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)

(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。

(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

因为杂交后有三种情况,瘤瘤型,抗抗型,抗瘤型(包括瘤抗型),只有抗瘤型是符合要求的,所以还要进行筛选,把瘤瘤型和抗抗型分离出去。

第一次筛选:

(1)筛选对象:脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞(即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液)。另有少量多细胞聚体,因寿命短而迅速死亡,故无需特殊筛选。

(2)筛选方法:用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。(注重:HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路,而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。)

(3)筛选结果:脾-瘤细胞正常生长,其它细胞都会死亡。(析因:脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,虽有核酸合成的旁通路,但不能长期增殖;瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶,核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断,因核酸合成障碍而死亡;脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶,虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。)

第二次筛选:

(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)

(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。

(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

以为用抗原刺激小鼠时在小鼠的脾脏中有多种效应B淋巴细胞,所以第一步筛选出来的杂交瘤细胞也就有多种,所以才要对进行第二次筛选,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

为了纯化


(4他1他?桂林二模)在制备单克隆抗体的过程中,对骨髓瘤细胞和免疫的图...
特定培养基培养细胞的目的是筛选出既能手量增殖、又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,因此其他的细胞都不能在此培养基上生存.在这种培养基上不能存活和繁殖的细胞有①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞 ④B淋巴细胞自身融合细胞⑤小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞.故选:B.

单克隆抗体的制备
单克隆抗体制备有两种方法。第一种方法是:增量培养法,即将杂交瘤细胞在体外培养,在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备,一般应用无血清培养基,以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。第二种也是最普遍采用的方法是小鼠腹腔接种法。选用BALB\/c小鼠或其亲代小鼠,先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔...

简述单克隆抗体的发展历程、原理及应用是?
在单克隆技术出现之后,许多研究者发现了这一技术的前景,纷纷投入到这一领域的研究。该技术也飞速的发展起来,到二十世纪八十年代中期,单克隆技术已日臻完善,开始广泛应用于生物医学研究和生物技术的各个领域,以及临床诊断和治疗的许多领域。特别是在2000年后,人类基因组草图绘制的完成,生命科学的发展将...

制备单克隆抗体过程中要用到那些技术
制备单克隆抗体主要是要得到杂交瘤细胞,杂交瘤细胞是免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交得到的,所以这里利用了动物细胞培养、动物细胞融合,然后就是对杂交瘤细胞的筛选,这里就没有什么技术了!

单克隆抗体发展历史
目前,用于免疫学检测的单克隆试剂种类很多,其中小鼠抗人CD 系列单克隆抗体试剂便有近百种,此外,还有小鼠抗人班产系列单克隆抗体试剂、小鼠抗人殆系列单克隆抗体试剂、小鼠抗人细胞因子单克隆抗体试剂、小鼠抗人生长因子系列单克隆抗体试剂、小鼠抗人肿瘤相关抗原单克隆抗体试剂、小鼠抗酶单克隆抗体试剂及小鼠抗人中间丝...

制备单克隆抗体的过程
(一)脾细胞 1.材料 (1)免疫过的血清抗体滴度高的Balb\/c鼠。 (2)1640培养液 单克隆抗体制备流程 (3)2.5%FCS-1640营养液 2.操作方法 (1)拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2)将小鼠放于70%酒精中浸泡消毒,取出固定于板上,在无菌条件下取脾。 (3)把脾放入5ml含有2...

什么叫单克隆
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,可制备...

为什么在制备单克隆抗体的时候要两次筛选?
(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

什么叫单克隆抗体?
被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。

在用免疫小鼠制备单克隆抗体时,能够产生单克隆抗体的细胞是( )A.免疫...
A、免疫小鼠体内的B淋巴细胞能够增殖分化成记忆细胞和效应B细胞,不能产生抗体,A错误;B、效应B淋巴细胞不能增殖,因此不能用来制备单克隆抗体,B错误;C、选择性培养基筛选出的杂交瘤细胞虽然能够大量繁殖,但是不一定能产生特异性抗体,C错误;D、利用选择性培养基筛选出的能够大量繁殖并分泌特定抗体的...

赤城县15064734726: 为什么在制作单克隆抗体时,对已经选出的杂交瘤细胞还需要进一步的进行筛选啊? -
禾浦盐酸:[答案] 以为用抗原刺激小鼠时在小鼠的脾脏中有多种效应B淋巴细胞,所以第一步筛选出来的杂交瘤细胞也就有多种,所以才要对进行第二次筛选,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

赤城县15064734726: 为什么制备单克隆抗体时要用已免疫的B淋巴细胞 为什么用选择培养基选出杂交瘤细胞后还要进行抗体阳性检测 -
禾浦盐酸: 书上说的B淋巴细胞是指效应B细胞(浆细胞),只有已免疫的B淋巴细胞(即效应B细胞)才能分泌抗体.浆细胞有专一性,还要进行抗体阳性检测是因为:第一次用选择培养基筛选出的杂交瘤细胞有多种,因为当初取自小鼠脾脏的效应B细胞有多种,总共能分泌多种不同抗体,这次筛选只是去处未融合细胞和同种融合细胞,所以最后体内体外培养前还有一步分离各种杂交瘤细胞,专一抗体阳性检测是为了保证我们现在所需要制备的这种单克隆抗体一直存在,避免实验操作失误导致产生的这种单克隆抗体的杂交瘤细胞死亡.

赤城县15064734726: 在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选 -
禾浦盐酸: 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

赤城县15064734726: 制备单克隆抗体时,为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞? -
禾浦盐酸: 因为B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力,但不能在体外增殖;骨髓瘤细胞是一种癌细胞,它能在体外培养条件下无限增殖,但不能产生抗体.因此将二者融合,产生杂交瘤细胞,它会兼有两个亲本细胞的特性.

赤城县15064734726: 单克隆抗体的制备过程中,经过第一次筛选,已经选出了杂交瘤细胞;还要进行第二次筛选,第二次筛选的目的是选出 -
禾浦盐酸:[选项] A. 能产生所需抗体的杂交瘤细胞 B. 能增殖的杂交瘤细胞 C. 细胞周期长的杂交瘤细胞 D. 产生多种抗体的杂交瘤细胞

赤城县15064734726: 在单克隆抗体制备的时候,选用的为什么是b淋巴细胞而不是效应b细胞 -
禾浦盐酸: 既然是要制备单克隆抗体,必须是效应B细胞.因为效应B细胞分泌的抗体是只针对一种抗原表位的,即单克隆的.如果是B淋巴细胞,又会分化成不同效应B细胞,分泌的抗体就不专一了.

赤城县15064734726: 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 -
禾浦盐酸: 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

赤城县15064734726: 为什么制备单克隆抗体选用骨髓瘤细胞 -
禾浦盐酸: 骨髓瘤细胞具有无限分裂的能力,由于该细细并非高度分化的细胞,因此分裂能力较强,而其它种瘤细胞的分裂能力较弱(这是根据骨髓细胞是属于全能性较高的细胞下结论的),所以要用骨髓瘤细胞.

赤城县15064734726: 为何制备单克隆抗体,杂交瘤细胞培养后要选出能产生特定抗体的细胞群 -
禾浦盐酸: 只要有抗原刺激,那么体内的每个效应B细胞都会产生抗体,但抗体有特异性和非特异性之分,只有特异性抗体,才能合相应的抗原产生免疫应答,产生免疫发应,

赤城县15064734726: 细胞工程中,制备单克隆抗体时,需要经过三次筛选检测,这三次的目的是什么? -
禾浦盐酸:[答案] 记得只经过两次筛选 第一次是筛选杂交瘤细胞 第二次是筛选能够产生单一抗体的杂交瘤细胞 当筛选完毕就可以进行体内或体外培养了

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