为什么在制备单克隆抗体的时候要两次筛选?

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在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选?~

第一次筛选:

(1)筛选对象:脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞(即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液)。另有少量多细胞聚体,因寿命短而迅速死亡,故无需特殊筛选。

(2)筛选方法:用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。(注重:HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路,而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。)

(3)筛选结果:脾-瘤细胞正常生长,其它细胞都会死亡。(析因:脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,虽有核酸合成的旁通路,但不能长期增殖;瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶,核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断,因核酸合成障碍而死亡;脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶,虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。)

第二次筛选:

(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)

(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。

(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

第一次筛选是排除B-B,癌细胞-癌细胞的情况,留下B和癌细胞结合的细胞;

第二次筛选时检测基因能否表达。

第一次筛选:
(1)筛选对象:脾细胞、瘤细胞、脾-脾细胞、瘤-瘤细胞、脾-瘤细胞(即羊红细胞免疫过的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后得到的细胞混合液)。另有少量多细胞聚体,因寿命短而迅速死亡,故无需特殊筛选。
(2)筛选方法:用HAT选择培养基筛选出正常生长的细胞。(注重:HAT培养基含有次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷T。其中氨基喋呤能阻断核酸合成的主通路,而次黄嘌呤在磷酸核糖转移酶HGPRT的催化下能合成RNA或胸腺嘧啶核苷在胸腺嘧啶核苷激酶TK的催化下合成DNA均属于核酸合成的旁通路。) (3)筛选结果:脾-瘤细胞正常生长,其它细胞都会死亡。(析因:脾细胞和脾-脾细胞的核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,虽有核酸合成的旁通路,但不能长期增殖;瘤细胞和瘤-瘤细胞缺乏核酸合成旁通路的酶,核酸合成主通路又被氨基喋呤阻断,因核酸合成障碍而死亡;脾-瘤细胞具有脾细胞的核酸合成旁通路酶,虽核酸合成主通路被氨基喋呤阻断,但可利用培养基中的次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成核酸而得以生存。)
第二次筛选:
(1)筛选对象:多克隆杂交瘤细胞群体。(即产生多种抗体的脾-瘤细胞混合群体。)
(2)筛选方法:抗体检测( 如 免疫荧光技术、放射免疫技术等,实际上是利用稀释法,在聚乙烯微板孔内逐个杂交瘤细胞分开培养,然后检查每孔中产生特定抗体的能力)。
(3)筛选结果:产生专一性抗体的杂交瘤细胞。

第一次筛选把杂交瘤细胞选出来 第二次筛选把能产生单一抗体的杂交瘤细胞选出来


什么是单克隆抗体技术?
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,可制备...

什么是单克隆抗体
此外,单克隆抗体还被广泛应用于癌症治疗、自身免疫性疾病的治疗等领域。通过与药物或其他治疗手段的联合应用,单克隆抗体可以有效地攻击疾病的关键环节,提高治疗效果。总的来说,单克隆抗体是一种具有广泛应用前景的生物技术产品。它们的制备和应用为生物医学研究和临床治疗带来了革命性的进步,有望在未来为...

细胞培养中获得单克隆的方法有哪些
单克隆是指‘子代来源于一个母体.细胞培养:细胞的大规模克隆.细胞培养,既包括微生物细胞的培养,细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞.单克隆一般常指动植物细胞的克隆,细胞培养一般是指动物、微生物等细胞的细胞克隆.二者没有什么明显区别.单克隆在单克隆抗体制备中...

单克隆抗体制备过程中运用了什么细胞工程技术
制备单克隆抗体主要涉及的细胞工程技术包括动物细胞培养、动物细胞融合技术等

单克隆抗体的制备步骤
3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基;4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增;5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备一般采用动物体内诱生法和体外培养法...

单克隆抗体的制备过程高中生物
单克隆抗体(MAb):是针专一的抗原决定簇产生的抗体,单克隆技术又名杂交瘤技术,起源于1975年,由G.KÖhler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞,生产抗体。此类抗体是专一的,或者说是同一种蛋白质,因此是单克隆的。二、杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要...

什么叫单克隆
单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备,杂交瘤(hybridoma)抗体技术是在细胞融合技术的基础上,将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群,可制备...

单克隆抗体的制备步骤
过程 1)免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb\/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备,也可采用脾内直接免疫法。2)骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前,骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选,防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性(恢复HGPRT的活性的细胞不能...

小鼠骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合可制备单克隆抗体。这句话怎么不对_百度...
应该是骨髓瘤细胞和效应B细胞融合产生单克隆抗体。因为只有效应B细胞才能产生抗体,B淋巴细胞不行的

单克隆抗体制备详细步骤
单克隆抗体的生产技术自1975年Köhler和Milstein的开创性工作后,已成为生命科学研究和药物开发的重要工具。预计到2023年,单抗药物市场将达到2189.7亿美元。单克隆抗体分为线性表位和结构识别两种,后者应用广泛于免疫沉淀、免疫染色等领域。生产过程包括免疫小鼠、制备佐剂、免疫接种和血清效价检测。弗氏...

垫江县17213668131: 在制备单克隆抗体是为什么要进行两次筛选 -
中叔翰硫酸: 第一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

垫江县17213668131: 制备单克隆抗体需要进行几次筛选,目的分别是什么? -
中叔翰硫酸:[答案] 两次.第一次是筛选出浆细胞—浆细胞融合细胞 和 浆细胞—骨髓瘤细胞融合细胞(抗原抗体反应) 第二次是筛选出浆细胞—骨髓瘤细胞融合细胞(继续培养)

垫江县17213668131: 为什么植被单克隆抗体要经过两次筛选 -
中叔翰硫酸: 第一次是筛选出杂交瘤细胞;但这些杂交瘤细胞中有些是不能产生抗体的,还有些是不能产生我们需要的抗体的; 第二次就要筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.

垫江县17213668131: 制备单克隆抗体过程,是需要两次筛选还是三次筛选?为什么? -
中叔翰硫酸: 两次. 第一次是筛选出杂交瘤细胞,第二次是筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞.

垫江县17213668131: 为什么在制作单克隆抗体时,对已经选出的杂交瘤细胞还需要进一步的进行筛选啊? -
中叔翰硫酸:[答案] 以为用抗原刺激小鼠时在小鼠的脾脏中有多种效应B淋巴细胞,所以第一步筛选出来的杂交瘤细胞也就有多种,所以才要对进行第二次筛选,选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞

垫江县17213668131: 单克隆抗体两次筛选的理由? -
中叔翰硫酸: 第一2113次:筛选出AB型细胞(A:浆细胞,B:骨髓瘤细胞),不要AA、5261BB型. 第二次:筛选出有特异性的4102杂交瘤细胞,检验阳性.单克隆细胞特点:1653灵敏度高、特异性强、可大量制备 杂交瘤细胞特点:能体外大版量繁殖....忘记了...详细请看人教版生物权选修三

垫江县17213668131: 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别?___. -
中叔翰硫酸:[答案] 单克隆抗体制备过程中共有2次筛选,一次筛选出杂交瘤细胞,第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞.这两次筛选的原理和方法不同:第一次筛选的原理是细胞中DNA合成有2种途径,方法是用选择培养基进行筛选;第二...

垫江县17213668131: 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别 -
中叔翰硫酸: 这好像是高中生物吧 先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合 第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况: 1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞 那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞. 所以有两次筛选

垫江县17213668131: 细胞工程中,制备单克隆抗体时,需要经过三次筛选检测,这三次的目的是什么? -
中叔翰硫酸:[答案] 记得只经过两次筛选 第一次是筛选杂交瘤细胞 第二次是筛选能够产生单一抗体的杂交瘤细胞 当筛选完毕就可以进行体内或体外培养了

垫江县17213668131: 利用细胞………单克隆抗体时有两次筛选,第一次筛选的目的是?第二次筛选的目的? -
中叔翰硫酸: 第一次获得杂交细胞,第二次获得可以产生抗体的杂交细胞.

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