单染色法的基本步骤有哪些?有何注意事项
一、实验步骤：
（1）样品制备：对于贴壁生长细胞，胰酶消化，调整细胞浓度约1×105/ml，滴加于盖玻片上(置于6孔板中)，培养相应时间后，取出细胞爬片，用PBS 洗涤3次。
（2）样品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗涤2次，每次1min。
（3）染核：苏木素染液染色2-3min，自来水洗涤。
（4）分色：镜下观察，若细胞核染色过深，用1%盐酸酒精溶液分色数秒，自来水洗涤。
（5）染胞质：浸入伊红染液染色1min，自来水洗涤。
（6）吹干或自然晾干细胞 爬片后，中性树胶封片。
若细胞用4%多聚甲醛固定，则染色时间相应延长，苏木素染色12-15min，伊红5min即可。
二、注意事项：
1、染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长，组织酸化而影响细胞核着色。因此，要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min，这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳，可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2、切片染苏木精后，分色这一步是关键，应在显微镜下控制进行，一般以细胞核染色清楚（晰）而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅，应重新染色后再行分色。
3、切片经酒精脱水后，入二甲苯时可出现白色不透明状态，此为脱水不彻底，应将切片退回无水酒精，更换酒精、二甲苯，以求彻底脱水与透明。
4、在染色过程中不要让切片干燥，以免切片收缩、变形，影响神经元形态。
5、切片从二甲苯取出或进入二甲苯前，切片周边均应擦干净或吸干多余水分。
6、最后封固时，要用中性树脂，防止日后褪色，盖片要选大于组织块的面积，如漏出一部分不久将会褪色，所用树脂浓度要适当，树脂封固时不能有气泡。
扩展资料
一、细胞核染色原理：
苏木精为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外。
使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
二、细胞浆染色原理：
细胞浆内主要成分是蛋白质，为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系，当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时，胞浆对外不显电性，此时酸或碱性染料不易染色。
当pH调到6.7-6.8时，大于蛋白质的等电点pH值，表现酸性电离，而带负电荷的阴离子，可被带正电荷的染料染色，现时胞核也被染色，核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下，在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷（阳离子），就可被带负电荷（阴离子）的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷（阳离子）结合而使细胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织，嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
参考资料来源：百度百科-he染色
用一种染色剂对涂片进行染色,简便易行,适于进行微生物的形态观察.
单染色一般要经过 五个步骤：涂片、固定、染色、水洗、干燥
一、单染色法的基本步骤：
1．涂片取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作，分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。
2．干燥于室温中自然干燥。
3．固定涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使细胞质凝固，以固定细菌的形态，并使其不易脱落。但不能在火焰上烤，否则细菌形态将毁坏。
4．染色放标本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色时间长短随不同染色液而定。吕氏碱性美兰染色液约染2-3分钟，石炭酸复红染色液约染1-2分钟。
5．水洗染色时间到后，用自来水冲洗，直至冲下之水无色时为止。注意冲洗水流不宜过急，过大，水由玻片上端流下，避免直接冲在涂片处。冲洗后，将标本晾干或用吹风机吹干，待完全干燥后才可置油镜下观察。
6．镜检按实验程序进行显微镜观察。
二、注意事项：
(1)载玻片要清洁无油污，否则菌液不易涂开。涂片时取培养物宜少，培养物涂层宜薄，涂层过厚则不易观察细菌形态。
(2)干燥和固定时，玻片不能直接在离火焰很近的位置上烘烤，否则会破坏细菌形态并使之变形，影响观察结果。
(3)观察时如需用到油镜，油镜检查前玻片应完全干燥，观察后要将油镜用擦镜纸等彻底擦拭干净。
单染色法原理：
简单染色法即只用一种染料对涂片进行染色，该法简便易行，适用于菌体的一般形态观察。通常情况下由于细菌菌体多带负电荷，易和带正电荷的碱性染料结合而被染色，因此常用碱性染料进行简单染色，如美蓝、碱性复红、结晶紫、孔雀绿、番红等。
所有的苯胺染料，均可用来做简单染色法的染色剂。在进行染色之前的制片过程是影响染色结果好坏的关键性步骤。
用一种染色剂对涂片进行染色，简便易行，适于进行微生物的形态观察。
单染色一般要经过 五个步骤：涂片、固定、染色、水洗、干燥
革兰氏染色基本步骤 革兰氏染色基本步骤和意义
革兰氏染色基本步骤是：（1）涂片固定。（2）草酸铵结晶紫染1分钟。（3）蒸馏水冲洗。（4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。（5）水洗，用吸水纸吸去水分。（6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。（7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。染色原理：革兰...
什么是革兰氏染色法?主要步骤是?关键步骤?
二、主要步骤及关键步骤 （1）制片。取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色；涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性；火焰固定不宜过热（以玻片不烫手为宜）。（2）初染。滴加结晶紫（以刚好将菌膜覆盖为宜）染色1-2min，水洗。（3）媒染。用碘液冲去残水，...
革兰染色的关键步骤是什么
革兰染色法关键步骤包括：1. 涂片：将待测标本做成涂片，以便于染色。2. 固定：使用乙醇等固定剂，杀死标本中的活菌，并使细胞固定。这一步骤有助于后续的染色反应。3. 染色：使用结晶紫进行初染，使细胞染色；然后用碘酒精进行脱色处理，使细胞脱色；最后再复染，使细胞再次染色，以便于观察。4. 镜...
观察细菌形态时为什么要用染色法
简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检 涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim 2．革兰氏染色法：革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。它是细菌学中很重要的鉴 别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（...
单染色法的基本步骤有哪些?有何注意事项
一、单染色法的基本步骤：1．涂片取两块干净的载玻片，各滴一小滴生理盐水于载玻片中央，用无菌操作，分别挑取金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌于二载玻片的水滴中，调匀并涂成薄膜。注意滴生理盐水时不宜过多，涂片必须均匀。2．干燥于室温中自然干燥。3．固定涂片面向上，于火焰上通过2—3次，使细胞质...
衣服染色步骤是什么?
衣服染色的大致步骤如下：1. 准备工作：选择需要染色的布料和染料，根据布料的种类和染色的需求，选择合适的染料和染色方法。同时，根据染料的要求，准备好用于溶解染料的水和其他辅助剂。2. 浸泡：将布料浸泡在水中，确保布料完全湿透。根据染料的要求，可能需要在水中添加一些盐或碱，以帮助染料更好地...
简述革兰氏染色的操作步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：1）涂片固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）蒸馏水冲洗。4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。5）水洗，用吸水纸吸去水分。6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏...
革兰氏染色的关键步骤
革兰氏染色法是一种常用的微生物检测方法，可帮助鉴别细菌的类型。该方法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。具体操作方法是：首先涂片固定，然后进行草酸铵结晶紫染色，接着用碘液进行覆盖涂面染色，再用蕃红染色液进行染色，最后进行干燥和镜检。革兰氏染色法的主要作用在于区分革兰氏阳性菌和...
直接染料(简单易用的染色方法)
步骤一：准备工作 首先，我们需要将要染色的织物或纤维洗净，以去除其中的杂质和污渍。然后，将染色辅助剂（如盐）加入到一定量的水中，搅拌均匀。接下来，将准备好的染料加入到盐水中，再次搅拌均匀，使染料溶解在水中。步骤二：染色操作 将洗净的织物或纤维放入染色液中，用搅拌棒轻轻搅拌，使染料均匀地...
革兰染色法的步骤是什么
第一，革兰染色法的步骤是什么？操作步骤：涂片将培养的不同菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚)，干燥、固定。固定时通过火焰1一2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。.染色( 1 )初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。( 2 )媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。3 )脱色将...
潮轰热炎：[答案] 用一种染色剂对涂片进行染色,简便易行,适于进行微生物的形态观察. 单染色一般要经过 五个步骤:涂片、固定、染色、水洗、干燥
陕县18328623665： 普通显微镜的使用及细菌的简单染色法实验的注意事项有哪些 - ？
潮轰热炎： 普通显微镜的使用: 1.低倍镜的使用方法 (1)取镜和放置:显微镜平时存放在柜或箱中,用时从柜中取出,右手紧握镜臂,左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上,镜座后端距桌边1-2寸为宜,便于坐着操作. (2)对光:用拇指...
陕县18328623665： 什么叫单染色?什么叫复染色? - ？
潮轰热炎： 单染色用一种染色剂对涂片进行染色,简便易行,适于进行微生物的形态观察.在一般情况下,细菌菌体多带负电荷,易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色.因此,常用碱性染料进行单染色,如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等.若使用酸性染料,多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等.使用酸性染料时,必须降低染液的PH值,使其呈现强酸性(低于细菌菌体等电点),让菌体带正电荷,才易于被酸性染料染色.用两种或两种以上的染料染色的方法,称为复染色法或鉴别染色法.常用的有革兰染色法和抗酸染色法.
陕县18328623665： 细菌的单染色法实验中涂片为什么要固定 - ？
潮轰热炎： 主要两个作用:杀死细菌;使菌体与玻片粘附牢固(染色水洗时不易冲掉).
陕县18328623665： 细菌的简单染色方法谁能介绍下? - ？
潮轰热炎： 原发布者:wxdjnsdlove常用的细菌染色方法革兰染色抗酸染色细菌基本形态结构观察细菌染色意义由于细菌个体微小,基本上无色透明,故将其用适当染料染色观察,方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等,在细菌鉴别上有重要意义....
陕县18328623665： 用美兰单染色过程中应注意哪些问题 - ？
潮轰热炎： 你好,我是肿瘤科医生.当我们用美兰染色时不是从乳头注入的,我们会轻轻挤压乳头,看哪里有溢液(也就是说到底是哪个乳管出的水),出水的乳管就是病变的乳管,美兰就是从这个病变的乳管注射进去的,不知道我解释的您明白了吗?
陕县18328623665： 什么是HE染色?什么是TTC染色? - ？
潮轰热炎： HE染色是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法. TTC染色是TTC和活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应,生成红色的甲月赞,用来表示细胞的活力.配制多为2%,染色要避光,37度条件下,它是评价脑缺血损伤...
陕县18328623665： 细菌的简单染色方法怎样操作?？
潮轰热炎： (1)观察微生物时为什么必须采用染色方法细菌、真菌、和其他微生物的细胞质是透明的,不借助染色方法很难观察到这些微生物.(2)简单染色的生化原理细菌细胞通常带负电荷,简单染色时采用已知的、带正电荷的碱性染料与菌体细胞黏附使菌体着色.经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明对比.生物帮上面有这方面的详细介绍, http://www.bio1000.com/zt/product/355161.html 电镜,电子显微镜,电子显微镜原理,扫描电镜,透射电镜.
陕县18328623665： 细菌学有哪些检验方法? ？
潮轰热炎： 细菌学的检验方法有: 1.涂片镜检 将病料涂于清洁无油污的载玻片上,干燥后在酒精灯火焰上固 定,选用单染色法(如美蓝染色法)、革兰氏染色法、抗酸染色法或其他...
陕县18328623665： 微生物实验细菌单染色法为什么不能一步完成干燥和固定操作?并且为什? ？
潮轰热炎： 在细菌染色过程中,固定的操作是快速将载玻片通过火焰2-3次,其目的是让细菌细胞膜贴玻片部分局部蛋白质变性,从而固定于载玻片上而不易被染液或水冲掉.若玻片上的菌膜未能干燥,则2-3次火焰的固定作用就会很差,细菌极易被染液或水冲掉.所以固定操作一定是在玻片干燥之后再进行的步骤.之所以不能利用火焰烘烤进行固定操作,是因为如果菌膜受热时间过长,轻则细胞壁变性,使染色结果出现严重偏差;重则细菌死亡,菌体形态发生重大变化,最终导致染色失败与结果误判.
