trizol法提取rna 如何去除dna
在trizol里加入三氯甲烷震荡离心后，取上头的水层，只要水层取得干净，没有沾染下头的东西，一般就不会有DNA污染，提取出来蛮干净的。
植物RNA本来就比价难提取,TRIzol提取时裂解要充分 剧烈震荡,分层静置,离心之后自然就分为两层,取RNA层的时候吸取一定要小心,吸得时候一定要缓慢,不要怕浪费,有的人吸得很多,很怕浪费,结果就吸到了中间层和下层,个人觉得吸取80%最多了,再多就很容易吸到杂质了,操作要小心,动作快速准却,这样才能提到高质量的RNA
trizol法提取rna 如何去除dna1,裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少； 2，使用的组织材料中含有大量的有机溶剂（如：乙醇/异丙醇等）、高纯度的Buffer、碱性溶剂等； 3，如果提取的RNA中含有DNA时，也可以使用DNase I进行DNA消化。
这个如果你做反转录的话，只能是用PCR检测了。电泳基本检测不出来。象现在的试剂盒或者TRIZOL提的RNA，除质量太差，一般含基因组很少。 如果RT－PCR发现结果不对，可以用那种不含RNA酶的DNA酶处理一下。 如果引物能避开的话，有点DNA也没关系。
RNA的提取方法步骤及原理.
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理:在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水...
Trizol法提取流感病毒 RNA
Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。1、取鸡胚尿囊液，加入5-10倍体积Trizol液，混匀；2、室温放置5分钟，然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒；3、取上层水相于一新的离心管，按每ml Trizol液加0...
TRIzol法提取RNA如何避免DNA污染
植物RNA本来就比价难提取,TRIzol提取时裂解要充分 剧烈震荡,分层静置,离心之后自然就分为两层,取RNA层的时候吸取一定要小心,吸得时候一定要缓慢,不要怕浪费,有的人吸得很多,很怕浪费,结果就吸到了中间层和下层,个人觉得吸取80%最多了,再多就很容易吸到杂质了,操作要小心,动作快速准却,这样才能提到...
RT-PCR实验案例解析—钟鼎生物
使用TRIzol提取样品总RNA，反转录获得cDNA，供下游实验使用。1.试剂与耗材 试剂与耗材 Prime Script II 1st Strand cDNA Synthesis Kit，宝生物工程（大连）有限公司，6210B；总RNA提取试剂TRIzol，南京钟鼎生物技术有限公司，RK01-100；DL2000 DNA Plus Marker（100、250、500、750、1000、1500、2000 bp...
提取昆虫RNA有哪些方法
组织取材后,在酒精里泡一下立即放入冻存管,快速放入液氮.实验时,在液氮中将组织研磨成粉末,趁液氮未挥发将粉末转移到EP管.加入1ml Trizol,吸打均匀,静置5min.加入200微升的氯仿,剧烈震荡30s,室温放置10min,离心15000r\/min 4摄氏度 15s.此时,液体分3层,惜取上清液如EB管,加入等体积异丙醇,充分混...
RNA提取方法?
1．提取 称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g，倒入 100ml三角瓶中，加 NaCl 2.5g，水25ml，搅拌均匀，置于沸水浴中提取lh。2．分离 将上述提取液用自来水冷却后，装入大离心管内，以4000r／min离心10min，使提取液与菌体残渣等分离。3．沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内，并置入放有冰块的...
SYBR Green ISybr Green I染料法操作过程
实验方法：首先，冷冻后的囊腔组织需储存在-70℃冰箱中。Real-time PCR法用于测定EMMPRIN的mRNA含量。1.1 组织总RNA提取步骤如下：从液氮中取出组织，剪取100mg，加入1ml Trizol，研磨后转移至无酶离心管中，静置5min。加入0.2ml氯仿，混合均匀，静置后4℃离心12000r\/min，10min，取上清。注意不要...
真核生物(如小鼠)的质粒如何提取,请写下详细步骤,谢谢
1.3.1 小鼠脾脏总RNA的提取：将小鼠以颈椎脱臼法处死，取出脾脏，加入液氮研磨后，用Trizol试剂提取总RNA，方法按产品说明进行。1.3.2 CD40、IgG2a Fc、GFP基因的制备：以小鼠脾脏总RNA为模板，oligo-dT为引物，RT-PCR合成cDNA，再以此cDNA为模板，用CD40和mIgG Fc特异引物进行PCR扩增，另以pEGFP...
如何防止提取过程中RNA的降解
&P3[7m*^$U$_"?:F"xu*N(?(I氯化锂法提取总RNA:"u;}'I!r'^'^&l本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA酶,用氯化锂选择沉淀RNA,其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA,具有快速简洁的长处,但也存在少量DNA的污染及RNA得率不高,小RNA片断丢失的缺陷。#~*S:}9`*r4Z3P试验试剂:"d$r6Q+_.I8Q1...
m6A的前世今生
LC-MS\/MS法第一步 使用TRIzol提取完总 RNA后,可以用oligodT磁珠或者rRNA去除试剂盒获得包括mRNA、lncRNA等在内的RNA。 第二步 使用核酸酶P1(Nuclease P1)将RNA消化成单个碱基。 第三步 加入碱性磷酸酶和碳酸氢铵后孵育数小时,将样本注射入液相色谱仪,计算各个碱基的含量。 第四步 进入质谱串联分析,单个核糖核苷...
郸莉昊畅： trizol法提取rna如何去除dna1,裂解组织或者细胞使用的TRIzol量偏少;2,使用的组织材料中含有大量的有机溶剂(如:乙醇/异丙醇等)、高纯度的Buffer、碱性溶剂等;3,如果提取的RNA中含有DNA时,也可以使用DNaseI进行DNA消化.这个如果你做反转录的话,只能是用PCR检测了.电泳基本检测不出来.象现在的试剂盒或者TRIZOL提的RNA,除质量太差,一般含基因组很少.如果RT-PCR发现结果不对,可以用那种不含RNA酶的DNA酶处理一下.如果引物能避开的话,有点DNA也没关系.
张北县17553358364： trizol法提取RNA时如何去除基因组DNA 在哪一步加NDA消化酶 - ？
郸莉昊畅： 在trizol里加入三氯甲烷震荡离心后,取上头的水层,只要水层取得干净,没有沾染下头的东西,一般就不会有DNA污染,提取出来蛮干净的.
张北县17553358364： trizol法提取RNA时如何去除基因组DNA 在哪一步加NDA消化酶,谢谢! - ？
郸莉昊畅： trizol法是RNA, DNA提取的,在分层的时候,看你去哪一层了.分层后, RNA是在水相,而DNA是在中间的酚-氯仿层.“一般在加入溶解细胞剂,充分 溶解...
张北县17553358364： 请问你是如何解决trizol法提RNA中的DNA污染?谢谢. - ？
郸莉昊畅： RNA用70%或75%乙醇沉淀后,离心去上清,加入30~50ulDEPC水溶解,如何加入DNA酶1(10U/ul)混匀,37摄氏度温育30分钟就可以去除DNA了.
张北县17553358364： trizol法提取RNA时在哪一步加入DNase来去除gDNA? - ？
郸莉昊畅：[答案] 如果操作得当,一般RNA产物很少有DNA污染的.如果OD比值显示有污染,可以尝试在重悬RNA团块时用含DNase I的buffer切一会儿试试,最后重新用酚氯仿异戊醇抽提一次,最后用无水乙醇沉淀再离心重悬,但是不建议重新抽提,最好从优化正常...
张北县17553358364： 请问你是如何解决trizol法提RNA中的DNA污染? - ？
郸莉昊畅：[答案] 要除RNA中的DNA最常用的是DNA酶1,很多公司有买的.但是我们用过发现效果并不好,因为你消化DNA的时候对RNA还是有影响的,所以我不建议这么做.你最好在如何更好的提取RNA上做文章,提高RNA的纯度.另外做RT-PCR时有一点DNA...
张北县17553358364： 用trizol提取rna时,为什么dna不会溶解在水相 - ？
郸莉昊畅： 提取RNA时如何去除DNA的污染的方法: 注意实验室的标准化问题,注意污染的存在,同时严格按照说明书上的操作应该没有 问题.发现DNA污染,用DNAse I 消化1小时,37度 离心取上清的时候,一定要小心不要取到中间的膜和下面的液体...
张北县17553358364： trizol 法提RNA怎样去多糖? - ？
郸莉昊畅： 我本科毕业论文做的是SSH,需要提大量RNA,也碰到了多糖问题.其实trizol法提取总RNA很好,简单又节约时间,但是对于植物材料貌似不是很理想.当初我们改进了方法,用CTAB提取RNA的,然后增加了一步去多糖(提完RNA后)用0.25倍体积的无水乙醇和低浓度的盐将多糖沉淀,同时使RNA留在溶液中.然后再用异丙醇将RNA沉淀出来.其实当初我们参考了很多文献,貌似LiCl过夜沉淀RNA去除多糖效果比较理想的,只是耗时,你可以试一下.想当初,我们也是反复实验的.以上仅供你参考...如果想知道CTAB具体的方法,可以站内消息联系.另外,TAKARA公司有一种专门提取富含多糖组织中RNA的试剂,你也可以试一下.
张北县17553358364： 如何在提取RNA过程中快速有效的处理样品 - ？
郸莉昊畅： 如何去除RNA提取过程中的蛋白质污染提取RNA时如何去除DNA的污染的方法:注意实验室的标准化问题,注意污染的存在,同时严格按照说明书上的操作应该没有问题.发现DNA污染,用DNAse I 消化1小时,37度离心取上清的时候,一定要...
张北县17553358364： 蛋白污染的dna,酶切应该怎么处理 - ？
郸莉昊畅： RNA提取步骤:1. 匀浆处理:① 组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理.样品体积不应超过TRIzol体积10%.② 单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培...
