真菌的DNA提取方法有哪些，要详细操作步骤
菌丝基因组 DNA的提取
取少量菌丝粉，采用 CTAB法提取 DNA，加适量灭菌超纯水 (含 20 pg·ml。RNase)溶解 DNA，37~C处理 l h后， 一20℃保存备用。
菌丝基因组 DNA的提取
取少量菌丝粉，采用 CTAB法提取 DNA，加适量灭菌超纯水 (含 20 pg·ml。RNase)溶解 DNA，37~C处理 l h后， 一20℃保存备用。
1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入4mL提取液，快速振荡混匀
3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1)，涡旋3～5min（此处是粗提没有加酚，可以节约成本的哟！）
4.1000rpm，4℃，5min
5.上清用体积的氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
6.取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min
7.用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 ulTE中
8.加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr
9.用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
10.取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
11.沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ulTE中，-20 ℃保存备用
DNA提取液：0.2M Tris-HCl（pH 7.5），0.5M NaCl，0.01M EDTA，1％SDS，
3M NaAc
（二）
1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3 mL 65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次
3．加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min
4．等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
5．取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 min
6．用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 L TE中
7．加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr
8．用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
9．取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
10．沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存备用。
1.真菌菌丝0.5-1 g, 在液氮中迅速研磨成粉
2.加入3 mL 65℃预热的DNA提取缓冲液，快速振荡混匀65℃水浴30 min, 期间混匀2-3次
3．加入1 mL 5M KAc，冰浴20 min
4．等体积的氯仿:异戊醇(24:1)抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
5．取上清，加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇, 混匀, 静置约30 min
6．用毛细玻棒挑出絮状沉淀, 用75%乙醇反复漂洗数次, 再用无水乙醇漂洗1次, 吹干，重悬于500 L TE中
7．加入1 ul RNaseA （10 mg/mL），37℃处理1 hr
8．用酚（pH8.0）:氯仿:异戊醇(25:24:1)和氯仿:异戊醇(24:1)各抽提1次（10,000 rpm，4℃离心5 min）
9．取上清，1/10V 3M NaAc,2.5V体积的无水乙醇, -70℃沉淀30 min以上
10．沉淀用75%乙醇漂洗，风干, 溶于200 ul TE中，-20 ℃保存备用。
DNA提取缓冲液：100 mM Tris-HCl（pH8.0）,20 mM EDTA（pH8.0）,1.5 M NaCl, 2% CTAB(W/V),4% PVP40(W/V)和2% 巯基乙醇(V/V)，PVP和巯基乙醇使用前加入
5M KAc
真菌的DNA提取方法：
一、SDS法
基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。
1、 试剂
(1)提取缓冲液
Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0） EDTA 50mmol/L （pH8.0） NaCl 500 mmol/L 灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L
(2)裂解液20%SDS
(3)高盐溶液5mol/L KAc
(4) RNaseA 10mg/ml
(5) 异丙醇
(6)灭菌ddH2O或TE
2、 仪器
离心机， 恒温水浴, 台式高速离心机，电泳装置
3、实验程序
（1）、离心菌体，再用灭菌ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中,轻轻混匀。
（2）、 向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂 ，65℃保温10min，并不时摇动。
（3）、 加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。
（4）、 4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30 min 。
（5）、12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。
（6）、 加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。
（7）、 C：I抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀。
（8）、 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2 O或TE溶解DNA。
（9）、 电泳检测完整性。
二、蜗牛酶破壁法
（一）、试剂：
1、500 μL PBS（0.01 mo l/L N a2 HPO4 和N aH2 PO4, pH7.0, 0.15 mol /L NaCl）
2、蜗牛酶溶液中（0.1 mo l/L 磷酸缓冲液, pH7.4, 0.25mo l/L MgC12用0.22 μm 细菌滤膜过滤除菌）
3、裂解液（2% Triton X-100, 1 % SDS, 0.1 mol/L NaCl，10 mmol/L T 、Tris-HCl，pH8.0, 1mmol /L EDTA）
4、5mol/L KAc( pH 8.9)
（二）、实验程序
1、离心菌体，沉淀中加入500 μL PBS（0.01 mo l/L N a2 HPO4 和N aH2 PO4, pH7.0, 0.15 mol /L NaCl）重悬, 12 000 r /m in 离心2 m in; 弃上清, 重复悬浮一次
2、沉淀溶于100 μL 含20 mg /mL 的蜗牛酶溶液中（0.1 mo l/L 磷酸缓冲液, pH7.4, 0.25mo l/L MgC12用0.22 μm 细菌滤膜过滤除菌）
3、45℃ 作用2 h
4、加100 μL 裂解液（2% Triton X-100, 1 % SDS, 0.1 mol/L NaCl，10 mmol/L T 、Tris-HCl， pH8.0, 1mmol /L EDTA）
5、- 20℃ 冷冻, 然后室温震荡溶解, 反复3次
6、向悬浮液中加入150 μL 5mol/L KAc( pH 8.9)轻轻混匀
7、10 000 r/min离心5 min; 将上清转移到一新的1.5 mL离心管中
8、乙醇沉淀
真菌DNA的提取方法?详细
菌丝基因组 DNA的提取 取少量菌丝粉，采用 CTAB法提取 DNA，加适量灭菌超纯水 (含 20 pg·ml。RNase)溶解 DNA，37~C处理 l h后， 一20℃保存备用。
质粒dna提取试剂盒可以代替细菌dna提取试剂盒吗?
替代使用的可能性 尽管质粒DNA提取试剂盒和细菌DNA提取试剂盒的设计目的不同，但在某些情况下，质粒DNA提取试剂盒可能被用来尝试提取细菌基因组DNA。然而，这种做法可能不适合所有类型的细菌，特别是那些含有复杂细胞壁结构的革兰氏阳性菌，因为它们的基因组DNA可能难以通过质粒DNA提取试剂盒的方法有效提取。结...
dna的提取方法
dna的提取方法：浓盐法、SDS法、CTAB法等。一、 浓盐法。1、根据DNA和RNA在电解溶液中的溶解度不同，可将二者分离。2、常用1 mol\/L NaCl抽提，得到的DNP黏液中加入含有少量辛醇的氯仿一起摇荡，使之乳化，再离心，使蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA则位于上层水相中。3、回收水相，用2倍...
细菌基因组的提取步骤
细菌基因组的提取可以使用专门的试剂盒，原理很简单，首先通过离心的方法获得细菌沉淀，然后使用缓冲液重悬细菌，再加入裂解液将菌体裂解，然后加入RNA酶和蛋白酶，来降解里面的RNA以及蛋白质，随后再使用柱回收的方法，将基因组DNA纯化。
微生物DNA提取的原理和方法是什么?
使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS 能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它除干净。以免影响下一步RNase的作用。破细胞后RNA经RNase消化除去，蛋白质经苯酚、氯仿:异戊醇抽提除去经洒精沉淀回收DNA。枯草杆菌染色体制备与上类似，但略加修改的方法要适合教学要求。枯草杆菌是格兰氏阳性菌...
煮沸法提取革兰氏阴性菌基因组dna的原理
用煮沸法提速革兰氏阴性菌DNA的原理主要是煮沸法对革兰氏阴性菌破坏彻底，能够更高的释放基因组DNA，因为革兰氏阴性菌细胞壁较薄，所以选用煮沸法提取。
有谁知道:霉菌基因组DNA的提取方法
加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚\/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA结合的组蛋白。将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。2.细胞的破碎 细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方法有三种;...
细菌的分子生物学鉴定要怎么做?
是的，要做PCR。首先你要提出细菌的DNA。方法如下：1、液体培养及保种：从斜面上挑取菌苔于液体培养基中放摇床上震荡（转速160r\/min）培养16小时。吸取菌液于1.5ml的经过灭菌的EP管中，再加甘油（30-40%）进行保种。（-80摄氏度保藏2年）2、提取DNA（CTAB法）：（1）取1.5ml菌液于1. 5ml...
真菌DNA的提取方法?详细
真菌DNA提取方法你可以参考植物的DNA提取的CTAB法，用那个方法同样可以提取真菌的DNA，原始材料就用滤纸吸干培养基的真菌菌丝体就可以。然后，因为真菌菌丝体里含有比一般植物要多的多糖成份，所以你需要在CTAB抽提液里面加入2%左右的PVP或者PVPP，来螯合多糖。如果对CTAB法不了解，你可以追问我。
如何从大肠杆菌中提取染色体DNA
肠杆菌中染色体DNA的抽提 (1)大肠杆菌一级瓶培养过夜,以10%的接种量接二级瓶培养4～5小时后,培养物以50ml\/管离心收获(8 000 rpm,5min,4℃).(2)菌体沉淀中加入10ml BufferA,旋涡振荡混匀,37℃保温30分钟.(3)取出后加入10% SDS至最终浓度为1%,轻轻混匀,37℃保温30分钟澄清即可.(4)取出后...
林索苯酰： 菌丝基因组 DNA的提取 取少量菌丝粉,采用 CTAB法提取 DNA,加适量灭菌超纯水 (含 20 pg·ml.RNase)溶解 DNA,37~C处理 l h后, 一20℃保存备用.
湖南省15116246357： 真菌的DNA提取方法有哪些?要详细操作步骤 - ？
林索苯酰： (一) 1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉 2.加入4mL提取液,快速振荡混匀 3.加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3~5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本的哟!) 4.1000rpm,4℃,5min 5.上清用体积的氯仿:异戊醇...
湖南省15116246357： 帮忙找一些从棉籽油中提取棉酚的比较可靠而且新颖的方法.要步骤详细的.方法越多越好.谢谢. - ？
林索苯酰： 真菌的dna提取方法: 一、sds法 基本原理是研磨的组织细胞用热的sds裂解后,加入高浓度的kac,0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质,最后用乙醇或异丙醇沉淀. 1、 试剂 (1)提取缓冲液 tris-hcl 100mmol/l(ph8.0) edta 50mmol/l (ph8.0) nacl 500...
湖南省15116246357： 内生真菌DNA的提取方法 - ？
林索苯酰： 直接提取植物总DNA,用特异性引物扩增就行了;目前还没有新的技术手段,能从植物样品中只提取内生真菌的DNA.
湖南省15116246357： 细菌、真菌、放线菌的DNA提取方法分别有哪些 - ？
林索苯酰： 放线菌(Actinomycets) 是介于细菌与真菌之间的一类微生物,大多为腐生菌,在自然界中分布非常广泛,主要存在于土壤、空气和水中.
湖南省15116246357： 有谁知道:霉菌基因组DNA的提取方法 - ？
林索苯酰： 高中: 原理: 1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA. 2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA. 3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色. 方法步骤: 1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重. 5 min 2.溶解DNA: 3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水...
湖南省15116246357： 提取真菌DNA打算提取镰刀菌的DNA,请问用 - ？
林索苯酰： Aidlab的DN41试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统,适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA.可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作.提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机...
湖南省15116246357： CTAB提取植物病原真菌的DNA - ？
林索苯酰： 下游做PCR的话,应该保证模板的纯度,CTAB法提取多半会得到浓度不错但纯度不够的DNA,建议将得到的DNA进行纯化,或者直接使用试剂盒提取,现在的国产试剂盒都还不错的,节约时间又不贵
湖南省15116246357： 微生物基因组提取的方法有哪几种 - ？
林索苯酰： 常见的RNA提取方法有苯酚法、阴离子去污剂法、LiCl一尿素法、改良的Gomez法、异硫氢酸胍法、CTAB法、热硼酸法及改良热硼酸法、TRIZOL试剂快速提取法. RNA提取时,就变性剂的选择来说,CTAB(CTAB法)比异硫氰酸胍(RIZOL试剂法)和 SDS(改良热硼酸法)更有效;就CTAB法来说,由于以CTAB为变性剂,同时加入PVP和β一巯基乙醇共同作用变性蛋白、抑制RNase的活性,使用无水乙醇或异丙醇沉淀杂蛋白和总核酸等,然后再选择性地分离出RNA.
