嘌呤筛选细胞的时候可以加双抗吗

稳定株筛选时为什么加嘌呤霉素细胞就漂~

可以不加，有时候加了会有拮抗作用。
1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜；
（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）； （3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞； （4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
（1）day 0：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；
（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养基；
（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）
（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双抗。）到细胞内，然后孵育过夜；
（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。 （6）约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；
（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。
注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度

可以不加，有时候加了会有拮抗作用。1）24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜；（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞；（4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基；（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。嘌呤霉素筛选稳定转染细胞（1）day0：24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板，孵育过夜；（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养基；（3）day1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双抗。）到细胞内，然后孵育过夜；（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。（6）约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度

可以不加，有时候加了会有拮抗作用。
1）24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜；
（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）； （3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞； （4）约2-3天更换新鲜的筛选培养基；
（5）每日监测细胞观察存活细胞比例。嘌呤霉素的最佳作用时间一般在1-4天之间。
（6）最小的抗生素使用浓度就是指从抗生素筛选开始1-4天内杀死所用细胞的最低筛选浓度。
嘌呤霉素筛选稳定转染细胞
（1）day 0：24孔板内以5~8 x 104 cells/孔的密度铺板，孵育过夜；
（2）制备筛选培养基：含有最佳筛选浓度嘌呤霉素（由杀灭曲线确定）的新鲜培养基；
（3）day 1：筛选第一天，去除旧的培养基，加入一定量MOI的病毒颗粒；（加入无血清培养基的总量必须充分覆盖住细胞。）
（4）病毒转导后约6-8h，再添加1ml完全培养基（血清和双抗，如果已经使用双抗。）到细胞内，然后孵育过夜；
（5）病毒转导后48h，使用嘌呤霉素筛选培养基替换旧的完全培养基。孵育。 （6）约每2-3天替换新鲜配制的筛选培养基；
（7）每天检测细胞并观察活细胞生长比例，以及turboGFP表达的水平及所占比例。在某一个时间点几乎所用存活细胞都可以表达TurboGFP。嘌呤霉素最佳的作用时间在3-10天之间。
注：病毒的MOI越高，每个细胞含有的shRNA拷贝和嘌呤霉素耐性基因越多。在做嘌呤霉素筛选时，需记住越高MOI,含越多pac拷贝的细胞能耐受更高的嘌呤霉素浓度。调整嘌呤霉素的浓度去筛选预定量的转导细胞，但是嘌呤霉素的量不能低于杀死曲线建立的最低浓度

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南皮县15287519929： 细胞平板克隆形成实验培养基要加双抗吗 - ？
籍刮九味： 可以不加,有时候加了会有拮抗作用.1)24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板,铺足够量的孔以进行后续的梯度实验.细胞孵育过夜;(2)准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0-15μg/mL,至少5个梯度);(3)细胞孵育...

南皮县15287519929： 单克隆抗体中两次筛选分别是什么方法 - ？
籍刮九味： 第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,用连续注射抗原,下面具体介绍一下: 1、在实际免疫过程中,由于采用连续注射抗原的方法,且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞,因此,从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴...

南皮县15287519929： 如何获得稳定的细胞株 - ？
籍刮九味： 应该是通过病毒载体质粒上的标记基因比如说荧光的eGFP 或者带嘌呤霉素抗性基因的用嘌呤霉素筛选吧!

南皮县15287519929： 培养重组细胞的培养液通常含有什么 - ？
籍刮九味： 一般来讲,只有需要筛选的时候,才会在培养基里面额外添加药物.否则就用一般培养基就行了.至于通常都用什么药物筛选,得看你重组进去的基因是什么.常用的有嘌呤霉素等等.

南皮县15287519929： 单克隆抗体的两次筛选剂 以及原因 - ？
籍刮九味： A 第一次筛选的原理与方法:第一次筛选是杂交瘤细胞的选择性培养.采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷酸(T),其依据是细胞中的DNA合成有两条途径(D途径和S途...

南皮县15287519929： 杂交瘤细胞怎么筛选分离方法 - ？
籍刮九味： 利用选择性培养基hat筛选hat培养基,用次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸苷(T)配置,其中氨基蝶呤(A)能阻断dna合成的主要途径,而用于杂交的瘤细胞都是次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞,而脾细胞中有这种酶,所以骨髓瘤细胞和瘤-瘤细胞会无法合成dna死去,而脾细胞和脾-脾都知道会无法无限长时间存活而死去,希望对你有帮助

南皮县15287519929： 单克隆抗体制备过程中两次筛选有什么区别 - ？
籍刮九味： 这好像是高中生物吧 先说骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合,共有3种情况,B淋巴和B淋巴融合,B淋巴和骨髓瘤细胞融合,骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞融合 第一次筛选是为了筛选出能无限增殖的细胞,这只有两种情况: 1、经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 2、骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞 第二次是为了筛选出能产生单克隆抗体的细胞 那么只可能是,经过免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞. 所以有两次筛选

南皮县15287519929： DNA复制D途径和S途径 - ？
籍刮九味： 你说的是这道题么?已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨基嘌呤阻断.人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径,但一般不分裂增殖.鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖.将这两种细胞在含氨基嘌呤的试管中...

南皮县15287519929： 为什么氨基嘌呤可以筛选杂交瘤细胞 - ？
籍刮九味： 第一次筛选出已杂交的细胞 第二次筛选出骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合的细胞 所以要筛选两次.

南皮县15287519929： 怎么筛选稳定的高表达的杂交瘤细胞? - ？
籍刮九味： 单克隆抗体技术中人工诱导小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合后,细胞将以多种形式出现,如脾细胞-瘤细胞、脾细胞-脾细胞、瘤细胞-瘤细胞、细胞多聚体、未融合的脾细胞和瘤细胞等,其中只有脾细胞-瘤细胞的融合体是有用的. 正常的脾细胞在培...