蛋白药物生物学活性检测方法有哪些
根据每细胞定重量设计用于单细胞、细胞及丝状体微物测定定体积品通离或滤菌体离经洗涤再离直接称重求湿重丝状体微物滤用滤纸吸菌丝间自由水再称重求湿重论细菌品丝状菌品放已知重量平皿或烧杯内于一05℃烘干至恒重取放入干燥器内冷却再称量求微物干重 要测定固体培养基放线菌或丝状真菌先加热至50℃使琼脂熔化滤菌丝体再用50℃理盐水洗涤菌丝按述求菌丝体湿重或干重 除干重、湿重反映细胞物质重量外通测定细胞蛋白质或DNA含量反映细胞物质量蛋白质细胞主要含量比较稳定其氮蛋白质重要组元素定体积品离细胞洗涤按凯氏定氮测总氮量蛋白质含氮量一陆%细菌蛋白质含量占细菌固形物50%吧0%般陆5%代表些细菌则占一三%一四%种变化由菌龄培养条件同所产总含氮量与蛋白质总量间关系按列公式计算: 蛋白质总量=含氮量×陆.二5 核酸DNA微物重要遗传物质每细菌DNA含量相恒定平均吧.四×`一0^(-5)`NG定体积细菌悬液所含细菌提取DNA求DNA含量再计算定体积细菌悬液所含细菌总
首先看看你的是什么生物制品,生物制品多了
我还是举例说吧
假如生物制品是 食品 检测方法 测菌落(细菌是否合格)
假如生物制品是 氨基酸 检测方法 薄板层析
假如生物制品是 多肽 检测方法 质谱
……………………蛋白质………………HPLC
……………………注射药品…………测菌落+密封测试
……………………抗体………………纯度HPLC+活性测试。
所以说你要做的生物制品是什么 才能知道 需要测什么。生物制品是个很大的范围。
(一)原理
活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。
(二)试剂准备
1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2O中,抽滤除菌。
2、L15基础培养基:1000mlL15培养基,加2g碳酸氢钠,10ml 100X青链霉素,5mlHEPES。
3、MTT液:5mg/ml溶于L15基础培养基。
4、SDS处理液:20gSDS,50μl二甲基甲酰胺,加双蒸水50ml溶解。
5、L-多聚赖氨酸:50μg溶于1ml双蒸水中。
6、L15基础培养基溶解的不同浓度的蛋白液。
(三)操作步骤(以背根神经节细胞培养为例)
1、无菌条件下取新生一天的SD大鼠背根神经节(DRG)。
2、镜下去除神经根和外膜,放入1ml 0.1%胶原酶中37℃消化30min,每5min摇匀一次。
3、洗去胶原酶,吹打分散后,接种于预先涂有L-多聚赖氨酸的96孔培养板中,每孔含100μl无血清L15培养基,细胞约800个。
4、实验组分别加入纯化的表达蛋白(分别以不同的蛋白浓度),阴性对照加入等体积表达蛋白的溶剂。
5、37℃ 5%CO2培养48hr后,每孔加入10μl MTT,37℃ 5%CO2孵育4hr。
6、加入100μl 20%的SDS处理液,37℃孵育20hr。
7、用EL×800微孔酶标仪测定OD570值,数据分析。
蛋白药物生物学活性检测方法有哪些
一、MTT比色法检测细胞活性 (一)原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备 1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2O中,抽...
蛋白质药动学研究方法
蛋白多肽类药物的分析方法包括生物检定法和免疫学方法,以及同位素标记示踪法和色谱法。生物检定法分为在体分析和离体组织(细胞)分析。在体分析如胰岛素小鼠血糖法,直观反映生物活性,但耗时且灵敏度低。离体细胞分析如NGF刺激细胞增殖法、抑制增殖法和减少细胞损伤法,具有灵敏特异性,但易受内源物质干...
多肽和蛋白质类药物的分析方法
首先,生物检定法无法定量失去活性的小代谢物,无法示踪它们的体内动态;其次 ,样品多存在于人或动物血清中,血清中内源物质的干扰以及可能存在的内源因子的交叉反 应,影响了方法的专属性;再者,启动生物过程常需阈量细胞因子从而降低了方法的灵敏度 ;依赖株细胞长期培养易发生变异而影响检测的特异性。1.2 免疫学方法免...
生长激素比活性的意义?
比活性是检测生物药品最关键的指标,比活性是指每毫克蛋白质的生物学活性单位,基因工程产品的生物学活性与药效学基本一致,所以,比活性测定是基因工程产品质量控制的重要组成部分,是保证产品药效的重要手段,进行比活性项目的检测,可以比较不同生产厂家生产同一产品的质量情况,所以,比活性高说明产品的生产...
生长激素的比活性代表啥子意思?
生长激素比活性是指单位毫克蛋白质的生物学活性单位,这是重组蛋白质药物不同于化学药的一项重要指标。进行生长激素比活性项目的检测,既可以反映产品生产工艺的稳定情况,也可以比较不同表达体系、不同生产厂家生产同一产品的质量情况。可以选择安苏萌粉针剂\/水针,比活性高。安苏萌水剂是第二代生长激素水剂...
生长激素比活性与产品质量的关系是如何影响治疗效果的?
生长激素比活性是指生长激素这种蛋白质药物中单位毫克蛋白质的生物学活性单位,这是重组蛋白质药物不同于化学药的一项重要指标。进行生长激素比活性项目的检测,不仅可以反映产品生产工艺的稳定情况,而且可以比较不同表达体系、不同生产厂家生产同一产品的质量情况。通常情况下生长激素比活性高低说明产品的纯度...
如何正确解读生长激素比活性的检测结果?
生长激素比活性是指生长激素这种蛋白质药物中单位毫克蛋白质的生物学活性单位,这是重组蛋白质药物不同于化学药的一项重要指标。在各个生长激素的说明书中,国际统一的比活性单位叫IU\/mg. 举个例子,某生长激素的说明书标注的产品规格是4IU\/1.33mg,表述的比活性为1.33\/4=3.0比活性。宣传上的3.0...
免疫球蛋白的生物学活性
免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质,主要存在于生物体血液和其他体液(包括组织液和外分泌液)中,可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。免疫球蛋白生物学活性有以下几种:①特异性结合抗原 特异性地与相应的抗原结合,如细菌、病毒、寄生虫、某些药物或侵入机体的其他异物。②活化补体 1.IgM、...
白细胞介素- 1的生物学活性作用
白细胞介素-1:生物活性的多元影响<\/ IL-1,即白细胞介素-1,这一关键的内源性信号分子在体内扮演着多种生物学角色。首先,它以致热源的领导者的身份起作用(1<\/)。注入IL-1后,动物会在短时间内出现发热,这是由于IL-1促使下丘脑血管内皮细胞释放花生四烯酸,经环氧化酶转化为PGE2和白细胞...
生长激素比活性低于标准值会有什么影响?
生长激素的比活性是衡量生长激素产品疗效的关键指标之一,它表示每毫克蛋白质的生物学活性单位(IU\/mg)。药品说明书上有明确的iu、mg,可以根据说明书自行计算。比活性越高说明生长激素疗效更好,比活性如果低于标准值,疗效可能没保障会没那么好甚至没效果 ...
霜洋金花: 一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关.对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行.(二)试剂准备1、...
抚远县13366103062: 生物学活性及比活测定是指什么? ?
霜洋金花: 生物学活性及比活测定:一般用细胞方法或生化方法进行测定,较好的反映了复性蛋白的活性,值得注意的是,不同的测活方法测得的结果不同,而且常常不能完全反映体内活性.
抚远县13366103062: 用本实验方法获得的蛋白质是否具有生物活性 - ?
霜洋金花:[答案] 蛋白质是否具有生物学活性和你用的什么实验方法有关系,但是不能从某个方法本身就能判断出是否具有生物学活性,需要用得到的蛋白质运用一定的方法(比如Elisa)进行一些活性检测得出是否具有活性.然后再用活性检测的结果去验证你的实验...
抚远县13366103062: 表达蛋白的生物学活性的检测步骤哪里有介绍??
霜洋金花:1、无菌条件下取新生一天的SD大鼠背根神经节(DRG). 2、镜下去除神经根和外膜,放入1ml 0.1%胶原酶中37℃消化30min,每5min摇匀一次. 3、洗去胶原酶,吹打分散后,接种于预先涂有L-多聚赖氨酸的96孔培养板中,每孔含100μl无血清L15培养基,细胞约800个. 4、实验组分别加入纯化的表达蛋白(分别以不同的蛋白浓度),阴性对照加入等体积表达蛋白的溶剂. siRNA启动子试剂盒: http://product.bio1000.com/115631/ 生物帮上面有这方面的资料.
抚远县13366103062: 确定血清白蛋白纯度和生物活性鉴定方法 并且确定所用试剂仪器, - ?
霜洋金花:[答案] 标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、 标准曲线 一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所 测物质的含量.因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术. 二、 蛋白质含量测定方法 1、 凯氏定氮法...
抚远县13366103062: 细胞因子浓度的检测 - ?
霜洋金花: 细胞因子(cytokine)是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称,在免疫应答、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用.目前,细胞因子生物学活性检测和浓度测定方法主要有以下几类:1.细胞增殖法 许多细胞因子具...
抚远县13366103062: 细胞活性检测的方法有多少种 ?每种的原理是什么? - ?
霜洋金花: 在目前的细胞活性检测方法中,MTT法是较早且较为经典的方法.但是,由于MTT法形成的甲物是非水溶性的,需要加有机溶剂溶解,这不仅增加了研究人员的工作量,也给实验带来了一定的误差.在这里我们向大家介绍一种国外最新检测方法—CCK-8法,它具有方便、灵敏、快速、无放射性、重复性好的特点.现在已广泛用于细胞增殖检测、细胞毒性检测、药物筛选、药敏试验等.另外还将向大家介绍几种氧化应激和蛋白质抗体标记的新方法. 内容: 1、新型细胞活性检测方法介绍 2、国外氧化应激测定方法介绍 3、蛋白质抗体标记的新方法介绍原理恕在下不知
抚远县13366103062: 生物检测技术是什么? - ?
霜洋金花: 是利用生物体(整体组织 ,离体组织微生物和细胞等)来测定药物的生物活性的一种方法.它以药物的药理为基础,以生物统计为工具,运用特定的实验设计,在一定条件下比较供试品和相当的标准品或对照品所产生的特定反应,通过等反应剂量间比例的运算,从而测得供试品的效价.
抚远县13366103062: 简述检测蛋白质磷酸化的检测方法及其原理 - ?
霜洋金花: 方法及原理:1.激酶活性分析生物学样品中的激酶活性通常是在体外测定的,在ATP的存在下将免疫沉淀的激酶与外源底物共同孵育.之后通过一些报告系统来评估特定激酶对底物的磷酸化,包括显色、放射性或荧光检测.直接测定蛋白磷酸化...