硅胶层析的注意事项

硅胶柱层析的操作技术~

硅胶柱层析的原理
利用吸附原理，即利用硅胶对中药混合物中各种成分吸附能力的差异，而使混合物中各成分得以分离的色谱方法。
硅胶柱层析的操作方法及注意事项 ：
装柱
操作要点：装柱前柱底要垫一层脱脂棉以防吸附剂外漏。 有干法装柱和湿法装柱两种方法
（1）干法装柱：将硅胶通过漏斗装入柱内，中间不应间断，形成一细流慢慢加入管内。也可用橡皮槌轻轻敲打柱硅胶柱使硅胶装填连续均匀、紧密。柱装好后，打开下端活塞，然后倒入洗脱剂洗脱以排尽柱内空气，并保持一定液面。
（2）湿法装柱：将最初准备使用的洗脱剂装入柱内，打开下端活塞，使洗脱剂缓慢流出。然后把硅胶慢慢连续不断地倒入柱内（或将硅胶与适量洗脱剂调成混悬液慢慢加入柱内，），硅胶依靠重力和洗脱剂的带动，在柱内自由沉降，此间要不断把流出的洗脱剂加回柱内保持一定的液面，直至把硅胶加完并在柱内沉降不再变动为止。然后在硅胶上面加一小片滤纸或少许脱脂棉。根据加样量控制洗脱剂液面至一定高度。
（3）匀浆法： 搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
上样
将欲分离的样品溶于少量装柱时用的洗脱剂中，制成体积小、浓度高的样品溶液，加入层析柱中硅胶面上。如样品不溶于装柱时用的洗脱剂，则将样品溶于易挥发的溶剂中，并加入适量硅胶（不超过柱中硅胶全量的1/10）与其拌匀，除尽溶剂，将拌有样品的硅胶均匀加到柱顶（始终保持洗脱剂有一定的液面），再覆盖一层硅胶即可。
上样时注意沿着柱内壁慢慢加入，始终保持硅胶上端表面平整；上样量为硅胶的1/60~1/30。
洗脱
洗脱剂的选用可通过薄层色谱筛选，一般TLC展开时Rf 值为0.2~0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，采用梯度洗脱法洗脱。
先打开柱下端活塞，保持洗脱剂流速1~2滴/秒。上端不断添加洗脱剂（可用分液漏斗控制添加速度与下端流出速度相近）。如单一溶剂洗脱效果不好，可用混合溶剂洗（一般不超过三种溶剂），通常采用梯度洗脱。洗脱剂的洗脱能力由弱到强逐步递增。
收集处理
等份收集洗脱液，每份收集量大概与所用硅胶的量相当。每份洗脱液采用薄层定性检查，合并含相同成分的洗脱液。经浓缩、重结晶处理往往可得到某一单体成分。如仍为几个单体成分的混合物，不易析出单体成分的结晶。则需要进一步层析或用其他方法分离。

注：
(1)柱色谱分离能力比薄层分离能力强，效果更好，尤其对结构相似、性质接近、采用薄层难以分离的成分分离效果好。
(2) 洗柱子能不用含水的混合溶剂，就尽量不要用。

硅胶要研磨的足够细，黏合剂要完全溶解。
在制备硅胶板时大部分靠的是经验，要关注液体往下流的速度，在操作时候要均匀薄厚一致的铺在载玻片上，然后舀一勺倒在载玻片中间使其慢慢布满整块板面，最后再用手轻轻镇动几下，记住一定不要有气泡。

扩展资料：
注意事项：
配制4%～5%的羧甲基纤维素(CMC)：称取CMC，溶于冷水中，边加热边搅拌，直至成为清澈、透明的溶液。
40%硅胶：按CMC溶液的量、按40%的比例称取薄板层析硅胶，倒入大研钵中，与CMC溶液混合，充分研磨成均匀糊状。
加入几滴乙醇或丁醇，可起到消泡的作用。
将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面，自然干燥后放入烘干箱烘12小时以上。再在105~110℃活化，活化时间为0.5~1小时，冷却后即可使用。
参考资料来源：百度百科-薄层层析硅胶板

先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化 将柱子必须装平整、均匀 考虑有限柱填料的吸附量 可考虑用剃度法分开并洗脱 柱层析分离的实验方法和技巧1B= vrGq
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。 压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。
减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。
加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。 应该是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。 En8-Hc#NC
现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。 适用于对氧，水敏感，易分解的产品，可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，因为溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，毕竟要分离的是敏感的东东，小心不为过。也是因为分离的东西比较敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加压、常压、减压，随需而定。因为是schlenk操作，所以点板是个问题，如果样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。如果样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk，现在只一个就能把所要的全收集到。
无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。因为硅胶中有大量的羟基裸露在外，很容易是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。听说有个方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。哪位做过可以提出来大家参详参详。 湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶，那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。
有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。 当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。甲醇据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。
由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。
另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。 1、 装柱
柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！
2、 加样
用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。
3、 淋洗剂的选择
感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。要按照RF的比值来判断是否效果好，而不是爬得高就好。
4、 样品的收集
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可以采用氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品，wuwu。如果都用小试管那工作量又太大。
5、最后的处理
柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。
另外，再过柱的时候，有时会出现气泡，一是和使用的溶剂有关，如果是易挥发的溶剂，如乙醚、二氯甲烷等，在室温稍高的情况下，很容易出现这种现象，因此，在室温高的时候，可以选择沸点较高，挥发相对小的溶剂。还有，使用混合溶剂时，使用的两种溶剂的沸点应该相差不大，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90),而乙醚却要选择30－60的石油醚。二是：不论是用带砂板的还是塞棉花的，在装柱之前，都要将空气用加压的方法将空气排干，这样就可避免柱中有空气！

一. 柱层析硅胶介绍：
柱层析硅胶又称为层析介质，产品是以优质硅胶为原料，经精细加工处理制备成的具有一定粒度分布范围、高纯度白色粉末。广泛用于医药、化工、植提、生化等行业。
二. 柱层析硅胶原理：
硅胶层析法分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而得到分离， 极性较大的物质与硅胶作用强，保留时间长，极性弱的物质与硅胶作用弱，保留时间短，物质在固定相与流动相间通过反复的吸附、解吸过程，得以分离。
三. 柱层析技术介绍：
常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱，其实硅胶柱层析技术也可以称作硅胶吸附柱色谱技术。
色谱法又称层析法，是一种以分配平衡为机理的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异，最后达到彼此分离的目的。
四.柱层析硅胶的相关应用：
从天然产物中提取、分离和表征生物小分子，是新药研发中获得先导化合物的主要途径之一。层析法（Chromatography）是天然产物分离最常用的方法之一。 层析法最早是根据化合物颜色分离一些植物色素，如今，层析法已经演变成为一种高度敏感的、有效的化合物分离和鉴定方法。柱层析一般包括常压柱层析、中压柱层析和高压柱层析。按照柱填料又可分为柱层析硅胶、离子交换层析、凝胶渗透色谱、疏水作用色谱等，其中以柱层析硅胶（正/反相）使用最为广泛。与其他层析方法相比，柱层析具有操作简单，经济实惠 ，样品承载量大等优点，是天然产物分离纯化的首选方法之一。

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贞丰县15349756200： 硅胶柱层析的硅胶柱层析惯用方法 - ？
堂蓝小儿： 1.称量.200-300目硅胶,称30-70倍于上样量;如果极难分,也可以用100倍量的硅胶H.干硅胶的视密度在0.4左右,所以要称40g硅胶,用烧杯量100ml也可以. 2.搅成匀浆.加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌.如果洗脱剂是石油醚...

贞丰县15349756200： 过硅胶层析柱,容易堵料,流速慢.除了加压、混点硅胶、搅拌、换目数.还有啥好办法吗?(100L的大柱子) - ？
堂蓝小儿： 可以上层用小目数下层用大目数硅胶.还可以在硅胶柱上方加搅拌让样品一直处于悬浮状态

贞丰县15349756200： 硅胶柱层析时,淋洗剂中可以有水吗? 水的比例应不超过多少? - ？
堂蓝小儿： 不能用水.如果要用水就要用纤维素柱子.

贞丰县15349756200： 我用的是100 - 200目得柱层层析硅胶,在使用前需要活化吗?活化得条件是什么啊? - ？
堂蓝小儿： 一般硅胶柱层析不需要活化就可以直接装柱,如果你的样品有特殊要求,就需要活化下,基本就是120度烘4-8h,除去水分,但是这样硅胶的吸附变大,可能会使样品分离困难,看你分什么东西了

贞丰县15349756200： 请问做柱层析的硅胶怎么做预处理啊,怎么装柱 - ？
堂蓝小儿： 硅胶的预处理 我们以浓盐酸浸泡硅胶14小时,然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后,将起进行减压抽滤,后不断加蒸馏水冲洗.在1小时之后,抽滤的水呈中性,但仍然含有氯离子.经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子.晾干一周后,...

贞丰县15349756200： 薄层色谱基本操作有哪几个关键技术 各项操作应该注意什么 - ？
堂蓝小儿： 薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄层层析,属于固-液吸附色谱.是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点.一方面适用于小量样品(几到几十微克,甚至0.01μg)的分离...

贞丰县15349756200： 在凝胶层析中要想得到好的层析结果应注意哪些问题和采取哪些措施? - ？
堂蓝小儿： 1 柱填充要均一,决不能出现气泡.在装柱时候要缓慢倒入凝胶,并轻轻敲打柱身赶走气泡. 2 柱上表面要平,平衡柱时间要长一些,让凝胶充分沉积为均一的柱床. 3 上样体积要少,因此最好浓缩样品. 4 柱床上表面不能干燥,要有1~2cm流动相覆盖.

贞丰县15349756200： 叶绿素提取和分离流程 - ？
堂蓝小儿： 一 实验目的 1.掌握提取叶绿素的方法;2.了解薄层层析的原理,掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法二 实验原理1.叶绿素提取高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶...

贞丰县15349756200： 硅胶层析的硅胶层析 - ？
堂蓝小儿： 性状:该产品为白色均匀颗粒,主要成分为二氧化硅,由优质硅胶为原料加工制成.其主要特点是能通过对混合物质中的不同成分吸附保留时间的差异,达到分离提纯的目的.依其纯度又分为工业级粗孔柱层析硅胶、试剂级柱层析硅胶. 用途:主要用于石油产品的精制,脱除芳烃物质或用于中草药有效成分的分离提纯,高纯度物质的制备等. 规格: 国际惯例:63-212μm(70-230目);38-63μm(230-400目) 国内常规:150-250μm (60-100目);75-150μm (100-200目);45-75μm (200-300目)(也可按用户需求加工成其他规格 )

贞丰县15349756200： 有哪位化学大神知道“点样板”(层析硅胶板)的原理和操作与观察的具体方法, - ？
堂蓝小儿： 应该利用的就是薄层层析.在进行薄层层析时,首先应该知道未知化学成分的类型,其极性的大致归属,从提取液或从色谱柱的流动相极性可知,另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分,然后细分,对于分离未知的化学物质,展开剂...