细胞克隆技术是怎么回事？

~ 有限稀释法是一种常用的克隆方法。
将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数，计出1mL的细胞数。
用HT培养液稀释， 使细胞浓度为50～60个/mL，于96孔培养板中每孔加0.1mL(五六个细胞/孔)。
接种2排，剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释，再接种2排，如此类推，直至使每孔含0.5～1个细胞。
培养7～10d后，选择单个克隆生长的阳性孔再一次进行克隆。一般需要如此重复3～5次，直至达100％阳性孔率时即可，以确保抗体由单个克隆所产生。
例如：
实验细胞克隆化培养技术—有限稀释法
一、实验目的：
1、掌握用有限稀释法进行细胞克隆化培养技术； 2、学会细胞克隆形成的辩观察技能；
3、配合抗体分泌细胞筛选技术，确定抗体分泌细胞。 二、实验原理：
克隆化培养即单细胞培养技术，用有限稀释法进行杂交瘤细胞克隆化培养，可以及时确定阳性杂交瘤细胞株，同时淘汰因发生染色体丢失或抗体的轻、重链基因分离而出现无抗体分泌阴性细胞株。
一般杂交瘤细胞需经过52—3次反复克隆后，才能达到100%细胞阳性率。
该办法亦适用于一般细胞培养中的细胞纯化、突变细胞株的选择，识别和分离。是细胞株的常用方法。
三、实验材料：
杂交瘤细胞、25毫升培养瓶、96孔细胞培养板（天津有机玻璃厂）、移液管（1毫升、5毫升、10毫升）、弯头滴管、倒置显微镜、CO2培养箱、白细胞计数板、计数器、盖玻片、防水笔、RPMI-1640、小牛血清、青链霉素、10毫升刻度离心管，00橡胶塞，饲养细胞（3-6×105/ml、见腹腔细胞的制备）。
四、实验步骤：
1、分装了每孔0.1毫升腹腔细胞的96孔细胞培养板（可提前24小时准备就绪，置CO2培养箱中备用）；
2、自细胞培养瓶中收集长势良好的杂交瘤细胞（亦可自24孔培养板孔中收集），制成悬液。
3、按白细胞计数方法准确计得细胞悬液的细胞数，一般在105/毫升左右。
4、取3支10毫升刻度离心管排列在超净工作台试管架上，先用无血清培养基将细胞稀释至103/毫升，再用含15%小牛血清的完全培养基稀释到101/毫升细胞，即每0.1毫升1个细胞。
5、每孔0.1毫升细胞悬液。
6、置37℃5%CO2培养箱，4天后取出观察，并在板盖上打上标记，做好记录并统计结果。
7、继续培养时，则在第4-5天更换1/2培养基，约第7-9天可以收获培养液上清用于检测抗体。并重复检测1-2次。
8、选择单克隆生长孔，生长良好，阳性强者，转移到24孔板再做克隆经培养或扩大培养。
五、实验结果：
实验结果以总细胞孔（如96孔）中出现克隆孔统计出克隆百分率，并可进一步按单细胞孔、双细胞孔、多细胞孔分别计算出百分率。
六、注意事项：
1、注意无菌操作，一旦发现污染（孔）必须及时处理；
2、计数细胞要求准确，稀释量亦要准确，否则将造成一孔多细胞克隆或克隆百分离太低；
3、在计数克隆出现率之前，不宜更换培养液，也不宜强烈振动培养板； 4、做克隆化培养的小牛血清必须是优质血清；
5、若做克隆抗体检测时，特别要保护细胞的生长状况，防止细胞生长不良甚至丢失。 七、说明：
哺乳动物细胞通过分离、稀释接种，培养在适宜于单细胞生长的培养液中，形成细胞克隆。运用这项技术可以制作细胞成活曲线，即在接种相同数量细胞的培养瓶中，加入不同浓度的化学药品，或照以不同剂量的射线，观察其对细胞的听见害程度。由此可以在哺乳类细胞中进行诱变试验及分离突变细胞。

---

安新县15812521318： 细胞克隆技术(细胞克隆技术) - 搜狗百科？
徐侵太宁： 克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群.

安新县15812521318： 体细胞克隆技术的原理是什么 ？
徐侵太宁： 体细胞克隆技术是指把动物体细胞经过抑制培养,使细胞处于休眠状态.采用核移植的方法,利用细胞拆合或细胞重组技术,将卵母细胞去核作为核受体,以体细胞或含少...

安新县15812521318： 什么是克隆技术 ？
徐侵太宁： 克隆技术 什么是克隆? 克隆是英语单词clone的音译,clone源于希腊文klone,原意是指幼苗或嫩枝,以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物,如杆插和嫁接. 如今,克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群.克隆也可以理解为复制、拷贝,就是从原型中产生出同样的复制品,它的外表及遗传基因与原型完全相同. 1997年2月,绵羊“多利”诞生的消息披露,立即引起全世界的关注,这头由英国生物学家通过克隆技术培育的克隆绵羊,意味着人类可以利用动物身上的一个体细胞,产生出与这个动物完全相同的生命体,打破了千古不变的自然规律. 参考资料:

安新县15812521318： 什么是克隆技术 - ？
徐侵太宁： 从生物学的角度来讲,克隆是一种人工诱导的无性繁殖方式或者是植物的无性繁殖方式.一个克隆就是一个多细胞生物在遗传上与另外一种生物完全一样.克隆可以是自然克隆,例如由无性繁殖或是由于偶然的原因产生两个遗传上完全一样的个...

安新县15812521318： 体细胞克隆技术的原理简介 - ？
徐侵太宁： 体细胞克隆技术也即核移植技术.早在1950年,美国生物学家布格斯和金就开始了青蛙胚胎细胞的克隆研究.在1960年,英国生物学家格登利成功的用青蛙体细胞克隆出蝌蚪.1993年斯迪尔曼和赫尔报道在试管婴儿研究中, 获得可分裂的但不能在体外存活的人类胚胎细胞.1997年2月英国罗斯林研究所的科学家成功的克隆了高等哺乳动物绵羊,诞生了克隆羊多莉.这一切在技术上为克隆人类自身铺平了道路.

安新县15812521318： 什么是克隆技术？
徐侵太宁： 克隆,就是取出一个生物个体的体细胞去核,从另外一个同种生物个体的细胞取核,将它植入已去核的细胞,然后将这个完整的细胞植入这种生物的雌性个体的卵巢中,将这个个体生下来就完成了克隆

安新县15812521318： 克隆到底是怎么回事?? - ？
徐侵太宁： 克隆一词是由clone音译而来,在音译名出现以前曾有一个意译名--无性繁殖系,指由单一细胞或共同祖先经有丝分裂得到的细胞群体或有机群体.我们通过细胞培养可以得到一个细胞克隆.在微生物实验时,通过倒平皿,我们可以得到一个个的...

安新县15812521318： 什么叫做克隆技术? - ？
徐侵太宁： 克隆”是从英文“clone”音译而来,在生物学领域有3个不同层次的含义.1.在分子水平,克隆一般指DNA克隆(也叫分子克隆).含义是将某一特定DNA片断通过重组DNA技术插入到一个载体(如质粒和病毒等)中,然后在宿主细胞中进行...

安新县15812521318： 什么是克隆技术？
徐侵太宁： 利用生物体,其他地方的细胞,如表皮细胞,经过培植,移入另一个生物体的子宫,然后受孕并生殖.这就是克隆技术,(通俗说法).克降技术就是复制技术.