RNA反转录成cDNA只要一个引物还是一对引物,原理是啥,我有点糊涂了
典型生物药物的一般制造流程是什么
酶促反转录主要用于合成分子质量较大,转录产物mRNA易分离目的基因。 目的基因的mRNA为模板 逆转录酶 cDNA DNA聚合酶双链 双链cDN**段 与合适载体重组并转入受体菌 cDNA克隆1.2 目的基因的分离 通过适当的方法构建上一个完整的基因组DNA文库或CDNA文库,意味着包含目的基因在内的所有基因都得以克隆,但并不等于完成了...
反转录和逆转录的区别
反转录与逆转录的唯一区别后者是生物的自然发生的过程，前者是人工进行的过程。但是它们的本质是一样的。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。转录能被一些特异性的抑制剂抑制，有些抑制剂是治疗某些疾病的药物，有的则是研究转录机理的重要试剂。一类抑制剂同时...
逆转录和反转录有什么区别
反转录与逆转录的唯一区别后者是生物的自然发生的过程，前者是人工进行的过程。但是它们的本质是一样的。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。转录能被一些特异性的抑制剂抑制，有些抑制剂是治疗某些疾病的药物，有的则是研究转录机理的重要试剂。一类抑制剂同时...
反转录与逆转录有什么区别?
反转录与逆转录的唯一区别后者是生物的自然发生的过程，前者是人工进行的过程。但是它们的本质是一样的。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。转录能被一些特异性的抑制剂抑制，有些抑制剂是治疗某些疾病的药物，有的则是研究转录机理的重要试剂。一类抑制剂同时...
逆转录酶的三个功能
逆转录酶的三个功能：1、RNA为模板指导的DNA聚合酶活性；2、DNA为模板指导的DNA聚合酶活性；3、RNaseh活性。RNA指导的DNA聚合酶活性；以RNA为模板，催化dNTP聚合成DNA的过程。此酶需要RNA为引物，多为色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性...
反转录与逆转录的区别
反转录与逆转录的唯一区别后者是生物的自然发生的过程，前者是人工进行的过程。但是它们的本质是一样的。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。转录能被一些特异性的抑制剂抑制，有些抑制剂是治疗某些疾病的药物，有的则是研究转录机理的重要试剂。一类抑制剂同时...
基因表达的检测方法有哪些
也可用RT-PCR（reversetranscribedPCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。二...
检测基因表达的方法有哪些
也可用RT-PCR（reversetranscribedPCR）方法检测外源DNA在植物体内的转录表达。其原理是以植物总RNA或mRNA为模板进行反转录，然后再经PCR扩增。如果从细胞总RNA提取物中得到特异的cDNA扩增条带，则表明外源基因实现了转录。此法简单、快速，但对外源基因转录的最后决定，还需与Northern杂交的实验结果结合。二...
封董医创：[答案] 一个,运用反转录,以一条DNA单链为模板,以一个引物为转录的开始,通过DNA聚合酶进行链接(反转录的最终长度是不确定的,可能无限长)
林口县19769933666： MicroRNA逆转录CDNA - ？
封董医创： 根据你的反转录引物而定. ①如果是普遍反转录引物,则不需要,也就是反转录用一种引物将RNA全部反转成cDNA 然后定量的时候再使用miRNA和对应的普通基因各自的定量引物. ②若使用的是特异性反转录引物 则需要分开反转录,前面的buffer、酶等能混合,最后要分开,加入各自对应的反转录引物. 无论是普遍反转录还是特异性反转录,均可进行后续的定量.貌似特异性引物更精确.
林口县19769933666： 从rna逆转录成cdna需要什么试剂吗 - ？
封董医创： 一个,运用反转录,以一条DNA单链为模板,以一个引物为转录的开始,通过DNA聚合酶进行链接(反转录的最终长度是不确定的,可能无限长)
林口县19769933666： RNA是如何反转录成cDNA的?过程和原理怎样?请教 - ？
封董医创： 操作步骤是先加RNA、OligodT、随即引物、水 65C反应10min,冰上放置5min后:这一步是让RNA变性,把RNA的二级结构打开; 再加dNTP,RNaseA,BUFFER, MTV逆转录酶, 反应25℃10min:这一步是让反转录引物(oligodT,随机引物)和模板RNA退火结合 37℃60min:这一步是反转录酶的工作温度 70℃10min:这一步是变性,把合成的cDNA和RNA变性开,就拿到单链的cDNA
林口县19769933666： mRNA反转录形成cDNA的过程是怎样的 - ？
封董医创： 有反转录酶,可以以RNA为模版合成DNA. 这过程需要引物,根据mRNA有3'polyA尾巴的特点,可以用oligo-dT作为引物,合成cDNA,这样可以自然去除非mRNA的RNA的转录. 也可以用随机引物去合成大量不同的cDNA. 如果要反转录特定的mRNA,就根据它设计特异性引物反转录,这样理论上只有目的cDNA产生.
林口县19769933666： 反转录试剂盒进行cdna第一链需要引物吗 - ？
封董医创： 需要,用Oligo(dT)或随机引物
林口县19769933666： RNA反转录为cDNA 原理 主要想知道各个水浴、冰浴步骤在实验中的作用RNA反转录过程步骤如下:将提取的RNA用DEPC水吹起,加入引物1、引物2,加... - ？
封董医创：[答案] 第一次70度水浴5min为让RNA二级结构打开,便于引物结合. 第一次冰浴1min为了退火,让引物能够结合RNA. 37度水域是让cDNA聚合. 第二次70℃水浴是再变性,让引物脱离模板RNA和cDNA第一链. 第二次冰浴是为了让cDNA-RNA复性成为cDNA-...
林口县19769933666： 我提取RNA,反转录得到cDNA,我要由此扩增功能基因,请问引物设计时,用查到的mRNA序列,还是用cDNA序列 - ？
封董医创： 理论应该用CDNA进行因为设计,但要保证你提取的mRNA的质量,尽量减少降解.可以在原序列基础上先写出互补序列再进行引物设计.
林口县19769933666： 怎么在NCBI里面找到目的基因的CDS - ？
封董医创： 怎么在NCBI里面找到目的基因的CDS 提取细胞总RNA然后用试剂盒反转录成cDNA,用cDNA作为模板扩增基因的CDS区,然后想要转染进细胞中.比如MYOD1基因,首先在NCBI找到它的mRNA序列,然后找到它的CDS序列,全部复制下来,在primer 5.0 中.正向引物直接从CDS的第一个核酸开始(比如18bp),反向引物从CDS最后一个核酸开始,向前选择序列(比如17bp),调节2个引物的长度(不一定要一致),尽量避免错配,二聚体,产生错的产物即可.最后在引物的5'端添加酶切位点以及保护碱基.
林口县19769933666： 反转录cDNA第一链,进行PCR扩增,只有引物二聚体,怎么办呢? - ？
封董医创： 两个原因:1、反转失败,模板里没有DNA;2、PCR失败,例如引物不行,退火温度不对等.这也没办法了,你先确定引物能不能从基因组里扩出条带.不过这种情况很可能是反转失败了.
