求助:酵母菌生理测定的同化碳源试验,酵母菌不长,为什么?

作者&投稿:童湛 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
求助:酵母菌的生理特性,培养条件,能量代谢。谁能给个答案。~

大多数酵母菌为腐生,其生活最适pH为4.5一6,常见于含糖分较高的环境中,例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。酵母菌生长迅速,易于分离培养,在液体培养基中,酵母菌比霉菌生长得快。

利用酵母菌喜欢酸性环境的特点,常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液(这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长),然后在固体培养基上用划线法分离之。

常用的培养基有:
(一)麦芽汁培养基的配制
1.培养基成分
新鲜麦芽汁一般为10-15波林。
2.配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡6-12h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒的两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。
(2)取一份麦芽粉加四份水,在65℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。
(3) 糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20 m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。
(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10-15波林,调pH至6.4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁,加水稀释到10-15波林后使用。
(5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(二)马铃薯葡萄糖培养基的配制
1、培养基成分
马铃薯 20g
葡萄糖 2 g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2.配制方法
(1)配制20%马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000m1。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。
(2)配制时,按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化并补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制
1.培养基成分
黄豆芽 10g
葡萄糖 5g
琼脂 1.5-2g
水 100ml
自然pH
2.配制方法
(1)称新鲜黄豆芽10g,置于烧杯中,再加入100 m1水,小火煮沸30 min,用纱布过滤,补足失水,即制成10%豆芽汁。
(2)配制时,按每100 m1 10%豆芽汁加入5g葡萄糖,煮沸后加入2 g琼脂,继续加热融化,补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(四)察氏(czapck)培养基的配制
1.培养基成分
蔗糖 3g
NaN03 0.3g
K2HP04 0.1g
KCl 0.05g
MgSO4·7H2O 0.05 g
FeS04 0.001 g
琼脂 1.5-2g
蒸馏水 100ml
自然pH
2.配制方法
(1)称量及溶化 量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中,分别称取蔗糖、NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1%的FeS04溶液。
(2)定容 候药品全部溶解后,将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
(3)加琼脂 加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
(4)分装、加塞、包扎。
(5)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。


YPD培养基
YPD 或YPED,:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基
用于酵母菌的培养
配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉
配制方法:
1 溶解10gYeast Extract(酵母膏), 20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉
2 高压 121度 20min
3 加入100ml 10×Dextrose (glucose)(葡萄糖),(葡糖糖溶液灭菌后加入)
注:葡萄糖,yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。
YPEG:除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外,其他成分同YPD

他的能量代谢,可以用质谱分析培养前后的成分来得到

硝化菌是自养菌,就是以二氧化碳为碳源的,不能以有机物为碳源,少量硝化菌是兼性厌氧的可以以有机物为碳源。
酵母菌的碳源包括糖类、蛋白质、一些有机酸等含碳有机物。
乳酸菌的碳源主要为单糖中的己糖,部分菌种能利用戊糖,只有极少数菌种能利用淀粉。

酵母菌筛选完成后,进行酵母菌生理生化特性测定:进行了同化碳源实验 采用生长谱法,用无碳源培养基。取盛有无菌生理盐水试管,接种新培养酵母菌悬液,在分别倒入融化并冷却至45°的基础培养基内,摇匀后倒入无菌培养皿内,静置凝固后倒置于28摄氏度温箱内2h,使培养基表面稍干,在培养皿底部标记C源的名称和位置,在超净工作台内加糖(葡萄糖。淀粉、D-木糖、果糖,鼠李糖,蔗糖、松三糖、海藻糖等)米粒大小于标记处,置28摄氏度恒温箱内培养30小时后观察,菌落生长几乎为0,反复试验,菌还是几乎没有生长,请问一下是怎么回事?谢谢!~


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周至县13774206346: 从生理学角度来讨论发酵和同化的概念有什么异同 -
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周至县13774206346: 在锥形瓶中加入以葡萄糖为碳源的培养液,再接种酵母菌.实验分甲、乙、丙、丁四组,每组又分I号瓶和Ⅱ号瓶两瓶(如图).在某氧气浓度下,I号瓶有色液滴... -
爰旺康赛:[选项] A. 1:2 B. 1:3 C. 1:4 D. 1:6

周至县13774206346: 硝化细菌、酵母菌、乳酸菌所需的碳源分别是什么? -
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周至县13774206346: 杜氏管发酵法是什么 -
爰旺康赛: 杜氏小管主要是用来做细菌糖发酵试验,特别是在鉴别肠道类细菌,如:大肠杆菌.主要用来鉴别细菌在已知糖的糖发酵过程中,是否产生气体.具体做法:在已经灭过菌并且接过被测菌种的发酵管中,倒置放入杜氏小管,注意小管中不能存...

周至县13774206346: 现有一瓶葡萄糖溶液,内置有适量酵母菌,经测定瓶中放出的CO2的体积与吸收O2的体积之比为5∶4
爰旺康赛: 酵母菌有氧呼吸消耗氧气,无氧呼吸不消耗氧气.有氧呼吸吸收的氧气体积与有氧呼吸释放的二氧化碳体积相等,根据题目中所说二氧化碳体积与氧气体积之比为5:4,则瓶中有1/5的二氧化碳是酵母菌无氧呼吸释放的.有因为在消耗等量葡萄糖的情况下有氧呼吸释放的二氧化碳是无氧呼吸释放的二氧化碳的3倍,则释放瓶中1个单位二氧化碳无氧呼吸的酵母菌有3个单位的量,有氧呼吸的酵母菌有4个单位的量,所以有4/7的酵母菌在有氧呼吸.

周至县13774206346: 根据某试验测试,酵母菌培养过程中释放的CO2量比消耗的O2量高出4倍,对这一现象的解释是? -
爰旺康赛: 说明有一部分酵母菌进行有氧呼吸,一部分酵母菌进行无氧呼吸.

周至县13774206346: 假丝酵母菌的检查 -
爰旺康赛: ⒈直接检查法是临床最常用检验方法,阳性检出率为60%.其优点是简便,快捷.⑴盐水法 ⑵氢氧化钾法 ⒉革兰染色法此方法阳性检出率为80%.取分泌物涂片、固定后,革兰染色,置显微镜下观察,可见成群革兰染色阳性的卵圆形孢子和假菌丝.⒊培养法如疑为假丝酵母菌性阴道炎,多次检查均为阴性,可作真菌培养.⒋菌种鉴别实验如需确定分辨假丝酵母菌的种类,必须进行发酵试验、同化试验,并就其菌落形态特征进行鉴别.⒌测定pH 值具有重要鉴别意义.⒍对于年老肥胖或久治不愈患者,应查尿糖、血糖以寻找病因.其他辅助检查:无特殊表现.

周至县13774206346: 鉴定细菌的API法是什么 -
爰旺康赛: API试剂盒有好几种,是由法国梅里埃公司出品的,用来进行碳源发酵试验,其中鉴定乳酸菌的API50试剂盒有49种碳源.传统的细菌鉴定最基础的方法之一就是碳源发酵试验.

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