western 内参用的GAPDH 和B-actin蛋白的分子量是多少？
作者&投稿：归肾 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
western 内参用的GAPDH分子量为146KD，检测条带大约在36kD，B-actin分子量为42KD。
严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，这对实验结果分析是非常有用。要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。因此需要内参很重要。
GAPDH和B-ACTIN的区别：
1、定义不同：
GAPDH：GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶。
B-ACTIN：即“肌动蛋白”，是细胞的一种重要骨架蛋白。
2、分布方式不同：
GAPDH：广泛分布于各种组织中的细胞。
B-ACTIN：分布在骨架当中。
3、作用不同：
GAPDH：被广泛用作抽提total RNA，poly(A)+ RNA，Western blot等实验操作的标准化的内参。
B-ACTIN：β-Actin是PCR常用的内参，β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数。
4、结构不同：
GAPDH结构：
B-ACTIN结构：
5、应用不同：
GAPDH：蛋白印迹法和内参。
B-ACTIN：
生物化学与分子生物学；氨基酸、多肽与蛋白质；细胞生物学。
参考资料：
百度百科：GAPDH
百度百科：β-Actin
western 内参用的GAPDH分子量为146KD，检测条带大约在36kD，B-actin分子量为42KD。
初娟加尔： 常用的蛋白内参有 beta actin 和 GAPDH,它们是有区别的 GAPDH分子量为146KD,检测条带大约在36kD,beta actin分子量为42KD.一般选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上另外,细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用 beta actin ,膜蛋白的Western Blot一般用GAPDH为内参
贺兰县19576239889： GADPH是什么 - ？
初娟加尔： GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa.GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参.因为GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者...
贺兰县19576239889： 14 - 3 - 3蛋白western选用什么内参 - ？
初娟加尔： 要检测蛋白分子量是在28~33kD之间?那内参可以选用a-tubulin(56kD)或者β-actin(42kD)GAPDH(36kD)可能稍微小了的
贺兰县19576239889： 请教如何选择western的抗体 - ？
初娟加尔： 抗体选择一般注意几点:1、特异性(特异性高较好,一般单抗优于多抗,但有时你想贴出同一蛋白不同加工形态,多抗能贴出所有带,根据实验选择)2、效价(效价高)3、知名抗体公司,如CST、abcam、Thermo等
贺兰县19576239889： Western blot 内参跑不齐怎么调整 - ？
初娟加尔： 第一,应该确认每个样品表达GAPDH的量一样,虽然是持家基因,本人觉得不同细菌可能表达量不一样,造成信号强弱不一样.可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异,调整上样量一样再检测GAPDH. 第二,内参跑不齐.一般是跑胶...
贺兰县19576239889： western里的 marker 和 内参都是做什么用的 - ？
初娟加尔： marker可以估计目的蛋白的相对大小~内参是衡量上样量是否一致的~只有上样的总蛋白量保持一致~目的蛋白含量变化才有说服力~
贺兰县19576239889： 在WB中心肌细胞蛋白应该用什么做内参 - ？
初娟加尔： 要检测一个基因的表达产物是否正确,或者比较表达产物量的相对变化,首选方法是Western Blot.因为Western Blot操作相对简单方便,既可以定性分析表达产物,同时还可以指示目的蛋白量的相对变化.虽然,顺利的时候Western Blot做起来...
贺兰县19576239889： Western Blot为什么必须要用内参 - ？
初娟加尔： 内参作为一个参考物选用一个表达量相对稳定的蛋白,如actin,GAPDH等.不同方法处理细胞时内参的表达量不变,目的蛋白有可能会有变化.western中各泳道的内参的条带一样,那说明蛋白浓度一样.总蛋白浓度一样,目的蛋白条带宽度差异才能体现出目的蛋白表达量的差别.
贺兰县19576239889： western blot的抗体怎么选择? - ？
初娟加尔： 做原核表达蛋白western一个要注意的问题就是上样的蛋白不能太大,最好在100ng以下.以防止因为蛋白量太大引起非特异性信号.
