食品微生物学固体斜面接种时要注意什么

微生物学的特点~

微生物学理论部分 微生物大小的比较

微生物学检查法
标本
因鼠疫传染性极强，采集标本时必须严格无菌操作。根据病型采取淋巴结穿刺液、肿胀部位组织液、脓汁，血液和痰等。人和动物尸体可取肝、脾、肺、病变淋巴结以及心血等。陈旧尸体取骨髓。将采集标本送至有严密防护措施的专门实验室进行检查，禁止在一般实验室进行操作。
直接涂片镜检
除血液标本外，一般均需涂片或印片，干燥后用甲醇固定，革兰染色或吕氏美兰染色，镜检。在不同材料中，菌体大小、形态有很大差异，除典型形态外，往往可见菌体呈多形态性，需加以注意。
分离培养与鉴定
血液标本需先置肉汤中进行增菌培养。分离培养一般选用血琼脂平板，28摄氏度24小时后，可见较小的露滴状菌落，继续培养则菌落增大至1～2毫米，中央厚而致密，周边逐渐变薄。取可疑菌落进行涂片染色镜检，噬菌体裂解试验，血清凝集试验，特异荧光抗体染色等作出鉴订。
血清学试验
可用于检查鼠疫耶尔森菌抗原或特异性抗体。敏感而特异的试验方法有ELISA、固相放射免疫分析，SPA协同凝集试验等。
检测核酸
用DNA探针杂交方法或PCR技术检测鼠疫耶尔森菌核酸，有助于鼠疫的诊断。PCR敏感性极高，蚤体内有10个鼠疫耶尔森菌感染即可用PCR技术检出。
诊断检查
诊断：取决于病人有接触史及肺部受累表现，病因诊断取决于痰、血或淋巴结吸出物革兰染色、培养，有条件的单位可作直接荧光素标记抗体染色，可提供快速的病因诊断。

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。
保藏方法
1．传代培养保藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。
2．液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。
3．载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。
4．寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

防止杂菌污染，接种时平板划线的方法（每一次都要从上一次划线末端开始划，且要灼烧接种环。）

微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。

低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。

保藏方法
1．传代培养保藏法

又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。

2．液体石蜡覆盖保藏法

是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。

3．载体保藏法

是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。

5．冷冻保藏法

可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷冻干燥保藏法

先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。

有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。

器材
细菌、酵母菌，放线菌和霉菌；

肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油， 五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸， 无水氯化钙；

灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100 目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L 形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。

操作步骤
各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。

1．斜面低温保藏法

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。

保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4 个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。

此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。

2．液体石蜡保藏法

（1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌 30 分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。

（2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。

（3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm 为准，使菌种与空气隔绝。

（4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。

此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2 年以上不死，酵母菌可保藏1—2 年，一般无芽孢细菌也可保藏1 年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏 3 个月之久。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。

3．滤纸保藏法

（1）将滤纸剪成0．5×1．2cm 的小条，装入0．6×8cm 的安瓿管中，每管1—2 张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌 30 分钟。

（2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。

（3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml 滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。

（4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

（5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。

（6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。

（7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。

细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2 年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17 年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。

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馆陶县13887195436： 微生物在固体斜面和液体培养基中转接的注意点??? - ？
扈有盐酸： 是要把固体斜面上的菌落转接到液体培养基中吗? 首先要将液体培养基灭菌,一般是选择高温高压蒸汽灭菌;将冷却后的液体培养基,以及接种所需物品放至无菌台,打开紫外灯,10-15min后关闭,开无菌风,5min后点燃酒精灯,在其附近开始使用斜面接种.接种时接种环要烧红2-3次. 接种时需要预先设计好接种量,选用较长的接种环,尽量从斜面的中上部采取菌落,还可以将接种环的环部分稍微弯曲,便于使用;不要粘在壁上.全程在酒精灯附近操作,无菌风不能关闭!

馆陶县13887195436： 微生物接种应注意什么 - ？
扈有盐酸：[答案] (一)斜面接种:由已长好微生物的斜面中挑取少量菌种接种至另一空白斜面培养基上.(1)接种前用记号笔在距试管口2~3cm位置上,注明菌名、接种日期等.(2)将试管放于手掌中,并用手指夹住,使两支试管呈“V”字形.(3...

馆陶县13887195436： 微生物接种应注意什么 - ？
扈有盐酸： (一)斜面接种:由已长好微生物的斜面中挑取少量菌种接种至另一空白斜面培养基上. (1)接种前用记号笔在距试管口2~ 3cm位置上,注明菌名、接种日期等. (2)将试管放于手掌中,并用手指夹住,使两支试管呈“V”字形. (3)用火焰外焰将...

馆陶县13887195436： 微生物学实验 微生物接种培养 斜面 - ？
扈有盐酸： 注意培养目的检测特征!接种培养后需要根据菌落的生长方向判断,该菌是否具有鞭毛,是否可以运动,如果接种过密,不利于观察.再有,你接种的如果是单一菌种还好,如果有杂菌,前两种接种方式容易使多种菌落混在一起,不易区分,无法挑出单一菌落.

馆陶县13887195436： 固体斜面培养基配制步骤和注意事项有哪些 - ？
扈有盐酸： 1、培养基配方的选定 同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别.因此,除所用的是标准方法,应严格按其规定进行配制外,一般均应尽量收集有关资料,加以比较核对,再依据自己的使用目的,加以选用,记录其来源. 2、培养基的...

馆陶县13887195436： 用斜面检测微生物的培养特征接种时,为什么不要划多跳线或蛇形,而只是划一条线 - ？
扈有盐酸：[答案] 用斜面接种微生物是为了能挑去微生物培养的单菌落,若划多条线或蛇形容易形成菌苔,失去斜面培养的意义. 另外如楼上所说,斜面培养还需要观察菌的形态特征,到底菌是固定不动的,还是有鞭毛可以运动,这可以通过观察接的线是完全的直线...

馆陶县13887195436： 斜面接种时 标签要贴在什么位置,为什么 - ？
扈有盐酸： 接种前在试管上贴上标签,注明菌名、接种日期、接种人姓名等.贴在距试管口约2-3cm的位置.(若用记号笔标记则不需标签). 贴在这个位置不影响观察

馆陶县13887195436： 微生物的培养有哪些要注意的地方? - ？
扈有盐酸： 是怎么培养呢 固体还是液体培养~不管是哪种 在接种或者传代的的时候都要注意无菌操作,即是在无菌操作台里面记性~接种环要酒精灯加热灭菌,枪头等要通过高压灭菌锅湿热灭菌(也可以湿热灭菌),固体培养时要是平板要倒置培养,试管斜面要封好口直接培养即可,液体培养用封口膜或者纱布等均可,一定要注意无菌操作.希望可以帮到你.

馆陶县13887195436： 《从斜面上的菌种接种到新的斜面培养基为例,说明操作方法和注意事项》 求解啊亲们!!!谢谢了 - ？
扈有盐酸： 在接种箱或者超净工作台上.将母种经过消毒处理以后,在酒精灯火焰区上方打开棉塞.用接种针挑取一小块菌丝体,接入新的试管培养基上即可.

馆陶县13887195436： 微生物接种环境有什么要求?常用的接种方法有哪些 - ？
扈有盐酸： 微生物接种常用的接种方法有以下几种:1)划线接种 这是最常用的接种方法.即在固体培养基表面作来回直线形的移动,就可达到接种的作用.常用的接种工具有接种环,接种针等.在斜面接种和平板划线中就常用此法. 2)三点接种 在研...