提取植物叶片中的水杨酸及测定其含量的方法

如何测定植物中水杨酸的含量~

用测定羟基苯甲酸的方法
水杨酸(salicylic acid，SA)是一种植物界广泛存在的天然物质，它不仅具有重要的药理效应，而且对植物生长发育过程以及植物抗病性方面有着广泛的调控作用 。SA处理可以延缓多种果实的成熟衰老进程。通过测定果实成熟衰老过程中组织内源SA水平的变化，可以更好了解果实成熟衰老机理，为SA及其衍生物调控果实成熟衰老进程积累基础。但是植物组织中内源SA水平很低，一般在1．0～8．4p~g／g之间_4-一-，果实组织中含量则相对更低，因此如何更有效地提取组织中的SA，并配以更灵敏的检测方法，是研究SA对果实成熟衰老调控的重要内容。
现有的植物组织内源SA提取方法比较复杂，要经过提取、液液分配、蒸干等多个步骤，回收率较低，一般在34．0％～80．7％之间，而血液中SA的提取是通过乙醚或乙醚与石油醚混合物一步萃取法，较现有的植物组织中SA提取法更为简便。

1，提取方法：
取l0．0g叶片充分研磨后，置于50mL的离心管中， 加4．0mL 5％ 的三氯乙酸， 加水至20．0mL后再加入30．0mL乙醚，充分摇匀，浸提12h， 于l 000~g下离心5.0min，取出上部乙醚相，水相再经乙醚重复提取2次，合并乙醚相，真空旋转蒸干后，加入1．0mL 50％甲醇50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液将其溶解，置于Ep—
pendorf管中保存，即为游离态SA样品。水相加l8．5％的HCI至终浓度为3．2％，于80cI=水浴中加热1．0h，冷却后用乙醚提取3次，合并乙醚相，蒸干后加入1．0mL 50％ 甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液溶解，置于Eppendorf管中保存，即为结合态SA样品。样品经0，3 Ixm 的微孑L过滤器过滤后，用高效液相色谱(HPLC)进
行检测。

2，测定含量

1-2 主要仪器与试剂
主要仪器：Beckman高效液相色谱仪(带化学工作站)，岛津荧光检测器，Heidolp旋转蒸发仪(德国)。
SA标准品，上海五联化工厂生产；甲醇为色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司生产；其余所用试剂均为分析纯；水(二次蒸馏水，自制)。

HPLC检测条件
Cl8柱，7．3mm~20cm；流动相： 甲醇：乙酸缓冲液(pH3．2)=50：50；岛津荧光检测器(激发波长为310nm，发射波长为415nm)；流速为1．0mIMmin；进样量为201xL。
1．5 标准曲线的建立
用50％甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液配制浓度为l，0m g／mL的SA溶液，再稀释成0、0．25、0．5、l，0、2，01xg／mL的标准溶液，将不同浓度的标准溶液用HPLC测定，得到标准曲线。

具体参考文献：
题目：《猕猴桃果实中内源水杨酸的提取、测定及其在采后研究中的应用》猕猴桃果实中内源水杨酸的提取、测定及其在采后研究中的应用=Extraction and Determination of Endogenous Salicylic Acid from Kiwifruit and Its Application to Postharvest Research[刊，中]/张玉（浙江大学果实分子生理与生物技术实验室，杭州 310029），陈昆松，张上隆//中国食品学报.—2004，4（3）.—6～9
摘要：建立一种更有效的水杨酸（SA）提取、测定方法是了解SA对采后果实成熟衰老生理影响和调控机理的基础。本文采用乙醚一步萃取法提取猕猴桃果实组织中内源SA，用高效液相色谱法（荧光检测器）测定其含量。结果显示，本方法回收率为（96.4±3.0）%，显著高于其它已报道的方法，最低检测限为0.9ng／g·FW。SA的荧光峰面积与浓度在0～2.0μg／mL范围内呈线性关系，达到极显著水平（r＝0.9991**），该方法简便易行，样品提取时间比以往报道的方法节省一半，因此可用于成熟果实组织中的内源SA萃取和测定。图4表1参12。





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植物体内的水杨酸提取方法和定性，定量检测
　　会计学的定量研究一般是为了对特定研究对象的总体得出统计结果而进行的。定性研究具有探索性、诊断性和预测性等特点，它并不追求精确的结论，而只是了解问题之所在，摸清情况，得出感性认识。定性研究的主要方法包括：与几个人面谈的小组访问，要求详细回答的深度访问，以及各种投影技术等。
　　在定量研究中，信息都是用某种数字来表示的。在对这些数字进行处理、分析时，首先要明确这些信息资料是依据何种尺度进行测定、加工的，史蒂文斯（S.S.Stevens）将尺度分为四种类型，即名义尺度、顺序尺度、间距尺度和比例尺度。
　　定性分析就是对研究对象进行“质”的方面的分析。定性分析：分干法分析和湿法分析，前者所用的试样不须制成溶液，如熔珠分析、焰色分析、原子发射光谱法、X射线荧光光谱分析法等。

　　定性分析分干法分析和湿法分析，前者所用的试样不须制成溶液，如熔珠分析、焰色分析、原子发射光谱法、X射线荧光光谱分析法等。湿法分析则要将试样配成溶液，常用的溶剂有水、酸、碱溶液。不溶于上述溶剂的试样可用碳酸钠、过氧化钠、硫酸钾等助熔剂使试样熔融分解，然后再溶于水或稀酸。

一般采用柳树，杨树，冬青树皮或猕猴桃果实等来bai提，当然杨柳科的树叶中水杨酸含量也是很高的。

测定含量：

主要仪器：Beckman高效液相色谱仪，岛津荧光检测器，Heidolp旋转蒸发仪。SA标准品，上海五联化工厂生产；甲醇为色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司生产；其余所用试剂均为分析纯；水(二次蒸馏水，自制)。

HPLC检测条件：Cl8柱，7．3mm~20cm；流动相： 甲醇：乙酸缓冲液(pH3．2)=50：50；岛津荧光检测器(激发波长为310nm，发射波长为415nm)；流速为1．0mIMmin；进样量为201xL。

提取：

水杨酸可由苯酚与氢氧化钠反应生成苯酚钠，蒸馏脱水后，通二氧化碳进行羧基化反应，制得水杨酸钠盐，再用硫酸酸化，而得粗品。粗品经升华精制得成品。

其制备方法是由苯酚钠盐与二氧化碳羧基化后再经酸化而得。用苯酚及液体烧碱制成苯酚钠盐溶液，真空干燥，然后于100℃下慢慢通入干燥的二氧化碳，当压力达到0.7～0.8MPa时，停止通二氧化碳，升温至140～180℃。

扩展资料：

 水杨酸在某些弱酸性电解液中作为添加剂，也可用作电镀或化学镀的络合剂。化妆品防腐剂。主要用于花露水、痱子水、奎宁头水等水类化妆品。除防腐杀菌作用外，还有祛除汗臭、止痒消肿、止痛消炎等功能。

主要作为医药工业的原料，用于制备阿司匹林、水杨酸钠、水杨酰胺、止痛灵、水杨酸苯酯、血防-67等药物。染料工业用于制备媒染纯黄、直接棕3GN、酸性铬黄等。还用作橡胶硫化延缓剂和消毒防腐剂等。

用作环氧树脂固化的促进剂，也可作为防腐剂。可用来制备水杨酸甲酯、水杨酸乙酯等合成香料。染料工业用作制备直接染料及酸性染料等的原料。还可用作橡胶防焦剂、消毒剂等。

参考资料来源：百度百科-水杨酸

答：
一般采用柳树，杨树，冬青树皮或猕猴桃果实等来提，当然杨柳科的树叶中水杨酸含量也是很高的。

水杨酸(salicylic acid，SA)是一种植物界广泛存在的天然物质，它不仅具有重要的药理效应，而且对植物生长发育过程以及植物抗病性方面有着广泛的调控作用 。SA处理可以延缓多种果实的成熟衰老进程。通过测定果实成熟衰老过程中组织内源SA水平的变化，可以更好了解果实成熟衰老机理，为SA及其衍生物调控果实成熟衰老进程积累基础。但是植物组织中内源SA水平很低，一般在1．0～8．4p~g／g之间_4-一-，果实组织中含量则相对更低，因此如何更有效地提取组织中的SA，并配以更灵敏的检测方法，是研究SA对果实成熟衰老调控的重要内容。
现有的植物组织内源SA提取方法比较复杂，要经过提取、液液分配、蒸干等多个步骤，回收率较低，一般在34．0％～80．7％之间，而血液中SA的提取是通过乙醚或乙醚与石油醚混合物一步萃取法，较现有的植物组织中SA提取法更为简便。

1，提取方法：
取l0．0g叶片充分研磨后，置于50mL的离心管中， 加4．0mL 5％ 的三氯乙酸， 加水至20．0mL后再加入30．0mL乙醚，充分摇匀，浸提12h， 于l 000~g下离心5.0min，取出上部乙醚相，水相再经乙醚重复提取2次，合并乙醚相，真空旋转蒸干后，加入1．0mL 50％甲醇50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液将其溶解，置于Ep—
pendorf管中保存，即为游离态SA样品。水相加l8．5％的HCI至终浓度为3．2％，于80cI=水浴中加热1．0h，冷却后用乙醚提取3次，合并乙醚相，蒸干后加入1．0mL 50％ 甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液溶解，置于Eppendorf管中保存，即为结合态SA样品。样品经0，3 Ixm 的微孑L过滤器过滤后，用高效液相色谱(HPLC)进
行检测。

2，测定含量

1-2 主要仪器与试剂
主要仪器：Beckman高效液相色谱仪(带化学工作站)，岛津荧光检测器，Heidolp旋转蒸发仪(德国)。
SA标准品，上海五联化工厂生产；甲醇为色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司生产；其余所用试剂均为分析纯；水(二次蒸馏水，自制)。

HPLC检测条件
Cl8柱，7．3mm~20cm；流动相： 甲醇：乙酸缓冲液(pH3．2)=50：50；岛津荧光检测器(激发波长为310nm，发射波长为415nm)；流速为1．0mIMmin；进样量为201xL。
1．5 标准曲线的建立
用50％甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液配制浓度为l，0m g／mL的SA溶液，再稀释成0、0．25、0．5、l，0、2，01xg／mL的标准溶液，将不同浓度的标准溶液用HPLC测定，得到标准曲线。

具体参考文献：
题目：《猕猴桃果实中内源水杨酸的提取、测定及其在采后研究中的应用》猕猴桃果实中内源水杨酸的提取、测定及其在采后研究中的应用=Extraction and Determination of Endogenous Salicylic Acid from Kiwifruit and Its Application to Postharvest Research[刊，中]/张玉（浙江大学果实分子生理与生物技术实验室，杭州 310029），陈昆松，张上隆//中国食品学报.—2004，4（3）.—6～9
摘要：建立一种更有效的水杨酸（SA）提取、测定方法是了解SA对采后果实成熟衰老生理影响和调控机理的基础。本文采用乙醚一步萃取法提取猕猴桃果实组织中内源SA，用高效液相色谱法（荧光检测器）测定其含量。结果显示，本方法回收率为（96.4±3.0）%，显著高于其它已报道的方法，最低检测限为0.9ng／g·FW。SA的荧光峰面积与浓度在0～2.0μg／mL范围内呈线性关系，达到极显著水平（r＝0.9991**），该方法简便易行，样品提取时间比以往报道的方法节省一半，因此可用于成熟果实组织中的内源SA萃取和测定。图4表1参12。

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水杨酸(salicylic acid，SA)是一种植物界广泛存在的天然物质，它不仅具有重要的药理效应，而且对植物生长发育过程以及植物抗病性方面有着广泛的调控作用 。SA处理可以延缓多种果实的成熟衰老进程。通过测定果实成熟衰老过程中组织内源SA水平的变化，可以更好了解果实成熟衰老机理，为SA及其衍生物调控果实成熟衰老进程积累基础。但是植物组织中内源SA水平很低，一般在1．0～8．4p~g／g之间_4-一-，果实组织中含量则相对更低，因此如何更有效地提取组织中的SA，并配以更灵敏的检测方法，是研究SA对果实成熟衰老调控的重要内容。
现有的植物组织内源SA提取方法比较复杂，要经过提取、液液分配、蒸干等多个步骤，回收率较低，一般在34．0％～80．7％之间，而血液中SA的提取是通过乙醚或乙醚与石油醚混合物一步萃取法，较现有的植物组织中SA提取法更为简便。

1，提取方法：
取l0．0g叶片充分研磨后，置于50mL的离心管中， 加4．0mL 5％ 的三氯乙酸， 加水至20．0mL后再加入30．0mL乙醚，充分摇匀，浸提12h， 于l 000~g下离心5.0min，取出上部乙醚相，水相再经乙醚重复提取2次，合并乙醚相，真空旋转蒸干后，加入1．0mL 50％甲醇50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液将其溶解，置于Ep—
pendorf管中保存，即为游离态SA样品。水相加l8．5％的HCI至终浓度为3．2％，于80cI=水浴中加热1．0h，冷却后用乙醚提取3次，合并乙醚相，蒸干后加入1．0mL 50％ 甲醇+50％乙酸缓冲液(pH3．2)的混合液溶解，置于Eppendorf管中保存，即为结合态SA样品。样品经0，3 Ixm 的微孑L过滤器过滤后，用高效液相色谱(HPLC)进
行检测。

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恽盼屏风：[答案] (1)水杨酸是植物体产生的一种激素,激素是调节生命活动的信息(信号)分子. (2)分析图示可知,用不同浓度的水杨酸处理品系YTA,其幼苗叶片中蛋白质的含量均高于水杨酸浓度为0mol.L-1的对照组,由此说明水杨酸对品系YTA幼苗叶片中蛋白质...

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