聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别
DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。
聚丙烯酰氨(PAGE)凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离。电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视。
所以相同点就是样品都是带负电荷的,从负极向正极移动,移动的距离都和样品的分子量有关。而且这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时,可以考虑换用琼脂糖凝胶,因为该体系孔径大。相反,如果需要精确到各位数碱基的DNA电泳也可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统,因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA链分开。
不同点首先是样品不同。这个就不用多说了。其次是结果的观察方法不同。DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察;而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单。还有就是胶体系的差别,DNA电泳通常是一胶跑到底,而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。
电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。但是,区分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数,是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。以DNA分子为例,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的,所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。而且,DNA分子中核苷酸的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。
这在蛋白电泳中(特别是SDS-PAGE中)是一样的。在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了。
至于为什么核酸的横着跑,蛋白竖着跑,个人认为最大的问题是蛋白制胶的过程导致的。蛋白制胶由于使用了两种不同的凝胶系统,所以需要一个水平的分界面。这个分界面在配胶的过程中是依靠异丙醇在重力作用下的压力下形成的。所以,一并就竖着跑了~~
DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷.
聚丙烯酰氨(PAGE)凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离.电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷.蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白.蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小,电荷因素可以忽视.
所以相同点就是样品都是带负电荷的,从负极向正极移动,移动的距离都和样品的分子量有关.而且这两个电泳体系可以互相交换使用.进行大分子蛋白质电泳时,可以考虑换用琼脂糖凝胶,因为该体系孔径大.相反,如果需要精确到各位数碱基的DNA电泳也可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统,因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA链分开.
不同点首先是样品不同.这个就不用多说了.其次是结果的观察方法不同.DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察;而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单.还有就是胶体系的差别,DNA电泳通常是一胶跑到底,而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别.
电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷.但是,区分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数,是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了.以DNA分子为例,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的,所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的.而且,DNA分子中核苷酸的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义.这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的).
这在蛋白电泳中(特别是SDS-PAGE中)是一样的.在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了.
至于为什么核酸的横着跑,蛋白竖着跑,个人认为最大的问题是蛋白制胶的过程导致的.蛋白制胶由于使用了两种不同的凝胶系统,所以需要一个水平的分界面.这个分界面在配胶的过程中是依靠异丙醇在重力作用下的压力下形成的.所以,一并就竖着跑了~
聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别为:支持介质不同、用途不同、优势不同。
一、支持介质不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术
2、琼脂糖凝胶电泳:是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法
二、用途不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:用于分离蛋白质和寡核苷酸
2、琼脂糖凝胶电泳:用于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等
三、优势不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:有较高的分辨率
2、琼脂糖凝胶电泳:它制备容易,分离范围广
参考资料来源:
百度百科——聚丙烯酰胺凝胶电泳
百度百科——琼脂糖凝胶电泳
1、样品不同:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳跑样样品是蛋白质。
(2)琼脂糖凝胶电泳跑样样品是DNA。
2、结果的观察方法不同:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳中,蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单,可以直接肉眼观察。
(2)琼脂糖凝胶电泳中,DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察。
3、胶体系的差别:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳中,蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。
(2)琼脂糖凝胶电泳中,DNA电泳通常是一胶跑到底。
4、样品移动的本质不同:
(1)聚丙烯酰胺凝胶电泳中,在蛋白电泳中(特别是SDS-PAGE中)是一样的.在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了
(2)琼脂糖凝胶电泳中DNA分子,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的,所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。
而且,DNA分子中核苷酸的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。
扩展资料
聚丙烯酰胺凝胶电泳的作用:
SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构。
而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异。
SDS-PAGE一般采用的是不连续缓冲系统,与连续缓冲系统相比,能够有较高的分辨率。
浓缩胶的作用是有堆积作用,凝胶浓度较小,孔径较大,把较稀的样品加在浓缩胶上,经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选TRIS/HCl缓冲液,电极液选TRIS/甘氨酸。
电泳开始后,HCl解离成氯离子,甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷,因此一起向正极移动,其中氯离子最快,甘氨酸根离子最慢,蛋白居中。
电泳开始时氯离子泳动率最大,超过蛋白,因此在后面形成低电导区,而电场强度与低电导区成反比,因而产生较高的电场强度,使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动,形成一稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩成一中间层。
此鉴定方法中,蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量,而与所带电荷和分子形状无关。
参考资料来源:百度百科-聚丙烯酰胺凝胶电泳
百度百科-琼脂糖凝胶电泳
DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。
蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。
所以相同点就是样品都是带负电荷的,从负极向正极移动,移动的距离都和样品的分子量有关。而且这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时,可以考虑换用琼脂糖凝胶,因为该体系孔径大。相反,如果需要精确到各位数碱基的DNA电泳也可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统,因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA链分开。
不同点首先是样品不同。这个就不用多说了。其次是结果的观察方法不同。DNA电泳普遍使用EB做染料,在紫外灯下观察;而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色,还需要经过脱色步骤,不过观察起来比较简单。还有就是胶体系的差别,DNA电泳通常是一胶跑到底,而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。
电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。但是,区分这些条带直接可以用分子量而无需使用电荷数,是因为这些样品的电荷/分子量比都是恒定的了。以DNA分子为例,它在电泳中的移动是靠其骨架中磷酸所携带的负电荷来实现的,而这个磷酸分子又是每一个核苷酸中都有的,所以DNA分子所携带的负电荷数是由其核苷酸总数决定的。而且,DNA分子中核苷酸的组成动辄成百上千,在如此大的分子量面前,讨论单个核苷酸之间分子量的差别就显得毫无意义。这样,DNA分子中负电荷的量就可以用DNA的分子量来代替,反过来,DNA的分子量也就可以用DNA分子所携带的电荷来代替(一句话,DNA分子的电荷/分子量比是恒定的)。
这在蛋白电泳中(特别是SDS-PAGE中)是一样的。在SDS-PAGE中,SDS将蛋白质变性成直线分子并紧密包裹于其上,使得其所携带的电荷与蛋白分子量成了一定的比例,剩下的就和核酸电泳一样了。
因为蛋白电泳中有浓缩胶和分离胶的区分,为了使胶的分界线在一个起点上,不得不竖着跑电泳。核酸电泳是一个均匀相,就没有必要了。
分辨率最高的电泳
非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立,他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂(...
常规PAGE和SDS PAGE电泳有何异同?
SDS是一种阴离子去垢剂,能让寡聚体蛋白中不同的亚基分离,而不能使二硫键打开。如果想让二硫键打开,必须要用2-巯基乙醇或过氧酸来处理。原理:1、聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(以后简称单体)在水溶液中聚合而成的亲水性高聚物,是一种透明而不溶于水并有韧性的凝胶。2、制备凝胶时需要的原...
sds聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量是什么?
聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂N,N’—亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂作用下,聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶,并以此为支持物进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带,如果分离纯化...
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理是什么?
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质。在不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中,凝胶的制作是分层进行的,因此凝胶不仅有分子筛效应,还具有浓缩效应。和琼脂糖凝胶相比,聚丙烯酰胺凝胶难于制备和处理。它们的分离范...
解释聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理,最好清晰点
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂的作用下,聚合交联而成的含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。还要结合聚丙烯酰胺凝胶电泳三个不连续,即:凝胶孔径不同、缓冲液pH不同、缓冲液离子成分不同 和三个效应:浓缩效应、电荷效应、分子筛效应来一起说 ...
使SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有高分辨率的三个因素是什么
使SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳具有高分辨率的三个因素是:1、电荷效应;2、分子筛效应;3、浓缩效应。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂N,N’一亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(APS),N,N,N’,N’ 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶,并以此...
非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验步骤
1、PAGE胶电泳缓冲液配置1)丙烯酰胺单体贮液:14.55g丙烯酰胺加上0.45g N,N'-甲叉双丙烯酰胺,先用40mL双蒸水搅拌溶解,直到溶液变成透明,再用双蒸水稀至50mL,过滤。用棕色瓶4°C保存备用。2)浓缩胶缓冲液贮液(0.5mol\/L Tris-HCl,pH6.8):3.03gTris溶解在40mL双蒸水中,用4mol\/L...
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 实际用途有哪些?还有电泳的不对称性表现在哪些方...
8. 分离和浓缩用于产生抗体的抗原;9. 分离放射性标记的蛋白质;10. 显示小分子多肽。SDS-PAGE有效分离范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度,其孔径随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小,比率接近于1:20时,孔径达到最小值。分子量低于10kD的小分子肽类,即使用较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶的SDS-...
PAGE电泳是哪种电泳?
聚丙烯酰胺凝胶电泳。聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本信息:聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE,是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术,聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成,催化聚合的常用方法有两种,化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵为催化剂,以...
几种蛋白质凝胶电泳方法的区别和用途
3、聚丙烯酰胺凝胶电泳 :聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N,N’-甲叉双丙烯酰胺(简称Bis)在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE).应用范围广,可用于蛋白质、酶、核酸等生物大分子的分离、定性、定量及...
苗到康达:[答案] 聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率高 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法.对于分子量较大的样品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽...
二连浩特市17815682409: SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳?比较说明SDS - PAGE(SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳)和琼脂糖凝胶电泳的物质分离原理和特点? - ?
苗到康达:[答案] SDS-PAGE用来分离蛋白质的,而且是先将蛋白的高级结构变性成1级结构,之后根据蛋白质量大小分离的. 琼脂糖是分离DNA的,原理也是根据质量大小分离
二连浩特市17815682409: SDS电泳和琼脂糖电泳的区别 - ?
苗到康达: 你说的SDS电泳实际上是SDS-PAGE,SDS只是蛋白变性剂,而凝胶是聚丙烯酰胺.SDS-PAGE和琼脂糖凝胶电泳使用的是完全不同的凝胶材料.SDS-PAGE采用的是聚丙烯酰胺,它是靠化学反应形成的凝胶.而琼脂糖凝胶则是物理反应(加...
二连浩特市17815682409: 琼脂糖凝胶电泳分离DNA与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质原理方法上有什么异同? - ?
苗到康达:[答案] DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷. 蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷. 所以相同点就是...
二连浩特市17815682409: SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳??
苗到康达: SDS-PAGE用来分离蛋白质的,而且是先将蛋白的高级结构变性成1级结构,之后根据蛋白质量大小分离的. 琼脂糖是分离DNA的,原理也是根据质量大小分离
二连浩特市17815682409: 是否能用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行核酸分子的检测? - ?
苗到康达: 当然可以.检测核酸的凝胶主要有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳.二者区别在于琼脂糖胶分辨率低一些,用来检测区别较大的核酸分子.而聚丙烯酰胺电泳分辨率高,可区分几十个碱基的差异,所以被用来检测差异不大的核酸分子.
二连浩特市17815682409: 蛋白质分离鉴定电泳时哪些时候分子量小快哪些分子量大的快? - ?
苗到康达:[答案] SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳根据分子量大小分离蛋白质,分子量小的快 琼脂糖凝胶电泳根据硫酸根与某些蛋白质作用分离蛋白,有可能分子量大的快
二连浩特市17815682409: 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的上样缓冲液一样不? - ?
苗到康达: 不一样,两者有一部分成份是相同的,如指示剂溴酚蓝,和增加比重的蔗糖.对于SDS-PAGE的缓冲液,它还含有一定比例的SDS和强还原剂(巯基乙醇或者DTT),因为SDS-PAGE中蛋白与SDS结合变性是通过上样缓冲液反应完成的.
二连浩特市17815682409: 凝胶电泳和DGGE的区别? - ?
苗到康达: 变性梯度凝胶电泳:双链DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时,其迁移行为决定于其分子大小和电荷.不同长度的DNA 片段能够被区分开,但同样长度的DNA 片段在胶中的迁移行为一样,因此不能被区分.DGGE/TGGE 技术在一般的聚...
二连浩特市17815682409: 核酸的凝胶电泳类型是什么 - ?
苗到康达: 核酸的凝胶电泳类型, 根据凝胶的种类可分为琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳; 根据核酸的种类可分为DNA电泳和RNA电泳.