细胞凋亡实验中为什么要加抑制剂

诱导细胞凋亡为什么要加tnf~

诱导细胞凋亡要加tnf的原因：
增加促凋亡活性，加速培养细胞TNFα诱导的凋亡。
肿瘤坏死因子（TNF）是一类具有多种生物效应的细胞因子，它通过和细胞膜上的特异性的受体结合，实现促进细胞生长，分化，调亡及诱发炎症等生物学效应。TNF-α属于TNF家族，可以激活Caspase蛋白酶、JNK和转录因子NF-kB三条信号通路，实现其细胞毒性，抗病毒，免疫调节和细胞凋亡等生物学功能。

选择培养基的作用是让我们要培养的微生物生长，而抑制其他微生物的生长。根据我们所培养的微生物的种类不同，我们所用的抑制剂也不同。
如我们利用选择培养基培养金黄色葡萄球菌，可以在培养基中加入高浓度的食盐，这样，食盐就作为抑制剂，只充许金黄色葡萄球菌的生长，而其他的微生物则不能在此培养基上生长。

细胞凋亡和细胞增殖都是生命的基本现象，是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施。在胚胎发育阶段通过细胞凋亡清除多余的和已完成使命的细胞，保证了胚胎的正常发育；在成年阶段通过细胞凋亡清除衰老和病变的细胞，保证了机体的健康。和细胞增殖一样细胞凋亡也是受基因调控的精确过程。细胞凋亡受到严格调控，在正常细胞Caspase处于非活化的酶原状态，凋亡程序一旦开始，Caspase被活经随后发生凋亡蛋白酶的层叠级联反应，发生不可逆的凋亡——细胞调节细胞凋亡的举例如下。 迄今为止，人类已发现多种凋亡抑制分子，包括P53，CrmA,IAPs，FLIPs以及Bcl-2家族的凋亡抑制分子。
1)P53和CrmA是广谱凋亡抑制剂，体外研究结果表明P35以竞争性结合方式与靶分子形成稳定的具有空间位阻效应的复合体并且抑制Caspases活性，同时P53在位点DMQD！G被靶Caspases特异切割，切割后的P35与caspase的结合更强，CrmA（Cytokine response modfer A）是血清蛋白酶抑制剂，能够直接抑制多种蛋白酶的活性，但还未发现在哺乳动物中发现P35和CrmA的同源分子。
2)FLIPs(FLICE-imhibirory proterins）能抑制Fas/TNFR1介导的细胞凋亡。它有多种变异体，但其N-端功能前区（Prodomain）完全相同，C端长短不一。FLIPs通过DED功能区，与FADD和Caspase-8，10结合，拮抗它们之间的相互作用，从而抑制Caspase8，10募集到死亡受体复合体和它们的起始化。
3）凋亡抑制蛋白（IAPs,inhibitors of Apoptosisprotien）为一组具有抑制凋亡作用的蛋白质，首先是从杆状病毒基因组克隆到，发现能够抑制由病毒感染引起的宿主细胞死亡应答。其特性是有大约20氨基酸组成的功能区，这对IAPs抑制凋亡是必需要的，它们主要抑制Caspase3,-7，而不结合它的酶原，对Caspase则即可以结合活化的，又可结合酶原，进而抑制细胞凋亡。 这一家族有众多成员，如Mcl-1、NR-B、A1 、Bcl-w、Bcl-x、Bax、Bak、Bad、Bim等，它们分别既有抗凋亡作用，也有促凋亡的作用。多数成员间有两个结构同源区域，在介导成员之间的二聚体化过程中起重要作用。Bcl-2成员之间的二聚体化是成员之间功能实现或功能调节的重要形式。Bcl-2生理功能是阻遏细胞凋亡，延长细胞寿命，在一些白血病中Bcl-2呈过度表达。

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卫辉市15839784858： 诱导细胞凋亡为什么要加tnf - ？
诺袁醋酸： 1、必须细胞检测,能用能破坏细胞膜完整性固定剂穿透剂固定或穿膜.2、特殊细胞染色:消化或吹打,些细胞(神经元细胞)容易受损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非高,能反映真实结.实验解决:先低速离,吸取细胞培养板液体,留少许液体,加入适量PIAnnexin-V染色10min,漂浮细胞吸至离管,离洗涤两,用PBS漂洗贴壁细胞两,加胰酶消化细胞悬液移至另离管,离洗涤,再与漂浮细胞合并流式细胞仪检测.应用该降低晚期凋亡坏死比例,增加早期凋亡细胞比例.3、由于Annexin-V钙离依赖磷脂结合蛋白,钙离存情况与PS亲力才,消化细胞,建议般采用含EDTA消化液.4、必须设置阴性照补偿照(别单染).

卫辉市15839784858： 急!细胞凋亡的生理学意义? - ？
诺袁醋酸： 1、细胞凋亡和细胞增殖都是生命的基本现象,是维持体内细胞数量动态平衡的基本措施; 2、细胞凋亡为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡; 3、细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,在多细胞生物去除不需要的或异常的...

卫辉市15839784858： 细胞凋亡和细胞培养 - ？
诺袁醋酸： 不会.体外只会发生细胞贴壁和接触抑制从而停止分裂,但一般细胞不会分裂超过十代.有一部分细胞可以分裂10~50代,还有极少数细胞会分裂50代以上获得不死性,这样的细胞细胞核型已经改变,可以无线增值.

卫辉市15839784858： 简述细胞凋亡的形态学与生物化学改变 - ？
诺袁醋酸： 1.形态学变化 首先出现的是细胞体积缩小,连接消失,与周围的细胞脱离,然后是细胞质密度增加,线粒体膜电位消失,通透性改变,释放细胞色素C到胞浆,核质浓缩,核膜核仁破碎,DNA降解成为约180bp-200bp片段;胞膜有小泡状形成,...

卫辉市15839784858： 肿瘤坏死因子诱导凋亡为什么要加放线菌素D - ？
诺袁醋酸： 放线菌素D(Dactinomycin D)又称更生霉素,分子中含有一个苯氧环结构,通过它连接两个等位的环状肽链.此肽链可与DNA分子的脱氧鸟嘌呤发挥特异性相互作用,使dactinomycin D嵌入DNA双螺旋的小沟中,与DNA形成复合体,阻碍RNA多聚酶的功能,抑制RNA的合成,特别是mRNA的合成. 因而有放线菌素D诱导细胞,细胞内生物合成障碍,会引起细胞的一系列应激反应,与肿瘤坏死因子共同作用,更能有效诱导细胞凋亡.

卫辉市15839784858： 抑制剂IC50值的大小,主要反映的是那些性质? - ？
诺袁醋酸： IC50是指“反应”被抑制一半时抑制剂的浓度,这里的反应可以是酶催化反应,抗原抗体反应等.在凋亡方面,可以理解为一定浓度的某种药物诱导肿瘤细胞凋亡50%,该浓度称为50%抑制浓度,即凋亡细胞与全部细胞数之比等于50%时所对应的浓度,IC50值可以用来衡量药物诱导凋亡的能力,即诱导能力越强,该数值越低,当然也可以反向说明某种细胞对药物的耐受程度.

卫辉市15839784858： 用流式细胞仪检测细胞凋亡的试验中,为什么要 - ？
诺袁醋酸： 请问一下用流式细胞仪检测细胞凋亡的试验中,为什么要用PBS洗涤两次呢?用PBS洗涤的原理是什么呢? PBS是一种缓冲液,他的渗透压与一般细胞的相同,在做细胞试验或者活体组织实验中,一般就把PBS当做水来用,各种冲洗的过程什么的都是用它.这样不会改变细胞形态~

卫辉市15839784858： 细胞消化过度会对流式凋亡实验有影响吗 - ？
诺袁醋酸： 细胞消化过度会对流式凋亡实验有影响 因为是诱导凋亡的实验,细胞加药处理后,贴壁细胞会因为活力丧失而脱壁漂浮,而这部分细胞正是你需要的,所以加药处理完后要收集全部培养上清,少量PBS洗瓶内剩下的细胞,洗的PBS与之前收集的上清合并.胰酶消化.消化完毕用之前收集的培养基中止消化.离心后PBS再洗一遍.离心,弃上清,细胞沉淀中加入70% 4度预冷的乙醇(PBS配制),4度放置不少于1小时(有的文献说是不少于15分钟).之后离心去乙醇,PBS洗一遍后加入PI和DNAse,终浓度50 ug/ml,混匀,避光室温放置30 min后即可上流式细胞仪测定.

卫辉市15839784858： 求助诱导细胞凋亡,Annexin - ？
诺袁醋酸： 1、必须活细胞检测,不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜. 2、特殊细胞的染色方法:在消化或吹打时,有些细胞(如神经元细胞)很容易受到损伤,导致晚期凋亡或坏死比例非常高,不能反映真实结果.实验的解决方法:先...

卫辉市15839784858： 何为细胞凋亡?它与细胞坏死有什么区别 - ？
诺袁醋酸： 虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似,但它们的过程与表现却有很大差别.坏死(necrosis):坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程.表现为细胞 胀大,胞膜破裂,细胞内容物外溢,核变化较慢,DNA降解不充...