TUNEL法检测细胞凋亡实验原理和方法
作者&投稿：亢秦 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
TUNEL法，全称脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法，是细胞凋亡研究中的重要工具。它揭示了细胞凋亡过程中DNA断裂的复杂动态：首先，染色体DNA在内源性核酸水解酶的作用下，逐渐分解为50-300kb的大片段，接着，约30%的DNA会在钙离子和镁离子的协同下，于核小体间随机断裂，形成180-200bp的核小体DNA聚合体。
关键的标记环节在于，DNA双链断裂或单链缺口会暴露3’-OH末端。这时，TdT酶如一位精准的艺术家，用脱氧核糖核苷酸为这些末端绘制荧光或酶活性标记，从而使得凋亡细胞的检测变得可能。正常或增殖中的细胞由于极少DNA断裂，几乎不被标记，而TUNEL法的敏感性使其能在极低比例的凋亡细胞中显微可见。
TUNEL或缺口翻译法巧妙地结合了分子生物学和形态学，对凋亡细胞的原位染色提供了无与伦比的精确度。无论是石蜡包埋的组织切片，还是冰冻切片、培养细胞或从组织分离的细胞，都能通过这种方法定量检测细胞凋亡。其灵敏度远超常规的组织化学和生物化学方法，因此在细胞凋亡研究中广泛应用。
具体到过氧化物酶标记测定法，TdT酶将地高辛-11-dUTP掺入凋亡细胞DNA的3’-OH末端，形成标记，与抗地高辛抗体结合并产生颜色反应，可在显微镜下轻松定位。这种方法适用于各种固定样本，包括福尔马林固定后的石蜡包埋组织切片和冰冻切片，以及培养细胞和组织分离细胞。
实验步骤细致入微：预处理步骤针对不同样本类型设计，包括蛋白酶K水解去除组织蛋白，以及过氧化氢处理激活TdT酶。然后，TdT酶与标记反应液结合，进行标记反应，最后通过一系列洗涤和染色步骤，确保结果的准确性和清晰可见。
实验中，设立阳性与阴性对照至关重要，确保结果的可靠性。阳性对照使用部分降解的样本或激素处理的细胞，阴性对照则不添加TdT酶，严格遵循实验流程，确保数据的科学性。
TUNEL法作为细胞凋亡研究的基石，其原理与应用的深入理解，对于揭示生命的精密调控机制具有重要意义。每一个步骤的精心设计，都旨在揭示凋亡细胞的无声信号，为生命科学的研究打开了新的窗口。
底谦安维： 原理 在细胞凋亡的过程中,基因组DNA会断裂产生双链、低分子量的DNA片段和高分子量的DNA片段,这些DNA链的缺口可以利用没标记法来识别.试剂盒就是通过催化DNA断端,来标记缺口.酶底物显色后,可以光镜检查被染色的细胞. 方法 TUNEL 试剂盒
美姑县19724833485： TUNEL方法检测凋亡的原理是什么 - ？
底谦安维： 细胞凋亡中染色体DNA断裂,DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3'-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法一般称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL).
美姑县19724833485： tunnel 的凋亡染色 需要染核吗 - ？
底谦安维： tunnel 的凋亡染色并不是专门去染细胞核,但它可以使细胞核着色. TUNEL全名为terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling汉语为:脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法.原理:细胞凋亡中, 染色体DNA...
美姑县19724833485： 细胞凋亡的早期检测方法有哪些 - ？
底谦安维： 1、PS(磷脂酰丝氨酸)在胞外膜分布的检测 PS从胞膜内侧转移到外侧现象是在细胞凋亡的早期即可发生标志.AnnexinV是一种钙依赖性的磷脂结合蛋白,能专一性的结合暴露在胞膜外侧的PS,使用荧光素标记的AnnexinV 蛋白(如Annexin ...
美姑县19724833485： 细胞凋亡实验,用哪些方法测凋亡 - ？
底谦安维： 原理在细胞凋亡的过程中,基因组DNA会断裂产生双链、低分子量的DNA片段和高分子量的DNA片段,这些DNA链的缺口可以利用没标记法来识别.试剂盒就是通过催化DNA断端,来标记缺口.酶底物显色后,可以光镜检查被染色的细胞.方法TUNEL试剂盒
美姑县19724833485： 哪位秀友能否简单介绍一下TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL) - ？
底谦安维： TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TdT mediated-dUTP nick end labeling, TUNEL)是1992年Gavricli等首先报道,它实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色, 能准确地反映细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养细胞和从组织中分离的细胞凋亡测定,并可检测出极少量的凋 亡细胞,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用.
美姑县19724833485： 大鼠脑组织在4%多聚甲醛泡久了会有什么影响 - ？
底谦安维： 不能.简言之,TUNEL必须在细胞凋亡进行时做标记,你那早都过去时了......需要的酶都已经悲剧了......以下来自摆渡百科 细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA.细胞凋亡时...
美姑县19724833485： 什么是罗氏比色 - ？
底谦安维： 是罗氏比色法 罗氏比色法TUNEL系统,是一个经过改进的系统,可在单个细胞水平上,简便、准确和快速地原位检测凋亡的细胞.
美姑县19724833485： 请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么? - ？
底谦安维： 一、原理 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧.Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高...
美姑县19724833485： 什么是细胞凋亡?如何检测?表观遗传修饰在细胞凋亡中的作用? - ？
底谦安维：[答案] 细胞凋亡(apoptosis)是指细胞在一定的生理或病理条件下,受内在遗传机制的控制自动结束生命的过程. 关于检测方法,这是我在期末考试自己总结的,并不是从网络上贴过来的! 1,形态观察 坏死细胞:细胞膨胀,细胞质膜裂解,细胞器膨大,...
