组织培养的具体方法是什么

作者&投稿:熊刚 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
组织培养的方法和程序有哪些?~

1.外植体的建立
(1)外植体的选取 组织培养的外植体,一般分为两类:一类是带芽的外植体,如茎尖、侧芽、鳞芽、原球茎等,在组织培养过程中可直接诱导促进丛生芽的大量产生,其获得再生植株的成功率较高,变异性也较小,易于保持材料的优良性状。另一类主要为根、叶等营养器官及花药、花瓣、花托、胚珠、果实等生殖器官。这类外植体大都需要一个脱分化过程,经过愈伤组织阶段再分化出芽或产生胚状体然后形成再生植株。
在快速繁殖上,最常用的外植体是茎尖。通常切块在0.5厘米左右,太小,产生愈伤组织的能力较弱;太大,则在培养器皿中占空间太多。如果为培养无病毒苗而采用的外植体,通常仅取茎尖分生组织部分,其长度常在0.1毫米以下。
(2)外植体的消毒 由于外植体大都采用外界生长的植株,常带有各种微生物,如带入培养基,会迅速繁殖而形成污染,导致培养工作的失败。因此,外植体消毒是必不可少的工作,消毒既要杀灭外植体上的病菌,又不能伤害材料而影响其生长。由于材料不同,栽培条件、季节等不同,不同外植体消毒应选用各自合适的消毒剂种类、消毒剂浓度、消毒时间及处理程序。
理想的消毒剂应有较强的杀菌能力,并应具有易去除而不易伤害外植体的特点。常用的有次氯酸钠(0.5%~10%)和漂白粉(1%~10%)滤液,能分解产生具杀菌作用的氯气,并自行散发到空气中,只要浓度得当,一般不会伤害外植体。双氧水(3%~10%)也易分解而不易伤害外植体。酒精(70%)具较强的渗透力和杀菌作用,且易挥发,但会杀死组织细胞,所以消毒时间不宜过长。常用酒精先消毒几秒钟,有利其他消毒剂渗入材料发挥杀菌作用。
消毒方法和程序因材料不同而异。通常先用酒精(70%)浸数秒,取出后置于10%次氯酸钙饱和上清液浸10~20分钟或2%~10%次氯酸钠溶液浸6~15分钟,取出后用无菌水冲洗3次。
2.外植体的增殖
外植体的增殖是组培的关键阶段。接种后的培养容器在培养室中,一般每天光照16小时,1500~3000勒克斯,温度在25℃左右进行分化培养。在新梢等形成后为了扩大繁殖系数,还需要进行继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中,增殖培养基一般在分化培养基上加以改良,以利于增殖率的提高。增殖培养1个月左右后,可视情况进行再增殖,经一次又一次的继代,即可增加植株数量。
继代培养中由于外植体本身来自无菌环境,不需要消毒,操作较方便。但由于继代培养中外植体分化能力会逐渐下降,所以继代培养代数也不是无止境的。
3.根的诱导
继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根,必须转移到生根培养基上进行生根培养。生根培养基较多用1/2MS培养基,因为降低无机盐浓度有利于根分化。此外,生根培养基在激素种类和浓度上与增殖培养基有较大差异,主要如细胞分裂素、生长素等,一般细胞分裂素抑制生根而生长素促进生根。
一般在生根培养基中培养1个月左右即可获得健壮根系。此外,生产中也有用具根原基试管苗,即只在生根培养基中培养7~10天,诱导根原基或小于1毫米的幼根后即用于移植。由于其基部切口已愈合而形成根原基,不易感染,且栽后能很快生根,具较高的成活率。
4.组培苗的炼苗移栽
生根或形成根原基的试管苗从无菌,光、温、湿稳定环境中进入自然环境,从异养过渡到自养过程,必须经过一个驯化锻炼过程,即所谓炼苗。
一般移植前,先将培养容器打开盖子,于室内自然光照下放3天,然后取出苗,用自来水将根系上琼脂冲洗干净,再栽入已准备好的基质中。基质常用泥炭、珍珠岩、蛭石、砻糠灰等或适当加部分园土,使用前最好用高温或药物消毒。移栽前期要适当遮荫,加强水分管理,保持较高的空气湿度(相对湿度90%左右)。但注意基质不宜过湿,更不能积水,以防烂苗。此外,温度对成活率影响也很大,以15~25℃最适宜,夏季温度过高,水少小苗易萎蔫,水多又易腐烂,管理较困难,成活率下降。炼苗4~6周,新梢开始生长后,小苗即可转入正常管理。

要根据培养目的适当选取材料,选择原则:易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方
面要从健壮的植株上取材料,不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天,最好是中午或下午取
材料,决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织,有自身消
毒作用,这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒




从外界或室内选取的植物材料,
都不同程度地带有各种微生物。
这些污染源一旦带人培养基,
便会造成
培养基污染。因此,植物材料必须经严格的表面灭菌处理,再经无菌操作手续接到培养基上。



第一步,将采来的植物材料除去不用的部分,将需要的部分仔细洗干净,如用适当的刷子等刷洗。把材
料切割成适当大小,即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时,冲洗时间视材料
清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料,可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加
入洗衣粉清洗,然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物,除去脂质性的
物质,便于灭菌液的直接接触。当然,最理想的清洗物质是表面活性物质

吐温。



第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成,准备好消毒的烧杯、玻璃棒、
70%

精、消毒液、无菌水、手表等。用
70%
酒精浸
10

30s
。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用,
加之
70%
酒精穿透力强,也很易杀伤植物细胞,所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料,如果实、花
蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗,多层鳞片的休眠芽等等,以及主要取用内部的材料,则可只用
70%
酒精处
理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下,待酒精蒸发后再剥除外层,取用内部材料。



第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多,可根据情况选取
1

2
种使用见表。第四步是用无菌
水涮洗,涮洗要每次
3min
左右,视采用的消毒液种类,涮洗
3-l0
次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂
杀伤植物细胞的副作用注意:①酒精渗透性强,幼嫩材料易在酒精中失绿,所以浸泡时间要短,防止酒精
杀死植物细胞。②老熟材料,特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些,如种子可以浸泡
5
分钟。③升
汞的渗透力弱,一般浸泡
10
分钟左右,对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿,所
以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为
0.08

0.12%
的吐温
20

80
(一种湿润剂),可以
降低植物材料表面的张力,
达到更好的消毒效果。
灭菌剂

使用浓度
(%)
持续时间

min


去除的难易






次氯酸钙

9~10 5~30


很好



次氯酸钠

2 5~30


很好



氯化汞

0.1~1 5~8
较难

最好



抗菌素

4~50mg/L 30~60


较好



制备外植体




将已消毒的材料,用无菌刀、剪、镊等,在无菌的环境下,剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等,
叶片则不需剥皮。在操作中严禁用手触动材料。



接种和培养

(一)接种



在无菌坏境下,将切好的外植体立即接在培养基上,每瓶接种
1

2
个,以防止交叉污染。(二)封口



接种后,瓶、管用无菌药棉或盖封口,培养皿用无菌胶带封口。

(三)温度



培养基大多应保持在
25
℃左右,但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。




增殖



外植体的增殖是组培的关键阶段,
在新梢等形成后为了扩大繁殖系数,
需要继代培养。
把材料分株或切
段转入增殖培养基中,增殖培养基一般在分化培养基上加以改良,以利于增殖率的提高。增殖
1
个月左右
后,可视情况进行再增殖。



根的诱导



继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根,
必须转到生根培养基上进行生根培养。
1
个月后即可获得
键壮根系。



组培苗的炼苗移栽

试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境,必须进行炼苗。一般移植前,
先将培养容器打开,于室内自然光照下放
3
天,然后取出小苗,用自来水把根系上的营养基冲洗干净,再
栽入已准备好的基质中,基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫,加强水分管理,保持较高的空气湿度
(相对湿度
98
%左右),但基质不宜过湿,以防烂苗。




组织培养中的清洗、消毒灭菌技术

日期:
2010

4

1


来源:互联网

作者:植物组培网

点击:
2190


1

清洗

植物组织培养用的各种玻璃器皿,
特别是培养瓶和盛培养基的器皿,
一定要严格清洗,
以防油污、
重金属离子、酸、碱等有害物质残留在瓶内,影响培养物的生长。使用过的玻璃器皿应及时清洗,先将污
物如培养基、培养物倒掉,再浸入水中,然后洗涤。玻璃器皿的洗涤,可根据器皿的污染程度和性质,采
用不同的方法,通常有碱洗法和酸洗法。凡有微生物污染的器皿,必须先进行高压消毒和煮沸,以杀死菌
体,否则会产生孢子飞扬,污染环境,给组织培养带来严重困难。器皿洗净后,应烘干或晾干,放在规定
的地方,便于取用。



常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即:物理方法如干热
(
烘烧和灼烧
)
、湿热
(
常压或高压蒸

)
、射线处理
(
紫外线、超声波、微波
)
、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施;化学方法是使用升汞、甲
醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要
根据工作中的不同材料不同目的适当选用湿热灭菌(培养基)培养基在制备后的
24h
内完成灭菌工序。高
压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内,其中的蒸气不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅
内温度也随之增加。在
o

1MPa
的压力下,锅内温度达
121
℃。在此蒸气温度下,可以很快杀死各种细
菌及其高度耐热的芽孢。注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。高压灭菌放气有
几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底。常用方法是:关闭放气阀,
通电后,待压力上升到
O

05MPa
时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀。三
次放气后,关阀再通电,压力表上升达
0

1-0

15Mpa
时,维持
15-20min


对高压灭菌后不变质的
物品,如无菌水、栽培介质、接种用具,可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间,
既要保压彻底,又要防止培养基中的成分变质或效力降低,不能随意延长时间。对于一些布制品,如实验
服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好,高压灭菌
20-30min
。高压灭菌前后的培
养基,其
pH
值下降
0.2-0.3
单位。高压后培养基
pH
值的变化方向和幅度取决于多种因素。在高压灭菌
前用碱调高
pH
值至预定值的则相反。培养基中成分单一时和培养基中含有高或较高浓度物质时,高压灭
菌后的
pH
值变化幅度较大,甚至可大于
2

pH
值单位。环境
pH
值的变化大于
0.5
单位就有可能产生
明显的生理影响。
高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖,
从而改变培养基的渗透压。

8%-20%
蔗糖范围内,高压灭菌后的培养基约升高
0

43
倍。培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解,可使
15%-25%
的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于
5.5
,其水解量更多,培养基中添加
0.1%
活性炭
时,高压下蔗糖水解大大增强,添加
1%
活性炭,蔗糖水解率可达
5%




灼烧灭菌(用于无菌操作的器械



在无菌操作时,把镊子、剪子、解剖刀等浸入
95%
的酒精中,使
用之前取出在酒精灯火焰卜灼烧火菌。冷却后,立即使用。操作中可采用
250

500ml
的广口瓶,放入
95%
的酒精,以便插入工具。




干热灭菌(玻璃器皿及耐热用具)干热灭菌是利用烘箱加热到
160-180~C
的温度来杀死微生物。由
于在干热条件下,
细菌的营养细胞的抗热性大为提高,
接近芽抱的抗热水平,
通常采用
170
℃持续
90min
来灭菌。干热灭菌的物品要预先洗净并干燥,工具等要妥为包扎,以免灭菌后取用时重新污染。包扎可用
耐高温的塑料。灭菌时应渐进升温,达到顶定温度后记录时间。烘箱内放置的物品的数量不宜过多,以免
妨碍热对流和穿透,到指定时间断电后,待充分冷凉,才能打开烘箱,以免因骤冷而使器皿破裂。干热灭
菌能源消耗太大,浪费时间。




过滤灭菌(不耐热的物质

)一些生长调节剂,如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的,
不能用高压灭菌处理,
通常采用过滤灭菌方法。
可用无菌的孔径
0.20-0.45um
的硝酸纤维素膜过滤菌类,
当溶液通过滤膜后,细菌的细胞和真菌的孢子等因大于滤膜直径而被阻,在需要过滤灭菌的液体量大时,
常使用抽滤装置;液量小时,可用注射器。使用前对其高压灭菌,将滤膜装在注射器的靠针管处,将待过
滤的液体装入注射器,推压注射器活塞杆,溶液压出滤膜,从针管压出的溶液就是无菌溶液。




紫外线和熏蒸灭菌(空间)
•(1)
紫外线灭菌

在接种室、超净台上或接种箱里用紫外灯灭菌。紫外线灭
菌是利用辐射因子灭菌,细菌吸收紫外线后,蛋白质和核酸发生结构变化,引起细菌的染色体变异,造成
死亡。紫外线的波长为
200

300nm
,其中以
260nm
的杀菌能力最强,但是由于紫外线的穿透物质的
能力很弱,所以只适于空气和物体表面的灭菌,而且要求距照射物以不超过
1.2m
为宜。



(2)
熏蒸灭菌

用加热焚烧、
氧化等方法,
使化学药剂变为气体状态扩散到空气中,
以杀死空气和物体表
面的微生物。这种方法简便,只需要把消毒的空间关闭紧密即可。常用熏蒸剂是甲醛,熏蒸时,房间关闭
紧密,按
5

8ml

m3
用量,将甲醛置于广口容器中,加
5g/m3
高锰酸钾氧化挥发。熏蒸时,房间可预
先喷湿以加强效果。冰醋酸也可进行加热熏蒸,但效果不如甲醛。化学消毒剂的种类很多,它们使微生物
的蛋白质变性,或竞争其酶系统,或降低其表面张力,增加菌体细胞浆膜的通透性,使细胞破裂或溶解。
一般说来,温度越高,作用时间越长,杀菌效果越好。另外,由于消毒剂必须溶解于水才能发挥作用,所
以要制成水溶状态,如升汞与高锰酸钾。还有消毒剂的浓度一般是浓度越大,杀菌能力越强,但石炭酸和
酒精例外

一、培养基配制   配制培养基有两种方法可以选择,一是购买培养基中所有化学药品,按照需要自己配制;二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂,如MS、B5等。   自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。就目前国内的情况看,大部分还是自己配制。为了方便起见,现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要过程。   1.配制几种母液   1.配制MS大量元素母液   一般将大量元素分别配制成100倍的母液,使用时再分别稀释100倍。   分别称取   NH4NO3 165g KH2PO4 17g   KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g   MgSO4·7H2O 37g   各自配成1L的母液。倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。   2.配制MS微量元素母液   一般将微量元素配制成100倍母液。   依次称取   KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g   H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g   MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g   ZnSO4·7H2O 0.86g   配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。   CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于称取量很小,如果天平精确度没有达到万分之一,可先配成调整液。   分别称取   CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g   各自配成100ml的调整液,然后取5ml就还有0.0025g的量。   3.配制MS有机母液   一般配制成100倍MS有机母液。   依次称取   肌醇 10g 盐酸硫胺素(VB1) 0.01g   烟酸 0.05g 甘氨酸 0.2g   盐酸吡哆醇(VB6) 0.05g   配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。   4.配制MS铁盐母液   一般配制成100倍MS铁盐母液。   依次称取   EDTA二钠3.73g FeSO4·7H2O2.78g   配成1L母液,倒入1L试剂瓶中,存放于冰箱中。   所以MS母液有5种大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐母液,共8种母液。   激素母液的配制   各种生长素和细胞分裂素要单独配制,不能混合在一起,生长素类一般要先用少量95%的酒精或1当量的NaOH溶解,细胞分裂素一般要先用1当量的盐酸溶解,然后再加蒸馏水定容。一般取100mg配成100ml母液。   2.配制培养基   以配置1L MS培养基为例,按顺序进行如下操作:   1.先在烧杯中放入一些蒸馏水。   2.分别取上面八种母液10ml倒入。   3.一般称取30g蔗糖倒入,搅拌溶解。   4.加蒸馏水用量筒定溶至1L。   5.按设计好的方案添加各种激素,由于激素的用量很小,而且激素对组培植物的生长至关重要。所以有条件的话最好用微量可调移液器吸取,减少误差。   6.用精密试纸或酸度计调整PH至5.7-5.8。(有条件的话使用酸度计,比较精确) 可配1当量的HCL和1当量的NaOH用来调溶液PH值。   1当量HCL配制:用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。   1当量NaOH配制:称取NaOH 4g 配成100ml溶液。   7.称取5g左右琼脂粉(质量好的琼脂粉),倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热至沸腾,直到琼脂粉熔化。   8.稍微冷却后,分装入培养容器中。无盖的培养容器要用封口膜或牛皮纸封口,用橡皮筋或绳子扎紧。   9.放入消毒灭菌锅灭菌,灭菌20分钟左右。   10.灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固。 二、灭菌   灭菌是组织培养重要的工作之一。初学者要清楚有菌和无菌的范畴。有菌的范畴是:凡是暴露在空气中的物体,接触自然水源的物体,至少它的表面都是有菌的。依此观点,无菌室等未处理的地方、超净台的表面、简单煮沸的培养基、我们使用的刀、剪在未处理之前、我们身体的整个外表及与外界相连的内表,如整个消化道、呼吸道,即我们呼出的气体、培养容器无论洗得多干净等等都是有菌的。   这里所指的菌,包括细菌、真菌、放线菌、藻类及其他微生物。菌的特点是:极小,肉眼看不见。无处不在,无时不有,无孔不入。在自然条件下忍耐力强,生活条件要求简单,繁殖力极强,条件适宜时便可大量滋生。   无菌的范畴是:经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体,经其他物理或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的),高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部,强酸强碱,化学元素灭菌剂等表面和内部都是无菌的。从以上可以看出:在地球表面无菌世界要比有菌世界小的多。   灭菌是指用物理或化学的方法,杀死物体表面和孔隙内的一切微生物或生物体,即把所有生命的物质全部杀死。与此相关的一个概念是消毒,它指杀死、消除或充分抑制部分微生物,使之不再发生危害作用,显然经过消毒,许多细菌芽孢、霉菌厚垣孢子等不会完全杀死,即由于在消毒后的环境里和物品上还有活着的微生物,所以通过严格灭菌的操作空间(接种、超净台等)和使用的器皿,以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物。在这样的条件下进行的操作,就叫做无菌操作。   植物组织培养对无菌条件的要求是非常严格的,甚至超过微生物的培养要求,这是因为培养基含有丰富的营养,稍不小心就引起杂菌污染。要达到彻底灭菌的目的,必须根据不同的对象采取不同的切实有效的方法灭菌,才能保证培养时不受杂菌的影响,使试管苗能正常生长。   常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即:物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施;化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。   1.培养基用湿热灭菌   培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。   注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底。高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底。常用方法是:关闭放气阀,通电后,待压力上升到0.05MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀。   关阀再通电后,压力表上升达到0.1MPa时,开始计时,维持压力0.1-0.15MPa,20分钟。   按容器大小不同,保压时间有所不同,见表。该表所列数字是彻底灭菌很保险的数字,如果容器体积较大,但是放置的数量很少,也可以减少时间。

植物用固体培养基(含五大营养物质),动物则为液体…

放养

组织培养是应用无菌操作技术,培养植物的体外器官、组织或细胞,使其在人工控制的条件下进行生长和发育,即分离植物体的一部分,如茎尖、芽尖、根尖、胚芽、叶片、鳞片等,接种在人工配置的培养基上进行培养,利用植物细胞的再生能力,在无菌的适宜条件下,长出不定芽和不定根,使之重新形成一个完整的植株。是一种先进的植物繁殖技术。




组织培养的具体方法是什么
一、培养基配制 配制培养基有两种方法可以选择,一是购买培养基中所有化学药品,按照需要自己配制;二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂,如MS、B5等。 自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。就目前国内的情况看,大部分还是自己配制。为了方便起见,现...

鸢尾进行组织培养的方法是怎样的?
鸢尾组织培养(以下简称组培)的方法及步骤如下:(1)接种 每年春天当鸢尾开花时,采集鸢尾幼嫩的花序作为组培接种材料,也可在秋天用鸢尾新长出的小芽接种。在超净工作台上剥去外面套叠的叶片或苞片,用75%的酒精消毒30秒,再用0.1%的氯化汞消毒2~3分钟,最后用无菌水冲洗3~4分钟,将有节的部分...

植物组织培养一般方法?
植物组织培养的一般方法包括四个主要阶段:第一阶段,建立无菌操作体系。这一阶段需要对植物材料(外植体)和培养基进行彻底的消毒处理,以确保无微生物污染。通过这种处理,可以获得无菌的愈伤组织或器官。第二阶段,细胞增殖和分化。在这个阶段,愈伤组织会继续分化,产生新的植物细胞或组织。这些细胞或组织...

组织培养怎么做,求步骤,求方法
用不同的方法,通常有碱洗法和酸洗法。凡有微生物污染的器皿,必须先进行高压消毒和煮沸,以杀死菌体,否则会产生孢子飞扬,污染环境,给组织培养带来严重困难。器皿洗净后,应烘干或晾干,放在规定的地方,便于取用。常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即:物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射...

植物组培是通过哪些方法获得的?
用植物各部分组织,如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株,也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养,愈伤组织再经过再分化形成再生植物。不过这种组织没有发生分化,只是一团薄壁细胞,叫做愈伤组织。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下,愈伤组织便开始分化。

植物组织培养植物组织的培养
非试管微组织快繁技术是一种经济、简便的植物繁殖方法。它利用带一叶一芽的外植体,放置在普通沙子培养基上进行培养。这种培养方法能够利用植物腋芽自然倍增,快速达到繁殖目的。一般情况下,植物在7-15天内就能长出根系。非试管微组织快繁技术投资低,操作环节少,适合于大规模快速繁殖。相比之下,试管...

组织培养的分为哪四个阶段?
在这种情况下可以用切段法,把茎分切成许多段,使每段带有一枚叶片,即一个侧芽,再接种在培养基上,使侧芽萌发、生长、伸长。如此继代培养,加速繁殖。这种做法实际上是在试管内进行微型扦插繁殖。在国内马铃薯和葡萄的快速繁殖(组织培养)就是采用这种方法。在花卉的组织培养快速繁殖中,上述两种方法...

植物组织培养一般方法?
(1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官。(2)进行增殖,不断分化产生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的。(3)将植株转移进行生根培养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦插生根。(4)试管苗过渡,即...

谁能讲讲植物组织培养的具体步骤
植物组织培养步骤 一、培养材料的采集 组织培养所用的材料非常广泛,可采取根、睫、叶、花、芽和种子的子叶,有时也利用花粉粒和花药,其中根尖不易灭菌,一般很少采用。对于木本花卉来说,阔叶树可在一、二年生的枝条上采集,针叶树种多采种子内的子叶或胚轴,草本植物多采集睫尖。在快速繁殖中,最...

什么叫扦插、嫁接、压条、组织培养?
扦插是从植物上截取茎插入土中,使之长成新个体。嫁接是把一种植物的芽或茎接到另一种植物上,两种植物品种相同或相近,品质不同。压条是把植物体长枝末端压入土内,使之长成新个体。组织培养是取植物体某以组织,放入带有营养液的器皿中培养,长成新个体后取出,根埋入土中。(这些不是概捻)...

龙泉驿区17348208849: 组织培养方法(组织培养方法) - 搜狗百科
蛮明安利: 准备无菌培养基,培养基里要有无机盐,水,糖类,生长素,细胞分裂素,95%的氧气和5%的二氧化碳 1.把植物的茎尖细胞放到培养基里 2经过脱分化到再分化,到再分化时就要放到阳光充足处,然后就让这棵小树苗沐浴在杰科的阳光下慢慢成长了. 唉~~~~甘都唔记得.............

龙泉驿区17348208849: 设计一种植物组织培养的方法一种植物组织培养的方法,越详细越好.分数另给,3Q -
蛮明安利:[答案] 一、培养材料的采集 组织培养所用的材料非常广泛,可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶,有时也利用花粉粒和花药,其中根尖不易灭菌,一般很少采用. 对于木本花卉来说,阔叶树可在一、二年生的枝条上采集,针叶树种多采种子内的子叶或...

龙泉驿区17348208849: 植物组织培养类型有哪些呢? -
蛮明安利:[答案] (一)按外植体的来源分 外植体:是指在植物组织培养过程中,从植物母体上取来,用于离体培养的初始材料. (1)植株培养 是指对具有完整植株形态的幼苗或较大的植株进行离体培养的方法. (2)胚胎培养 是指对植物成熟或未成熟胚进行离体培...

龙泉驿区17348208849: 组织和培养班集体的要求与方法是什么? -
蛮明安利:[答案] 1、确立目标; 2、建立班委会; 3、培养正确的舆论和良好的作用; 4、组织开展班级活动.

龙泉驿区17348208849: 植物细胞和组织培养方法有哪几种 -
蛮明安利: 固体培养和液体培养.植物组织培养包括2个过程,脱分化和再分化.1.外植体(被培养的组织块--叶片碎片、茎尖、幼胚等或细胞--去壁的叶肉细胞)细胞恢复分裂,形成大量的细胞--愈伤.这个过程是脱分化.由于是已经成熟的细胞脱离了成熟细胞的状态,回到类似胚胎阶段的状态,故称脱分化.2.愈伤组织的细胞经过诱导,分化形成根、茎、叶等器官甚至形成类似种子中的胚一样的结构--胚状体(体胚),这个过程就是再分化.

龙泉驿区17348208849: 谁能讲讲植物组织培养的具体步骤
蛮明安利:哪个部分都可以,根块茎部大概比较方便 选用液态培养基 要经常更换培养基 注意消毒,杀菌

龙泉驿区17348208849: 龙胆花组织培养增殖的方法是什么?
蛮明安利: 用于增殖的个体少时,可以把新芽的每一个节分 割开来置床.增殖的培养基是用MS基本式添加有BA 2. 0毫升/ 升,NAA 0.02毫升/升.在这种培养基的继续培养中,由...

龙泉驿区17348208849: 草莓繁殖的方法
蛮明安利: 草莓繁殖有四种方法:匍匐茎繁殖,新茎分株繁殖、组织培养繁殖及种子繁殖.1、匍匐茎繁殖法匍匐茎繁殖方法是利用草莓具有发生较多匍匐茎、并在匍匐茎偶数节上可...

龙泉驿区17348208849: 什么是组织培养 -
蛮明安利: 组织培养是应用无菌操作技术,培养植物的体外器官、组织或细胞,使其在人工控制的条件下进行生长和发育,即分离植物体的一部分,如茎尖、芽尖、根尖、胚芽、叶片、鳞片等,接种在人工配置的培养基上进行培养,利用植物细胞的再生能力,在无菌的适宜条件下,长出不定芽和不定根,使之重新形成一个完整的植株.是一种先进的植物繁殖技术.

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