如何从蛋白溶解液中提纯总蛋白
淀粉可以用盐析,向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。
蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分。机体所有重要的组成部分都需要有蛋白质的参与。一般说,蛋白质约占人体全部质量的18%,最重要的还是其与生命现象有关。
蛋白质(protein)是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸(Amino acid)按不同比例组合而成的,并在体内不断进行代谢与更新。
细胞破碎后,用缓冲液提取蛋白质,用什么方法能得到蛋
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤:
(一)材料的预处理及细胞破碎
分离提纯某一种蛋白质时,首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态,不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有:
1. 机械破碎法
这种方法是利用机械力的剪切作用,使细胞破碎。常用设备有,高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。
2. 渗透破碎法
这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。
3. 反复冻融法
生物组织经冻结后,细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便,但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。
4. 超声波法
使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。
5. 酶法
如用溶菌酶破坏微生物细胞等。
(二) 蛋白质的抽提
通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提,抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂(十二烷基磺酸钠、tritonX-100等),使膜结构破坏,利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中,应注意温度,避免剧烈搅拌等,以防止蛋白质的变性。
(三)蛋白质粗制品的获得
选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法:
1. 等电点沉淀法
不同蛋白质的等电点不同,可用等电点沉淀法使它们相互分离。
2. 盐析法
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。
3. 有机溶剂沉淀法
中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来沉淀蛋白质。此外,有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层,促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性,使用该法时,要注意在低温下操作,选择合适的有机溶剂浓度。
(四)样品的进一步分离纯化
用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质,须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有:凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
用BCA行?PBS行?
淀粉酶抑制剂的提取方法
大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中,因些,可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。 (一)水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的...
从牛奶中提取酪蛋白实验中为什么调整溶液的PH可将酪蛋白沉淀出来
因为调整ph值时,蛋白质的溶解度降低,蛋白质被析出。譬如,在饱和蛋白质溶液中加入稀硝酸时,就会出现蛋白质沉淀。值得一提的是,析出的蛋白质没有变性,即结构没被破坏,蛋白质依然保持活性。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的ph调到4.7时最后酪蛋白沉到最下面,最上边是脂肪可以用盐析法,加...
高中化学: 盐析蛋白质怎么溶解?
盐析 向蛋白质溶液中假如高浓度的中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出的现象,叫做盐析.原理:破坏了蛋白质在水中存在的两个因素(水化层和电荷),从而使蛋白质沉淀.中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;盐...
大豆分离蛋白的提取加水量对整个工艺有何影响?
用水浸提大豆蛋白时,加水量越多蛋白质的提取率就越高。但加水过多,酸沉时乳清液中溶解的球蛋白量增加,蛋白的损失量也就增高,成品的得率反而下降;若加水量过少,大豆蛋白的溶出率大大下降,成品的得率也跟着减少。实践证明,用水浸提大豆蛋白时,脱脂豆粕与水的比例1∶10~1∶12最适合大豆分离...
在制备酪蛋白过程中,在第一步中用缓冲液洗涤沉淀与用蒸馏水洗涤沉淀提取...
不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同,所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。3. 有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来...
从牛奶中提取酪蛋白实验中为什么调整溶液的PH可将酪蛋白沉淀出来
除利用等电点溶解度低原理牛乳PH调4.7酪蛋白沉淀除外提取酪蛋白 问题补充:我要提取牛奶酪蛋白 今图书馆查结合前知识发现用盐析加重金属离、机酸、机溶剂等都使蛋白质沉淀蛋白质沉淀离10钟(3000r\/min)水洗两离10钟(3000r\/min)加入乙醇搅拌悬浊液转移至布氏漏斗抽滤用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2用...
...加入(NH4)2SO4浓溶液,可使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出...
(1)硫酸铵能使蛋白质发生盐析,盐析是可逆的,加水沉淀会溶解,故答案为:盐析;溶解;(2)硫酸铜是重金属盐,重金属盐能使蛋白质发生变性,变性是不可逆的,故答案为:变性;不可逆.
求分离,纯化,鉴定γ球蛋白的具体方法(包括原理,步骤,预期结果,注意事项...
小心倾去含有清蛋白的上清液,重复洗涤一次,于沉淀中加入0.0175mol\/L磷酸盐缓冲液(pH6.3)0.5~1.Oml使之溶解。此液即为粗提的γ-球蛋白溶液。 (2)脱盐――凝胶柱层析 ①装柱 洗净的层析柱保持垂直位置,关闭出口,柱内留下约2.0ml洗脱液。一次性将疑胶从塑料接口加入层析柱内,打开柱底部出口,调节流速0.3ml\/...
如何提高蛋白胨理化指标?
蛋白胨检验规程 1、理化指标 pH测定:称取2.0g的干粉蛋白胨置于100mL的蒸馏水或去离子水中,加热完全溶解制成2%的溶液,测定其pH值,范围应在pH5.5~7.5;可溶性:称取2g、10g的干粉蛋白胨,加入到100mL蒸馏水或去离子水中配制成2%、10 的溶液,溶液应澄清透明,无沉淀,颜色判断分无色、微黄...
趋化实验时肝脏匀浆液如何去除细胞
反正是可以和蛋白质形成不稳定络合物的试剂或是可以修饰蛋白质残基的试剂),可以防止蛋白质在接下去的实验操作中遭到破坏.析出剂(主要是无机盐类,如氯化铵等)可以让已经溶解的蛋白质析出加以提纯.缓冲剂(主要是弱酸及其盐,如NaHCO3\/Na2CO3等)可以维持溶液的酸碱度.这些是无论提取从什么原料中什么蛋白质...
以鱼滋补: 蛋白提取试剂盒分离亚细胞器后,怎么验证蛋白纯度1.前处理把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来,保持原来的天然状态,并不丢失生物活性.常用的方法:匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等.超声波破碎法:当声波...
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以鱼滋补: 分离纯化蛋白质的原理与方法──凝胶色谱法(分子筛效应)凝胶是一些由多糖类化合物构成的多孔球体,当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子质量较小的蛋白质直径小于凝胶网孔,由于静电吸附和扩散作用容易进入凝胶内部的...
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以鱼滋补: 盐析和渗析
安庆市18369457718: 分离和提纯蛋白质的方法 - ?
以鱼滋补: 1. 前处理把蛋白质从原来的组织或溶解状态释放出来,保持原来的天然状态,并不丢 失生物活性.常用的方法:匀浆器破碎、超生波破碎、纤维素酶处理以及溶菌酶等.超声波来破碎法:当声波达到一定频率时,使液体产生空穴效应使细胞...
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安庆市18369457718: 有哪些沉淀方法可以纯化蛋白质?多写几种 - ?
以鱼滋补: 1、等电点沉淀法.蛋白在其等电点位置溶解度最低,因而易于沉淀出来. 2、盐析法.根据蛋白在不同浓度的盐溶液中溶解度不同,进行蛋白分离纯化. 3、有机溶剂沉淀法.如乙醇、丙酮能使大多数球状蛋白在水溶液中的溶解度降低,使得蛋白从溶液中沉淀出来.
安庆市18369457718: 蛋白质分离纯化主要方法??
以鱼滋补: 蛋白质分离纯化常用方法有: 1、沉淀, 2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等. 3、透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法. 4、层析: a.离子交换层析,利用蛋白质的两性游离性质,在某一特定PH时,各蛋白质的电荷量及性质不同,故可以通过离子交换层析得以分离.如阴离子交换层析,含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来. b.分子筛,又称凝胶过滤.小分子蛋白质进入孔内,滞留时间长,大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出. 5、超速离心:既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量.不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开.