研磨、离心时为何可以不用冰浴和低温
因为TBA与MDA的显色反应需要酸性和高温的条件，这样才能532nm处有最大光吸收。反应式如下：
蛋白质提取方法-------列举10种方法一、植物组织蛋白质提取方法(summer)1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入)，准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，样品制备完成。蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl(PH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！二、植物组织蛋白质提取方法(summer)三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇)，摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时)，然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准)，可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml)，使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！三、组织：肠黏膜(newinbio)目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达应用TRIPURE提取蛋白质步骤：含蛋白质上清液中加入异丙醇：(1.5ml每1mlTRIPURE用量)倒转混匀，置室温10min离心：12000g，10min，4度，弃上清加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：(2ml每1mlTRIPURE用量)振荡，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次沉淀中加入100％乙醇2ml充分振荡混匀，置室温20min离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀离心：10000g，10min，4度取上清-20度保存(或可直接用于WESTERNBLOT)存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2XBUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。四、lysissolution:(yog)Proteinextractionbuffer(Camiolobuffer):100ml=(0.075MPotassiumAcetate)0.736g(0.3M)NaCl1.753g(0.1M)L-argininebasicsalt1.742g(0.01M)EDTA-HCl0.292g(0.25%)TritonX-100250.ulupto100mlwithdH20.pH7.4.Then0.2umfilter.1.Freezetissueinliquidnitrogen.2.RinseinPBSthenmince.3.Add1mlCamioloextractionbufferper100mgoftissue.4.Homogenizefor1minuteat4\\'C.5.Spinat3,000.rpm/15minutes/4\\'C.6.Removesupernatantandsaveinanothertube.7.Ifnecessary,dializethesupernatantagainstPBSwith50mM/LTris-HClpH7.4.五、植物材料：水稻苗，叶鞘，根(ynibcas)1、200毫克样品置于冰上磨碎2、加lysisbuffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清3、重复离心5minlysisbuffer：ureanp-40ampholine2-mepvp-40六、蛋白质样品制备(sigma)秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等(1986)的方法进行。100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石英砂，用液氮研磨成粉，加入1.5ml10%三氯乙酸(丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇)，混匀，-20℃沉淀1小时，4℃，15000r/min离心15min，弃上清，沉淀复溶于1.5ml冷丙酮(含10mMβ-巯基乙醇)，再于-20℃沉淀1小时，同上离心弃上清，(有必要再用80％丙酮(含10mMβ-巯基乙醇所得沉淀低温冷冻真空抽干。按每mg干粉加入20μl(可调)UKS液[9.5M尿素，5mM碳酸钾，1.25%SDS，0.5%DTT(二硫苏糖醇)，2%Ampholine(AmershamPharmaciaBiotechInc，pH3.5-10)，6%TritonX-100]，37℃温育30min，期间搅动几次，28度(温度低，高浓度的尿素会让溶液结冰)16000r/min离心15min，离心力越大时间长一点越好！上清即可上样电泳。或者-70度保存七、植物根中蛋白质的抽取(phenol)(1)sample,液氮研磨(2)装1.5mlcentrifuge用tube(3)加1MKH2PO4+K2HPO4700ul(4)12000rpm,4度,10-15minite(5)取上层液，蛋白质就在里面八、SDSextractionfollowedbyacetoneprecipitation–simpleextractionprotocolthatdoesnotrequirephenol.Recommendedstartprotocolforwholetissueextractions.(hgp)1.Grind1goffreshtissuetoapowderwithliquidnitrogeninamortarandpestle.2.Add5mLofextractionmedia(0.175MTris-HCl,pH8.8,5%SDS,15%glycerol,0.3MDTT)directlytomortarandcontinuegrindingforanadditional30sec.3.Filterhomogenatethroughtwolayersofmiraclothintoa50mLFalcontubeatroomtemperature.4.Immediatelyadd4volumesoficecold100%acetonetofilteredhomogenate,mixbyvortexingandplaceat-20Cforatleastonehourtoprecipitateproteins.5.Centrifugeat5000gfor15mintocollectprecipitatedprotein,decantsupernatant.6.GentlyblotresidualacetonefromcontainerwithKimwipeandthenwashpelletin15-20mLofcold80%acetone.Besuretothoroughlybreak-uppelletbypipetting,vortexingorsonication.7.Repeatsteps5and6.8.Collectfinalproteinprecipitatebycentrifugationat5000gfor15minanddrypelletbyinvertingonKimwipefor15minat37C.9.Resuspendfinalpelletin0.5-1mLofIEFextractionsolution(8Murea,2Mthiourea,2%CHAPS,2%TritonX-100,50mMDTT,0.2%pH3-10ampholytes)bypipettingandvortexingat25-30C.Incubatesamplefor1hatroomtemperaturewithagitation.Donotheatsampleunderanycircumstancesasthiswillleadtocarbamylationofproteins.10.Centrifugefor10minat12000gandusesupernatanttorehydrateIPGstrips.11.Ifproteinquantitationisnecessary,precipitateproteinsamplewithTCAoracetonepriortoperformingBradfordorLowryassayasdetergentsandreducingagentsinterferewiththeseassays.Phenolextractionfollowedbymethanolicammoniumacetateprecipitation–aneffectiveprotocolforsamplepreparationfromprotein-poor,recalcitranttissuessuchasplants(seeHurkmanandTanaka,1986,PlantPhysiology81:802-80九、材料：细菌蛋白(puc18)用甲醇提取的，冻干后用缓冲液溶解的。样品缓冲液是一般的。其中含又2%的SDS，20mmol的2-巯基乙醇。十、线粒体蛋白的提取(bioon)IsolationforMitochondriaModificationbyBioonMaterialsandreagents:homogenizingbuffer:100mMmannitol10mMTris-HClbuffer(pH7.5)5mMMgCl2关于蛋白质1mMEGTA1mMDTTleupeptin(0.1ug/ml)0.1MNa2CO3Methods:-10*6Cellswerewashedwithice-coldPBSandlysedbyhomogenizingin1mlbuffer(ice-cold)containing100mMmannitol,10mMTris,5mMMgCl2,1mMEGTA,1mMDTT,leupeptin(0.1ug/ml)-SubjectedtoPolytronhomogenizationforthree-fourburstsof3-10seachatasettingof6.5.-Intactcellsandnucleiwereseparatedbycentrifugationat120gfor5minat4℃-Supernatantswerecentrifugedat10,000gfor10mintocollecttheheavy(mitochondrial)membranepellet.-Cytoplasmicfractionswereobtainedbycentrifugingsupernatantsat100,000gfor30min.-Resuspendedpelletto0.25mg/mlinfreshpreparationof0.1MNa2CO3(pH11.5)-Incubatedonicefor30min.-Ultracentrifugationat100000gfor1hat4℃toprecipitatethemitochondriamembraneprotein.Andthesupernatantsaremitochondrialmatrix.0.5mgofproteinsinmitochondriacanget100ugofproteins(thealkali-resistantfractions)Ref.:PNAS,2002，99：12825–12830本方法只适用于提大鼠细胞线粒体蛋白，而不适用于线粒体功能检测
新鲜材料的过程中的活性成分（例如，工作状态），测定样品匀浆，研磨必须在冰浴上或低温室内操作。新鲜标本收集太晚，以确定迅速在液氮中冷冻，然后 -期间的新鲜材料的活性成分（如活性）测定样品匀浆，研磨必须在冰浴上或低温室内操作。新鲜标本收集为时已晚，在液氮中速冻后确定的，然后把 -
因为tba与mda的显色反应需要酸性和高温的条件，这样才能532nm处有最大光吸收。反应式如下：
粉磨工艺及设备
当研磨介质的自身重力 ( 实际上是重力的向心分力) 大于离心力时,研磨介质就脱离筒体抛射下落,从而击碎矿石。同时,在磨矿机转动过程中,研磨介质还会有滑动现象,对矿石产生研磨作用。所以,矿石在研磨介质产生的冲击力和研磨力联合作用下得到粉碎。磨矿介质的运动轨迹见图 1 -22。 4. 特点 对物料适应性强,能连续...
什么叫离心力 动平衡和磨数 请车界朋友解答
离心力(Centrifugal force)是一种假想力，即惯性力。当物体作圆周运动时，向心加速度会在物体的坐标系产生如同力一般的效果，类似于有一股力作用在离心方向，因此称为离心力。当物体进行圆周运动，即并非直线运\\动,亦即物体于非牛顿环境下运动，物体所感受的力并非真实。汽车车轮的轮毂边缘上，有的有一...
常用的粉磨设备有哪些
GPM系列广义盘磨是湖南广义科技有限公司最新研制的粉磨设备。GPM系列广义盘磨电动机通过专用减速机带动磨盘匀速旋。物料通过磨机中部的进料口进入磨机，落在磨盘的中心，匀速旋转的磨盘利用离心力的作用将物料向外分散、铺平，在磨盘上形成一定厚度的、均匀的料层。与此同时磨盘上的料层受都多个磨辊的碾压...
大豆磨浆后豆浆的渣浆分离,采用什么离心机
卧式离心机。豆渣豆浆分离用离心机普遍采用卧式离心机，这种传统的离心机设备中锥形转鼓都是采用单层结构的，豆浆直接在锥形转鼓内实现离心分离，由于豆浆在分离过程中时刻与豆渣接触，因此要求离心机旋转速度更高。
离心泵工作时会产生局部摩擦力吗?
对叶轮和泵壳内表面产生冲击和摩擦力，这会导致局部的摩擦和磨损。此外，如果液体中含有颗粒或颗粒浓度较高，这些颗粒也会在液体的冲刷下与叶轮和泵壳表面发生摩擦和磨损。因此，在使用离心泵时，需要注意选择合适的材质和润滑方式来减少局部摩擦力的产生，延长泵的使用寿命。
任何人都有不走运的时候吗?
这样,一方面能够建立出离心,同时又可以建立慈悲心,为下一步修菩提心打下良好的基础。这两个要点很重要,在思维饿鬼旁生的痛苦时,同样适用。 观想时,如果仅仅思维一种地狱的部分痛苦,就能生起对轮回的反感,那么,其它的不修也可以;如果不行,也可以思维几种地狱的痛苦;若还不行,就可将八寒地狱、八热地狱、近边地...
中速磨煤机的工作原理
电动机通过减速机带动磨盘转动，物料经锁风喂料器从进料口落在磨盘中央，同时热风从进风口进入磨内。随着磨盘的转动，物料在离心力的作用下，向磨盘边缘移动，经过磨盘上的环形槽时受到磨辊的碾压而粉碎，粉碎后的物料在磨盘边缘被风环高速气流带起，大颗粒直接落到磨盘上重新粉磨，气流中的物料经过上部...
球磨机的工作原理是什么?
对进料颗粒小的物料进行磨细时候，如砂二号矿渣，粗粉煤灰，磨机筒体可不设隔板，成为一个单仓筒磨，研磨体也可以用钢段。原料通过空心轴颈给入空心圆筒进行磨碎，圆筒内装有各种直径的磨矿介质（钢球、钢棒或砾石等）。当圆筒绕水平轴线以一定的转速回转时，装在筒内的介质和原料在离心力和摩擦力的...
求湖南湘电长泵宏力矿用耐磨多级离心泵工作原理?
由于离心泵的作用液体从叶轮进口流向出口的过程中，其速度能和压力能都得到增加，被叶轮排出的液体经过压出室，大部分速度能转换成压力能，然后沿排出管路输送出去，这时，叶轮进口处因液体的排出而形成真空或低压，吸水池中的液体在液面压力(大气压)的作用下，被压入叶轮的进口，于是，旋转着的叶轮就...
离心研磨液是为了加速
DNA的沉淀。根据查询相关信息，离心研磨液是为了加速DNA的沉淀，在一定温度下，DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色，提取的dna中可能含有蛋白质。
陶味盖天： 因为tba与mda的显色反应需要酸性和高温的条件,这样才能532nm处有最大光吸收.反应式如下:
广安市18350619417： 植物组织中丙二醛测定实验,研磨、离心时为何可以不用冰浴和低温? - ？
陶味盖天： 因为TBA与MDA的显色反应需要酸性和高温的条件,这样才能532nm处有最大光吸收.反应式如下:
广安市18350619417： 研磨、离心时为何可以不用冰浴和低温？
陶味盖天： 期间的新鲜材料的活性成分(如活性)测定样品匀浆,研磨必须在冰浴上或低温室内操作.新鲜标本收集为时已晚,在液氮中速冻后确定的,然后把 -
广安市18350619417： 分离各种细胞器的方法有哪些?？
陶味盖天： 把细胞研磨成浆,注意是在低温下,使酶的活性降低,从而不会使溶酶体中的酶使细胞器分解,同时不损坏酶,然后离心,根据理性的速度不同,析出的物质也不同,速度由高到低,将质量由高到低的细胞结构分离出.
广安市18350619417： 生物实验手段范例--差速离心法的方法是:在低温条件下,将叶片置于研钵中,加入某种溶液研磨后,用离心法进行分离.第一次分离成沉淀P1(含细胞核和细... - ？
陶味盖天：[答案] (1)本题所用的分离细胞组分的方法称为差速离心法,此法依据的原理是各种细胞器的密度不同.(2)含DNA最多的部分是在细胞核中,位于P1部分.(3)与光合作用有关的酶在叶绿体内,若要继续分离得到与光合作用有关的...
广安市18350619417： 提取叶绿素为什么过滤不离心研磨提取叶绿素,匀浆为什么滤纸过滤而不离心?低温离心可以吗? - ？
陶味盖天：[答案] 王老师给您解释下这个问题: 这个不需要的. 提取的话,有相应的提取液就可以,色素就会溶解在提取液里面,建议使用无水乙醇,不涉及离心.
广安市18350619417： 蛋白质提取问题 - ？
陶味盖天： 蛋白质提取方法-------列举10种方法 一、植物组织蛋白质提取方法(summer) 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上. 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置...
广安市18350619417： 植物的基因怎样提取?? - ？
陶味盖天： 植物DNA提取方法 方法一:1.取两片幼嫩新鲜叶片,置于预冷的研钵中,倒入适量液氮,迅速研磨成粉末状,随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50ul抗氧化剂2-巯基乙醇,继续研磨成略有流动性的糊状或粥状,转入1.5ml的离心管中,于...
广安市18350619417： 如何提取鱼类DNA？
陶味盖天： 以前做过这方面试验,但现在找不到资料 给你个相仿的 原理都一样 实验二 从小鼠肝脏中提取DNA 【目的要求】 1. 掌握DNA分离的原理、各试剂作用及操作过程 2. 掌握肝匀浆制备及注意事项 3. 熟悉DNA浓度、纯度测定原理及方法, 仪器使用 ...
广安市18350619417： 植物色素的提取能用Arnon方法吗? - ？
陶味盖天： Arnon是传统的叶绿素测定方法,是将材料在80%丙酮溶液中研磨并经过滤或离心除去残渣后,测定提取液的光密度值来计算叶绿素含量,所以是使用分光光度计测量光的吸收值继而估算出色素的含量.二甲基亚砜(DMSO)直接浸提高等植物...
