EMSA,谁做过?原理是什么啊?

作者&投稿:潭安 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
EMSA的原理是什么~

一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。
通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物和非结合的探针。
DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可是双链或者是单链。当检测 如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。
在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。
竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特异), 和其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下,依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

扩展资料
由于很多研究的TF不具有结合的特异性,所以即使发现TF和被研究的寡核苷酸探针结合,也不表示在体内该TF不能和其它寡核苷酸结合,运用一些生物信息学 软件,可以模拟表示TF与基因启动子区寡核苷酸结合的具体情况,发现TF可以和启动子区PUTATIVE 结合。
同时,由于EMSA在体外不能模 拟细胞内众多生物分子的相互作用,比如,某一TF在细胞内由于受到其它TF的协同或者修饰后才能与寡核苷酸结合的话,那么在体外是不能重现这一结果的。
参考资料来源:百度百科-EMSA (凝胶迁移)

EMSA全称是Electrophoretic Mobility Shift Assay,中文叫凝胶迁移实验或电泳迁移率实验,它是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术,可用于定性和定量分析。

这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合物在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理。首先让蛋白质与末端标记的核酸探针结合,然后在跑PAGE胶,结合了蛋白质的复合物比未结合蛋白质的探针电泳的速度要慢,这样,从PAGE胶的电泳结果就可以判断,该蛋白是否和特定序列结合或者该序列是否和蛋白结合。

其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋白质,并可进行未知蛋白的鉴定。生物体内DNA转录成RNA是基因表达的关键过程,基因表达调控主要发生在转录水平。近年来,基因分子生物学研究领域的趋势之一是逐渐从基因结构和功能分析转到基因顺式作用元件和转录因子及其转录调控机理上,对基因转录调控的研究将是今后相当长一段时期内功能基因组学研究的热点之一。

没做过


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