实时荧光定量PCR的结果该怎样分析？
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；
2、一般都是相对量，则用deltadeltaCT方法来计算；
3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；
4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
扩展资料：
PVR的循环参数：
1、预变性；
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤；
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。
3、引物退火；
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数；
大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸；
在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
参考资料来源：百度百科—实时荧光定量PCR
定量pcr中的ΔRn值指的是什么啊?
ΔRn = R+n - R-n ,计算ΔRn ,其中, R+n 是表示每点测量的荧光强度, R-n 表示荧光基线强度 实时荧光定量PCR是利用荧光信号的变化，实时检测PCR扩增反应中每次循环扩增产物量的变化，通过循环阈值和标准曲线的分析对标本中起始模板拷贝数进行定量分析。
为什么在做荧光定量PCR实验时,前15个循环信号很稳定?
荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍（机器自动设置）。在做荧光定量PCR实验时，经常采用手动设置，手动设置的原则要大于样本的荧光背景值和阴性对照的荧光最高值，同时要尽量选择进入指数...
荧光定量pcr的检测下限是多少
pcr荧光定量检测下限25拷贝。在另外回的一组管子中，加入已知拷贝数的DNA同时扩增，每个管子中加入的数量是不同的，但是从最小数目到最大数目的这个范围涵盖了样本中DNA拷贝数。PCR反应完成后，把已知拷贝数DNA的量和PCR荧光Ct值制成标准曲线，再把待测样本的CT值和该标准曲线比对，就可以得到样本中的...
real-time RT-PCR是什么意思
外文名 【Real-time Quantitative polymerase chain reaction】中文名 【实时荧光定量多聚核苷酸链式反应】中文简称 【实时荧光定量PCR】外文简称 【RT PCR】【实时荧光定量PCR技术】，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时...
荧光定量PCR的临床意义
在慢性感染时 HBV-DNA 可事例到肝细胞 DNA 中，称为整合型 HBV-DNA ，如 HBV 病毒基因已整合至宿主基因，治疗药物则难以到达，这是 HBV 不易从体内清除的重要原因之一。采用荧光定量 PCR 法检测病毒基因，既可以定性，又可以定量，其临床应用价格有：( 1 )病情评估：肝炎病毒在肝细胞内大量复制是...
实时荧光定量PCR中两种引物的设计有什么要求
12.做荧光定量产物长度80-150bp最好，最长是300bp.13.引物设计避免DNA污染，最好跨外显子接头区。14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于70％或者有8个互补碱基同源。15.查看有无假基因的存在。假基因就是无功能的DNA序列，与需要扩增的目的片段长度相似。16.TM值在55-63度之间。17. .引物与...
荧光定量pcr(基本原理和应用领域介绍)
荧光定量PCR（qPCR）是一种广泛应用于生命科学研究和医学诊断的分子生物学技术。它结合了PCR技术和荧光检测技术，能够快速、准确地检测出目标DNA或RNA分子的数量，因此在病原体检测、基因表达分析、遗传疾病诊断等领域得到了广泛应用。基本原理 qPCR技术基于PCR技术，但是在PCR的基础上加入了荧光染料和检测系统...
荧光定量pcr原理
开始时，探针完整地结合在DNA任意一条单链上，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，检测不到荧光信号；PCR扩增时，Taq酶将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。荧光定量PCR的应用 1、核酸定量分析 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的...
qpcr原理及应用
qpcr原理是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流。应用行业：各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医...
荧光定量pcr和实时荧光定量pcr还有反转录pcr都是什么呀?有什么区别,分 ...
实时就是指每个阶段的荧光都有收集，其实现在所有的荧光定量PCR仪器都是实时的。荧光定量PCR的英文简写是：FQ-PCR，F是荧光的缩写，Q是定量的缩写。（或者写成是RT-PCR。RT就是realtime的缩写）。做定量PCR的目的是为了了解起始模板数的量，这个一下写不清楚，你看一个说明书绝对看得懂。而反转录PCR...
月石肿节： 1、如果有标准曲线,按照标准曲线计算; 2、一般都是相对量,则用delta delta CT方法来计算; 3、引物或探针降解:可通过PAGE电泳检测其完整性; 4、模板量不足:对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起; 5、看CT值是分析...
连州市15646973134： 实时定量PCR的结果分析 - ？
月石肿节： Sybergreen可以和所有核酸结合,没有特异性.所以要保证特异性的话,最好用其他的方法.扩增体系中加入模板DNA的体积,比如同时10微升的体系,对照组加1微升DNA,实验组加2微升DNA,则实验组的加样量是对照组的2倍.看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价值了,平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右
连州市15646973134： 如何分析荧光定量pcr实验结果? - ？
月石肿节： 如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值.其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对.具体情况具体分析.
连州市15646973134： 实时定量PCR的结果是怎样分析的?？
月石肿节： PCR是聚合酶链式反应,通过反复的变性退火延伸,达到将微量DNA扩增检测的目的.目前实验室里多采用的是实时荧光定量检测,一起可以读取每次循环的荧光强度,并记录达到设定的阈值的循环次数.原始标本含有的DNA量愈多,达到阈值循环数愈小.通过已知浓度的标准品为对照,定量分析样本所含的目的DNA量.
连州市15646973134： 实时荧光定量pcr数据如何统计?近日做实时荧光定量pcr,得到了不同的ct值,只是计算了△△ct以及2 - △△ ct的值,但是我不知道如何使用spss进行统计分... - ？
月石肿节：[答案] 首先你这样做出来的统计没有意义. 应该是至少3次独立实验,而不是重复3次PCR. 如果3次试验,每次重复3次(取平均值算一次).然后先定各个基因在对照组的值为一,再算出其他组该基因的相对量,比如内参CT值一样(都是15),而TNF的...
连州市15646973134： 荧光定量PCR仪ABI7500数据怎么分析做完荧光定量,出来的数据项自己作图,但是横纵坐标和误差值都选哪些呢?不懂. - ？
月石肿节：[答案] 做绝对定量的话横坐标是初始模版的拷贝数,纵坐标是CT值
连州市15646973134： 实时荧光定量PCR的结果该怎样分析?为什么最好不用Syber Green? - ？
月石肿节：[答案] 如果有标准曲线,按照标准曲线计算.一般都是相对量.则用delta delta CT方法来计算.举例如下:对照组基因A的CT值为20,内参(比如βactin)CT值15.实验组基因A CT值18,内参CT值14.首先算加样量:delta CT=15-14=1.2的1次...
连州市15646973134： miRNA荧光定量PCR结果怎么看 - ？
月石肿节： 荧光定量我用罗氏的反应速度算是相当快的,在样本处理(提出核酸)后,放在荧光定量PCR仪器上一般需要30分钟~1小时左右.但是如果你的样本比如支原体的含量非常高,可能在没有运行结束已经可以看出结果了,但是如果说5分钟就出结果了,确实太快了点.如果是realtime做表达量,用excel的制图,将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了.如果你还做了标曲的话,就用制图中的散点图看R2值. 其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对. 具体情况具体分析.
连州市15646973134： 实时荧光定量pcr数据如何统计? - ？
月石肿节： 首先你这样做出来的统计没有意义. 应该是至少3次独立实验,而不是重复3次PCR. 如果3次试验,每次重复3次(取平均值算一次).然后先定各个基因在对照组的值为一,再算出其他组该基因的相对量,比如内参CT值一样(都是15),而...
连州市15646973134： 实时荧光绝对定量PCR实验数据分析哪个指标啊? - ？
月石肿节： ct,是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数,仪器中给出的ct就是你每个孔实际的ct值 ct mean,是你相同样品的几个重复的CT值得平均值 如果是做的相对定量,用CTmean的结果就可以了,计算方法就是R=2-ΔΔCt,现在很多仪器你只要设置的时候明确标出内参基因和目的基因,这个结果也是会有自带软件给计算出来的.如果你是做绝对定量,那更方便,你只要在仪器设置的时候把你的标准品含量依次输入,最后软件会自动生成标准曲线什么的,你最后只要分析og sq的结果就可以了.
