植物组织培养一般的的流程

植物组织培养的流程~

植物组织培养的流程：
第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。
流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。
有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1～2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3～10次左右。
无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08～0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。

扩展资料培养材料采集：
要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合作用、呼吸作用旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。
培养材料的消毒：
从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带入培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。
参考资料：植物组织培养_百度百科

组织培养的方法和步骤






要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒

从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。

第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放人为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。流水冲洗在污染严重时特别有用。洗时可加入洗衣粉清洗，然后再用自来水冲净洗衣粉水。洗衣粉可除去轻度附着在植物表面的污物，除去脂质性的物质，便于灭菌液的直接接触。当然，最理想的清洗物质是表面活性物质—吐温。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30s。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。有一些特殊的材料，如果实、花蕾、包有苞片、苞叶等的孕穗，多层鳞片的休眠芽等等，以及主要取用内部的材料，则可只用70%酒精处理稍长的时间。处理完的材料在无菌条件下，待酒精蒸发后再剥除外层，取用内部材料。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1—2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3-l0次左右。无菌水涮洗作用是免除消毒剂杀伤植物细胞的副作用注意：①酒精渗透性强，幼嫩材料易在酒精中失绿，所以浸泡时间要短，防止酒精杀死植物细胞。②老熟材料，特别是种子等可以在酒精中浸泡时间长一些，如种子可以浸泡5分钟。③升汞的渗透力弱，一般浸泡10分钟左右，对植物材料的杀伤力不大。④漂白粉容易导致植物材料失绿，所以对于幼嫩材料要慎用。⑤在消毒液中加入浓度为0.08—0.12%的吐温20或80（一种湿润剂），可以降低植物材料表面的张力，达到更好的消毒效果。灭菌剂 使用浓度(%) 持续时间（min） 去除的难易 效果

次氯酸钙 9~10 5~30 易 很好

次氯酸钠 2 5~30 易 很好

氯化汞 0.1~1 5~8 较难 最好

抗菌素 4~50mg/L 30~60 中 较好

制备外植体

将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。在操作中严禁用手触动材料。

接种和培养 （一）接种

在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种1－2个，以防止交叉污染。（二）封口

接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。 （三）温度

培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。

增殖

外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。

根的诱导

继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得键壮根系。

组培苗的炼苗移栽 试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。
植物组织培养方法 1 MS培养基的配制包括以下步骤.
培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分,为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量,可将培养基中的各种成分,按原量的20倍或200倍分别称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做培养基母液.这样每次使用时,取其总量的1/20（50 mL）或1/200（5 mL）,加水稀释,制成培养液.现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出,供配制时使用.
大量元素(母液Ⅰ) mg／L
NH4NO3 33 000
KNO3 38 000
CaCl2·2H2O 8 800
MgSO4·7H2O 7 400
KH2PO4 3 400
微量元素(母液Ⅱ)
KI 166
H3BO3 1 240
MnSO4·4H2O 4 460
ZnSO4·7H2O 1 720
Na2MoO4·2H2O 50
CuSO4·5H2O 5
CoCl2·6H2O 5
铁盐(母液Ⅲ)
FeSO4·7H2O 5 560
Na2-EDTA·2H2O 7 460
有机成分(母液Ⅳ)
ⅣA
肌醇 20 000
ⅣB
烟酸 100
盐酸吡哆醇(维生素B6) 100
盐酸硫胺素(维生素B1) 100
甘氨酸 400
以上各种营养成分的用量,除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外,其余的均为200倍浓缩液.
上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液.其中,母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后再将它们混溶,最后定容到1 L.
母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中,边加热边不断搅拌使它们溶解,然后将两种溶液混合,并将pH调至5.5,最后定容到1 L,保存在棕色玻璃瓶中.
各种母液配完后,分别用玻璃瓶贮存,并且贴上标签,注明母液号、配制倍数、日期等,保存在冰箱的冷藏室中.
MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、6-苄基嘌呤（6BA）等植物生长调节物质,并且分别配成母液（0.1 mg/mL）.其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量（1 mL）无水乙醇预溶,将6BA用少量（1 mL）的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解,溶解过程需要水浴加热,最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液.
配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL,母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL.再取2,4-D 5 mL、NAA 1 mL,与各种母液一起放入烧杯中.
配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子,如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染,应立即淘汰这种母液,重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前,必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时,最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上,量取1种,划掉1种,以免出错.
溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL的搪瓷量杯中,再加入蒸馏水750 mL,用电炉加热,边加热边用玻璃棒搅拌,直到液体呈半透明状.然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中,最后加蒸馏水定容至1 000 mL,搅拌均匀.
调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液,逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌,并随时用精密的pH试纸（5.7.0）测培养基的pH,一直到培养基的pH为5.8为止（培养基的pH必须严格控制在5.8）.
2 BA为细胞分裂素 NAA 是萘乙酸,为生长素的一种
3 适于百合根的激素暂时没找到
以下是叶片和胚的激素：对麝香百合 (LiliumlongiflorumThunb)叶片进行离体培养 ,可成功获得无菌苗.试验结果表明 :培养基MS +BA 0 1mg/L +NAA 1 0mg/L适于初代培养 ,有助于根和芽的分化 ;MS +BA 0 5mg/L +NAA1 5mg/L适于增殖培养 ,利于愈伤组织的产生 ,并促进芽的分化 ;生根培养基为 1/ 2MS +NAA 1 0mg/L +多效唑 10 0mg/L ;当试管苗根长 1cm时移栽易成活
在含有1 mg/ L IAA,1 m g/ L GA3,6 0 0 m g/ L CH的 MS培养基上培养 ,蔗糖含量为 6 8%时 ,百合幼胚胚性生长最好 ,培养 30 d后可以得到正常胚 .在含有 0 .1 m g/ L NAA,1 m g/ L BA的 MS培养基上可以形成淡绿色的愈伤组织 ,将这些愈伤组织转移到 1 / 2 MS无激素的培养基上培养可以形成大量的不定芽 ,不定芽生根移栽后 ,其成活率可达90 %以上

植物组织培养可以分为四个阶段：
（1）建立无菌体系，即外植体及培养基的消毒、接种，获得愈伤组织或器官。
（2）进行增殖，不断分化产生新的植株，或直接产生不定芽及胚状体，也可以根据需要反复进行继代培养，以达到大量繁殖的目的。
（3）将植株转移进行生根培养，可以转入生根培养基，也可以直接切取进行扦插生根。
（4）试管苗过渡，即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应过程。

一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤：

（1）准备阶段

查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。

（2）外植体选择与消毒

选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，或剥离出茎尖，挑出花药，接种到初代培养基上。

（3）初代培养

接种后的材料置于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基分化成不同的器官原基或形成胚状体，最后发育形成再生植株。

（4）继代培养

分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经多次切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。

（5）生根培养

刚形成的芽苗往往比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。

（6）炼苗移栽

   

选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽到疏松透气的基质中，注意保温、保湿、遮荫，防止病虫危害。当组培苗完全成活并生长一定大小后，即可移向大田用于生产。

如：茎尖→表面消毒→接种诱导培养基→茎尖生长→病毒检测鉴定→培养无根小植株→培养生根→完整小植株→炼苗20-25天→移栽成活。 

常规情况下详细的生产流程图如下：

 

对不同的品种词流程会略有差异，如进行果树育苗还需进行嫁接等操作流程，但对组培工厂化育苗而言，一般可根据上面的流程图来安排各项作业，只有相互衔接好、配合好，才能提高生产效益。

 

家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的，当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的，装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 （无菌箱）1个 ，需要自己自制，用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的，小一点也可以，主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅（煮汤、面条的那种）买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个，用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干，
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干，用于做瓶口的塞子，要注意的是，棉花要使用普通做棉衣的棉花，不要用医院用的脱脂棉，这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干，用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把，刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个，2ml移液管1只、药棉若干。

二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的，其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的，并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素（家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。）共5种。也可以买市售的MS培养基
（1）、硝酸铵
（2）、硝酸钾
（3）、 氯化钙
（4）、硝酸镁
（5）、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸（PH 5.4－7.0）
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾（可以到医院或药材商店去买）
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂，他们都有比较准确的含量，你可以去按你的需要去配制比例。

爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术，尤其是快速繁殖，并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者，在充分利用家庭条件的基础上，同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到，一些比较名贵的园艺品种，比如：万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种，还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物，甚至于星球属、岩牡丹属等等，这些植物的常规繁殖系数很低，他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题，并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物，同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中，不但可以对培养的植物有更深一层的认识，对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家，最初都不是专业学组培的，就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是，爱好者有着浓厚的兴趣，非凡的观察力和细致入微的操作，这些都可以弥补非专业的缺陷，并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源，这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣，还可以有一定的经济收益，甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备：
进行组织培养，没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的，不适合家庭消费，但如果能有途径买到廉价的实验室设备，那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备，就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅：
接种箱：植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境，可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料，动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍，模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是，组织培养的接种箱的密闭性要求比较高，尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料，箱子的顶端按放两盏灯：20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料，因为这样便于观察，有时候接种箱还可以借用为培养箱，周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅：主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器，然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅，高压锅的压力要低于灭菌器，但是适当延长灭菌时间，还是可以取得较好的效果的。比如：对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果（灭菌器是20分钟）；无菌水采用间歇灭菌法，先用高压锅压40分钟，放置24小时，再压20分钟即可达到效果。
2.场地：
这个就因人而易了，总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘，减少空气流动，最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房，但所使用的器具必须和厨具分开。一般说，组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的，除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质，需要认真保管，以免发生危险。
3.辅助设备：
主要指冰箱，它是用来储存化学物质和培养基的。天平，可以采用感量在100克的托盘天平，甚至用中药的药衡都可以代替。培养架，这个就更简单了，采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求，如果日光不足，可配合日光灯补光等。
4.化学试剂：
化学试剂是不可缺少的，因为组织培养的核心就是培养基的成分，而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的，比如大量元素（硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等）、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买，因为它们的用量很小，我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的，他们的称量需要借助分析天平，但这是家庭条件所不允许的，如果有条件可以借助关系单位代替配成母液，每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店（卖农药化肥的地方），它们一般出售农业用的激素，有的是用安瓿装的，按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来，有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉，只需要称取一定量加水即可，很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉，只需要称量40克，加1升水，用微波炉加热5分钟即可分装，相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞（剧毒），如果不容易搞到，可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时，可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器：
组织培养的容器要求并不高，只要玻璃颜色为透明色即可（钠玻璃不可以）。
我们可以到垃圾站去看看，捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶，我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可，如果不好找到，可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子，折叠成双层，用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器，比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量仪器，如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买，恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它：
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸（5.4~7.0），需要买一本，大约花1.5元即可搞定；酒精灯也不需要买，用墨水瓶配上一个玻璃环，再加上一个棉花芯，最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒，这样的酒精灯很小巧，适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的，到花市的工具摊位上，花10元钱全部搞定，注意选比较小巧的工具。
关于用水，按理说应该使用蒸馏水，但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯，那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养，效果都是很不错的，更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂，主要突出了他们相关的替代品，因为作为组织培养中的快速繁殖，它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的，工厂化生产组培苗要追求高增殖率，所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确，只要达到培养成功的目的即可。当然，如果想提高增殖倍率和试管苗的品质，必须尽量贴近实验室的用具和器材，代用品总是有一定的缺陷的。

（一）必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱，可用于贮存培养基母液（4℃）及需低温贮存的药品（如生物调节剂）。
高压锅：它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水，进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅：它可用于培养基、溶化琼脂（起水浴锅作用）及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶：它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟：可以用于接种及盛放消毒液（若放消毒液，就不要再食用，以免中毒）。
日光灯：它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶：它可以用于组培培养之用，代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时，不要赶在家庭成员较多时进行，如室内已安装了空调，那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
（1）接种箱的制作：组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替，就可以大大节省开支，有利于普及。
自制的接种箱的用料，可以是胶合板、纤维板、玻璃（3毫米厚）、木条（装修房屋用的龙骨），甚至可以用使纸板的包装箱（包装箱的质量要稍好一些的，如电视机的包装箱），也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小，可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作，但相对来说消毒容易，且占地较少；制作较大的便于操作，但消毒工作显得不易，且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
（2）培养箱的制作：培养箱可代替培养室，也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作，或利用长方形鱼缸。因此，可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平（500克）：用于称量配制培养基药品，或用称量金银、中药的戥子称，用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂；或购买微量元素及生物调节剂时，买已分装的。酒精灯1盏：用于接种时，灼烧消毒灭菌。漏斗（亦可用购买桶装食用油，所配给的漏斗）：用于分装培养基用。长镊子2把：用于接种。解剖刀2把、刀片若干：用于接种。10、50、100毫升量筒各1个：用于配制培养基用。长把牛角勺2把：用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个：用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸：用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈：用于绑扎培养瓶口。脱脂棉：用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5～7）试纸1本：用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶：用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶：用于消毒。福尔马林1瓶：用于接种箱消毒（在每次操作前2～10小时，将10～20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内，在操作前取出）。MS培养基所需药品；用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠：用于调pH值。如若购置1盏紫外灯，进行室内及接种箱消毒更为理想。
（二）操作时注意事项
家庭操作与单位不同，因而要注意以下事项：要注意安全，妥善保管药品。特别对老人和小孩；操作时要消毒仔细严格，接种时操作人员戴好口罩、工作帽，避开电风扇及大风沙天气，家庭成员多时避免操作；消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间；药品称量要准确无误；如果家庭不具备温度调控（如调温空调），应避免在盛夏、寒冬进行；红掌组培要一步步来作，可先作容易组培的花卉，待取得经验后再做难作的花卉。

1.培养容器和玻璃仪器的准备：
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶，要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时，再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁，直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣，空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘，尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗，反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止，将移液管放置在一个长筒中，便于使用。一般移液管只能使用一次，即要清洗，所以有多必要准备几只移液管，建议：10ml/2支，5ml/2支，1ml/5支。
2.培养基的配制：
经典的组织培养用培养基是ms配方，其基本上划分为：大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级，用普通天平是难以称量的，为了解决这个问题，我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下：
大量元素：硝酸铵66.0克；
硝酸钾76.0克；
无水氯化钙13.3克；
七水硫酸镁14.8克；
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升，每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐：七水硫酸亚铁5.56克；
乙二胺四乙酸二钠（edtana）7.46克。
以上两种分别加热溶解，混合，定容到1升，调整ph到5.5以下，每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小，为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟，过滤留滤液，每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟，过滤留滤液，每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后，每升ms培养基还需要加入白砂糖30克，琼脂7克。
这里要说明的是，糖和琼脂都是可变的量，要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂，透明度更好。
上述各成分加入后，定容到800毫升左右，用微波炉加热，直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，这样每取1毫升，换算到培养基中就是1ppm）。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基：
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉，大大简便了培养基的配制，根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例： ms培养基原粉，包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂，一般按使用方法称量，微波炉加热溶解，加入激素，定容到1100毫升（1.1升），调整ph值到5.8~6.0。
4.分装：
将配制好的培养基分装在培养容器中，注意要趁热分装，因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5，注意不要将培养基挂在瓶的外壁，这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口，用胶圈固定（胶圈尽量选择自行车的内胎，这种胶圈比较耐热）。
5. 灭菌：
采用家庭压力锅消毒，建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”，它们可以指示灭菌效果，当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内，加热到有大量蒸汽冒出，再加上压力伐，维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却，将培养基取出，放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备：
新制作的接种箱必须要清洁干净，尽量做到无死角。每次使用前2小时，将操作所需要的全部物品放入接种箱，再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内，在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现，这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒；同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的，紫外线进行第二道灭菌，在紫外线照射大约15分钟后，会激发氧气形成臭氧，臭氧作为第三道灭菌防线，这样经过三次灭菌，接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内，向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水，因为甲醛对人体有毒害作用，氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质，从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉，要继续照射，直到操作前5分钟关闭，维持黑暗5分钟，然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是，紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶，形成四聚体，但是微生物具有一种光复活蛋白，可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体，而使微生物复活，这个作用叫做“光复活作用”，所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟，避免光复活作用的出现。

怎样在家庭开展组培工作

制备
家庭组培因受到条件的限制，不可能配置大量的配养基，，一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后，分装成35－40瓶，塞好棉塞，包好包头纸。（棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制，不能使用脱脂棉，然后用纱布包紧，用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。）然后放入高压锅里高压灭菌，待高压锅喷嘴喷出蒸汽时，扣上压力阀，从压力阀喷气时起计时，连续维持15－20分钟后关火，压力消失后，打开锅盖，取出配养基，放入接种箱内待用。初次实验时，灭菌后的培养基应放置三五天后，观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出，这说明灭菌时间不够，，需要适当增加灭菌时间。

接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内，因接种箱内的体积相对较小，所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上，不能随意摆放，箱内湿度较大，点酒精灯一定要是用打火机，不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器，尽可能地大一些，因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后，将一装有10－20ml福尔马林的磁杯放入箱内（最好不要使用玻璃杯，因反应时温度较高，容易炸裂。），倒入2－5g高锰酸钾（PP粉），使其蒸气充满箱内，达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好，避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后，才能开始接种工作，这段时间大约需要5－10个小时。

接种时，揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物，取出熏蒸用的磁杯，将接种用的材料送入接种箱内，开启紫外线灯，十五分钟后关闭紫外线灯，开启照明灯，即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念，要把一切物品都看成是带菌的，要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高，湿度较大，手容易出汗，所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指，也可以戴指套。另外，操作时要注意防火，由于空间较小，一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时，要将瓶口置于酒精灯上方，用右手的无名指和小指夹住棉塞尾，轻轻将棉塞拔出，棉塞不能置于箱内物品上，应用手指夹住，接种后，将瓶口在酒精灯上烧灼一下，棉塞也烧灼一下，，然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好，扎好包头纸，用铅笔标明品种、接种日期、编号等，然后重复下一瓶。
其实，用接种箱接种与超净工作台相比较，工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的，操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。

培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控，所以要充分的利用自然条件，接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方，如靠窗的书柜、写字台上，但要避免日光直射，一般室温在22－28摄氏度时都能正常生长，不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低，可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱，里面装一两个15－25瓦的白织灯，既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时，有条件的可以摆放在空调室内，，没有空调室的，降温虽然困难一些，但大多数试管苗是可以耐受的，不至于死去。小苗长出后，摆放在书柜或工作台上，感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵，无疑是一种享受。

栽培
当小苗长到一定的时候，就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根，待长出一定根系时，就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面，一是要适当降低温度；二是要增大湿度；三是要严格控制杂菌危害；四是要保证种植介质的疏松透气；五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质，把小苗种植后用百菌清喷雾浇根，盖上塑料薄膜，少量的小苗干脆用玻璃杯盖住，大约15天后就能揭去覆盖物，便可进行正常管理了。

家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情，只要多开动脑筋，多想一些办法，做起来也是很容易地。万事开头难，办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长，原来条件不允许，科研经费很紧张，刚开始的时候，一年的科研经费只有3000元，那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草（石斛）种子的无菌培养、体细胞融合，都获得了很好的成绩，我们就是用这种方法做的，当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊，他们认为很珍贵的组培小苗，被我们丢得到处都是，觉的不可思议，他们做不出来的，竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功，而是告诉想从事这个行业的朋友，不要自己把自己的能量看得太低，也不要迷信权威、只要自己有信心，严格地按照科学的规律去做，没有什么做不了的，没有什么办不到的。

家庭组培培养基的选择与效果评价

选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。

选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑：一是基本培养基；二是各种激素的浓度及相对比例。

MS培养基适合于大多数双子叶植物，B5和N6培养基适合与许多单子叶植物，特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效，White培养基适合于根的培养。

首先试用这些培养基进行初步实验，可以少走弯路，大大；减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后，可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。

在进行调整时，以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时，硝酸盐的作用比铵盐好，但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移，若同时加入硝酸盐和少量铵盐，会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时，培养的植物会表现出一些症状，可根据症状加以调整，如氮不足时，培养的组织常表现出花色苷的颜色（红、紫红色），愈伤组织内部很难看到导管分子的分化；当氮、钾或磷不足时，细胞会明显过度生长，形成一些十分蓬松，甚至呈透明状的愈伤组织；铁、硫缺少时组织会失绿，细胞分裂停滞，愈伤组织出现褐色衰老症状；缺硼时细胞分裂趋势缓慢，过度伸长；缺少锰或钼时细胞生长受到影响。

培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况，所以应仔细分析，不可轻易下结论。

植物组织培养的流程：

第一步，将采来的植物材料除去不用的部分，将需要的部分仔细洗干净，如用适当的刷子等刷洗。把材料切割成适当大小，即灭菌容器能放入为宜。置自来水龙头下流水冲洗几分钟至数小时，冲洗时间视材料清洁程度而宜。易漂浮或细小的材料，可装入纱布袋内冲洗。

第二步是对材料的表面浸润灭菌。要在超净台或接种箱内完成，准备好消毒的烧杯、玻璃棒、70%酒精、消毒液、无菌水、手表等。用70%酒精浸10～30秒。由于酒精具有使植物材料表面被浸湿的作用，加之70%酒精穿透力强，也很易杀伤植物细胞，所以浸润时间不能过长。

第三步是用灭菌剂处理。表面灭菌剂的种类较多，可根据情况选取1～2种使用见表。第四步是用无菌水涮洗，涮洗要每次3min左右，视采用的消毒液种类，涮洗3～10次左右。

扩展资料

组织培养技术是在人为创造的无菌条件下将生活的离体器官（如根、茎、叶、茎段、原生质体）、组织或细胞置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养以获得细胞、组织或个体的技术。

组织培养技术原理

植物组织培养的原理是细胞全能性。也就是说每个植物细胞里都含有一整套遗传物质，只不过在特定条件下才会表达。

组织培养基于此原理就可以将已处于分化终端或正在分化的植物组织脱分化，诱导形成愈伤组织，再在愈伤组织上形成新的丛生芽。

组织培养技术的应用

（1）改良作物：增加遗传变异性。

（2）繁殖植物：组织培养中从一个单细胞，一块愈伤组织，一个芽（或其它器官）都可以获得无性系。无性系就是用植物体细胞繁殖所获得的后代。

（3）有用化合物：有用化合物包括药物、橡胶、香精油、色素等。这些化合物许多都是高等植物的次生代谢物，有些化合物还不能大规模地人工合成，而靠植物产生这些化合物来源有限。因此，利用组织培养方法，培养植物的某些器官或愈伤组织，并筛选出高产、高合成能力、生长快的细胞株系，以进行工业化生产，是一条行之有效的途径。

参考资料来源：百度百科：组织培养技术

就像我们可以把核酸提取这样一类分子生物学实验粗暴地划分成细胞裂解和核酸纯化两个步骤一样，植物组织培养也有两个核心的步骤，那就是野生材料驯化和组织形态建成。

野生材料的驯化
很多时候，需要使用植物组织培养往往是出于遗传转化受体的需要，抑或是进行不同条件的培养以提取代谢物进行差异分析，出于这样的前提，实验者往往只是搬照文献里给出的培养条件或者做出明确的改动，缺乏的只是材料。

因此，无菌培养是这一类组织培养实验的保障，而将野生材料驯化的过程，即是无菌操作与外植体消毒等一系列与污染作斗争的集中体现。

野生材料驯化的具体措施如下：

1. 灭菌：

通常，我们需要对使用的培养基、培养皿、镊子、解剖刀、去离子水和滤纸进行彻底的灭菌，这样可以彻底杀死器材和培养基中的微生物；

其中，培养基、镊子、解剖刀、去离子水等液体和金属器皿通常采用121℃ 20-30min的湿热灭菌法，玻璃器皿常用180℃ 2h的干热灭菌法，而抗生素、激素等不耐高温的试剂常用过滤灭菌法。

2. 消毒：

消毒是指外植体和操作台面的消毒，目的是在不伤害植物的前提下，抑制和杀死大部分微生物。其中，外植体消毒的方式主要分为表面消毒和侵入消毒两种，对于操作台面的消毒通常是指超净工作台使用前进行的的30min紫外灯消毒和操作过程中的空气滤过消毒，值得一提的是，在使用超净台之前用70 % 酒精擦拭台面会有一定效果。

对于大部分种子、陆生植物的茎叶等，表面消毒足以杀死可能会在组织培养过程中导致污染的微生物，比如70 % 乙醇、5 % 过氧化氢，均可以在短时间内有效杀死表面的微生物；

但对于一些生长在潮湿阴暗环境中的植物来说，通常有着大量的组织内生菌，而这些内生菌往往不是表面消毒可以杀死的，一些侵入式消毒剂会比较有效，如升汞、次氯酸钠等。

3. 无菌操作：

无菌操作即杜绝一切来自操作者的污染或因操作者失误导致的其他污染，一些常见的操作手法如下：

a) 设立单独的组培间，并设立与外界污染区的缓冲间，在缓冲间内更衣进入组培间；

b) 进入组培间前要在缓冲间内进行全身的酒精喷雾消毒，同时换上组培室专用拖鞋；

c) 操作过程中，佩戴手套或肢体不从一切开口器皿的上方经过；

d) 器皿不要遮盖超净台出风口，超净台不要开口太大；

e) 在超净台中点燃酒精灯，操作尽量在酒精灯火焰周围进行；

f) 使用的金属工具和玻璃器皿每进行一阶段的操作后及时进行灼烧灭菌；

g) 镊子、枪头等接触培养基的工具在接触到其他固态表面后立即灼烧灭菌或更换；

h) 做其他分子实验的超净台应与进行组织培养接种的超净台分开；

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广丰县18787296173： 植物组织培养的步骤有哪些? - ？
郟罗百宏： 准备无菌培养基,培养基里要有无机盐,水,糖类,生长素,细胞分裂素,95%的氧气和5%的二氧化碳 1.把植物的茎尖细胞放到培养基里 2经过脱分化到再分化,到再分化时就要放到阳光充足处,然后就让这棵小树苗沐浴在杰科的阳光下慢慢成长了. 唉~~~~甘都唔记得.............

广丰县18787296173： 植物组织培养的过程是什么? - ？
郟罗百宏： 植物组织培养可以分为四个阶段:2113 (1)建立无菌体系,即外植体及培养基的消毒、接种,获得愈伤组织或器官.5261 (2)进行增殖,不断分化产4102生新的植株,或直接产生不定芽及胚状体,也可以根据需要反复进行继代培养,以达到大量繁殖的目的. (3)将植株转移进行生1653根培专养,可以转入生根培养基,也可以直接切取进行扦插生根. (4)试管苗过渡,即试管苗出瓶后进行一定时间对外界环境的适应属过程.

广丰县18787296173： 植物组织培养一般步骤? - ？
郟罗百宏：[答案] 1、首先选择用于组培的材料 2、材料处理,洗净灭菌 3、拟定要用的培养基配方,配置好培养基 4、接种,在无菌台上操作 5、培养,观察现象

广丰县18787296173： 植物组织培养的步骤有哪些? - ？
郟罗百宏：[答案] 准备无菌培养基,培养基里要有无机盐,水,糖类,生长素,细胞分裂素,95%的氧气和5%的二氧化碳 1.把植物的茎尖细胞放到培养基里 2经过脱分化到再分化,到再分化时就要放到阳光充足处,然后就让这棵小树苗沐浴在杰科的阳光下慢慢成长...

广丰县18787296173： 植物组织培养的过程是什么? - ？
郟罗百宏：[答案] 根据植物细胞具有全能性这个理论,近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术——植物的组织培养技术植物组织培养的简单过程如下:剪接植物器官或组织——经过脱分化(也叫去分化)形成愈伤组织——再经过再分化...

广丰县18787296173： 植物组织培养一般的的流程 - ？
郟罗百宏： 植物组织培养过程:取材、去分化(或脱分化)形成愈伤组织、再分化形成试管苗、移栽发育成完整植物体.

广丰县18787296173： 植物组织培养一般步骤? - ？
郟罗百宏： 1、首先选择用于组培的材料 2、材料处理,洗净灭菌 3、拟定要用的培养基配方,配置好培养基 4、接种,在无菌台上操作 5、培养,观察现象

广丰县18787296173： 植物细胞与组织培养的基本过程包括哪些步骤 - ？
郟罗百宏： 植物组织培养包括2个过程,脱分化和再分化. 1.外植体(被培养的组织块--叶片碎片、茎尖、幼胚等或细胞--去壁的叶肉细胞)细胞恢复分裂,形成大量的细胞--愈伤.这个过程是脱分化.由于是已经成熟的细胞脱离了成熟细胞的状态,回到类似胚胎阶段的状态,故称脱分化. 2.愈伤组织的细胞经过诱导,分化形成根、茎、叶等器官甚至形成类似种子中的胚一样的结构--胚状体(体胚),这个过程就是再分化.

广丰县18787296173： 组织培养的一般过程是怎样的? - ？
郟罗百宏： 解释给高中生 植物细胞组织培养 一.实验目的植物细胞和组织培养的技术性强,要求无菌操作,通过本实验可初步掌握常规的组织培养技术,加深对无菌操作的了解. 二.实验原理植物的全能性:植物体的任何一个细胞都具有生长分化成为一...

广丰县18787296173： 植物组织培养操作的过程 - ？
郟罗百宏： 组培室标准操作程序 一 生产环境1 工作人员进入组培室必须穿工作服,包括更换拖鞋、穿白大褂,接种人员还要带帽、带口罩. 2 所有人员在组培室内不准高声喧哗、打闹. 3 工作期间,各生产房间要关闭房门,尤其是接种间;工作人员出入...