请教Southern Blot杂交的原理，步骤及应用
1、原理：
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。
一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量。
2、应用：
（1）遗传病诊断；
（2）DNA图谱分析；
（3）检测样品中的DNA及其含量：先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离，然后进行杂交。这样可确定杂交靶分子的大小。
（4）PCR产物分析。
扩展资料
Southern印迹杂交技术的过程：
Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：
一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；
二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。
早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后，经毛细管的虹吸作用，转移到硝酸纤维膜上。印迹方法如电转法、真空转移法；滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜（如APT、ABM纤维素膜）等。
利用Southern印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片断长度多态性分析（RFLP）等。
参考资料来源：百度百科-Southern印迹杂交技术
步骤
1．琼脂糖电泳
（1）取一定量的待测DNA样品，用适当的限制性内切酶酶切。DNA的量根据样品的种类及实验目的的不同而异，对于克隆片段的限制性内切酶图谱分析，取0.1-0.5μg即可；而对于鉴定基因组DNA中的单拷贝基因序列，则需要10～20μg；当采用寡核苷酸探针或探针的比放射性活性较低时，则需要30～50μg。
（2）酶切完毕，在琼脂糖凝胶中电泳。
（3）电泳结束后，EB染色，长波紫外线下观察电泳结果及照相。
2．印迹转移
（1）切胶并作标记（左下角切除），以便于定位，然后将凝胶置于一容器中。
（2）将凝胶浸泡于适量的变性液中，室温下放置1h 使之变性，不间断地轻轻摇动。
（3）将凝胶用去离子水漂洗1次，然后浸泡于适量的中和液中30 min，不间断地轻轻摇动。更换中和液，继续浸泡15 min。
（4）将滤纸，硝酸纤维素膜NC膜(以下简称NC膜）剪成与胶同样大小，NC膜浸入转移buffer中平衡30 min。
（5）按右图操作：逐层铺平，各层之间勿留有气泡和皱折。
（6）虹吸转移12-16h。
3．固定DNA
（1）取出转移后的NC膜，用滤纸吸干NC膜，NC膜光面朝上平铺于变性液中变性5min。
（2）用相同的方法将NC膜平铺在中性液上，中和两遍，每遍5min。
（3）将膜夹在两张干燥滤纸间，80℃烘烤1-2h。
4．预杂交
（1）将膜浸入5×SSC 中2min，将膜放入干净的塑料袋中。
（2）将预杂交液事先在65℃ 预热，然后将10 ml 预杂交液加入袋中，封口。
（3）65℃预杂交1h 以上，不时摇动。
5．杂交
（1）取出杂交袋，剪去一角去除杂交液后，加入5ml杂交液及5μl 变性探针，排除气泡后封口。
（2）将杂交袋放入65℃ 水中杂交过夜。
6．按下列条件洗膜
2×SSC, 0.1%SDS 50ml 室温 5min /2次
0.1×SSC, 0.1%SDS 50ml 65℃ 15min /2次
7．免疫酶联检测
（1）偶联反应
①用中和液 洗膜2min，室温。
②用封闭液50ml洗膜30min，室温，轻摇。
③用中和液将稀释抗体-Dig –Ap 至750 mU/ml ，将膜封入杂交袋，加入5 ml稀释抗体轻摇50min。
④用中和液 50 ml洗膜，10min ×2次，室温，轻摇，除去未结合的抗体。
（2）显色反应
①用平衡液20 ml平衡膜2min。
②将膜装入杂交袋中，加入5ml显色液，避光30min 左右，当出现颜色时不要晃动。
③用TE洗膜终止反应。
④80℃烤干。
应用
遗传病诊断，DNA图谱分析，检测样品中的DNA及其含量，PCR产物分析等。
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请教Southern Blot杂交的原理,步骤及应用
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嵩明县15515108975： 谁能详细地说一下southern blot的的原理和有什么应用吗? - ？
卫和畅泰： southern blot是Southern这个人发明的,是“核酸杂交技术”结合“核酸印迹技术”的经典实验.大致原理是:不同来源的核酸分子,经变性、退火处理,当它们之间有碱基互补配对时,就可能会结合在一起.形成DNA/DNA,DNA/RNA杂交体....
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嵩明县15515108975： Southern blot和原位杂交的区别 - ？
卫和畅泰： 可以在原来的基因两端寻找两个酶切问点,通过多全基因组酶切的片段进行southern杂交.全基因族酶切,在不同长度的片段利用探针检测,如果出现2个或多个点,说明是多拷贝,如果是单一点,则说明是单拷贝.外源DNA和原基因都要设计探针,只有外源DNA的探针出现杂交则说明是原位敲除.
嵩明县15515108975： southern - blot与northern - blot的区别 - ？
卫和畅泰： Southern blot 是分析DNA的杂交技术,Northern blot是分析RNA的,而Western 和Northerin原理基本相同,都是利用DNA或RNA的复性过程,但过程上也有区别,
嵩明县15515108975： northern印迹杂交的介绍 - ？
卫和畅泰： Northern印迹杂交(Northern blot).这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法.DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹杂交,与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot.
嵩明县15515108975： 细胞生物学里Northern blot是什么意思 - ？
卫和畅泰： Southern Blotting: DNA探针/DNA的杂交 Northern Blotting: DNA探针/RNA的杂交 Western Blotting: 蛋白/蛋白的印迹
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嵩明县15515108975： southern blot 中的探针长度对杂交结果是否有影响 - ？
卫和畅泰： 当然有影响了,大概在800bp左右会效果好,探针太短会出现很多非特异性条带,太长会增加杂交的难度
