药典中水蛭测定中,滴加凝血酶至凝固是什么意思

作者&投稿:容祁 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
~ 水蛭(hirudo)是水蛭科动物蚂蟥(whitmaniapigrawhitman)、水蛭(hirudonipponicawhitman)或柳叶蚂蟥(whitmaniaacranulatawhitman)的干燥全体,具有破血、逐瘀、通经的功效,常用于治疗症瘕痞块、血瘀经闭、跌扑损伤等症。作为活血化瘀中药的代表,水蛭在临床治疗脑血栓、冠心病、脑水肿等疾病中应用广泛,其有效成分主要是抗凝血物质水蛭素(hirudin)。水蛭素能阻止凝血酶对血小板的作用,抑制血小板因凝血酶刺激而释放物质,从而延缓或阻止血液凝固。
研究表明,水蛭素是由65个氨基酸和3个二硫键组成的多肽,分子量约为7000。在干燥状态下稳定存在;在室温水中稳定6个月,80℃下加热15分钟不被破坏;提高溶液pH值,其稳定性下降;在20℃下,0.1mol/L的HCl或NaOH中可稳定15分钟。水蛭素与凝血酶的亲和力极强,1μg水蛭素可中和5μg凝血酶,相应摩尔比为1:1,即中和一个国际单位(NIH单位)的凝血酶需要一个国际单位(IAT-U)的水蛭素。
在药典中,对水蛭素的测定通常以水蛭素含量为指标,通过比较不同浓度、温度和提取时间的水蛭提取物的效果,选择最佳工艺路线,并确定水蛭提取制备工艺。
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 仪器:Sigma单道移液器;RE-52A型旋转蒸发器(上海亚荣公司);Sigma4K-15高温冷冻离心机;自动酸碱滴定仪DL53(Mettler Toledo,Switzerland)。
1.1.2 药物与试剂:水蛭购自北京松兰中药饮片有限公司,经该公司主任中药师蔡长德鉴定为水蛭科动物蚂蟥干燥全体;纤维蛋白原(fibrinogen):Sigma;凝血酶(thrombin):Sigma。
1.2 实验方法
1.2.1 水蛭素的测定方法:取纤维蛋白原0.25g,溶于50ml的Tris-HCl缓冲液(pH≈8)中,配制得0.5%的纤维蛋白原溶液。稀释凝血酶至5NIH/ml。取0.2ml纤维蛋白原溶液,加入20μl水蛭素提取液,并滴加凝血酶至凝固,计算水蛭素含量=(凝血酶浓度×凝血酶用量)/水蛭素提取液体积。
1.2.2 乙醇浓度的选择:称取水蛭粗粉10g,分别用不同浓度的乙醇进行提取,乙醇含量分别为0%,30%,50%,70%,90%,提取温度定为60℃,提取时间1.5小时,过滤,回收乙醇,样品定容至25ml。分别测定样品中水蛭素含量。
1.2.3 温度条件的选择:由于水蛭素只能在80℃下稳定存在15分钟,因此在选取温度时,应尽量避免温度过高造成水蛭素失活。实验选用50℃,60℃,70℃进行提取。
1.2.4 提取时间的选择:称取水蛭粗粉10g,用70%的乙醇,在60℃下分别提取1小时、1.5小时、2小时,分别测定提取样品的水蛭素含量。
2. 结果
2.1 乙醇浓度的选择:从表1数据可以看出,不同浓度的乙醇对水蛭的提取效果有较大影响。水蛭素的含量随乙醇浓度的提高而增加,在70%~80%的乙醇浓度下,获得较好的提取效果。水蛭素是一种可溶于水和乙醇等有机溶剂的蛋白质,因此综合考虑,70%~80%的乙醇浓度是较好的提取浓度。
表1 不同浓度乙醇的提取结果


药典中水蛭测定中,滴加凝血酶至凝固是什么意思
1.2.1 水蛭素的测定方法:取纤维蛋白原0.25g,溶于50ml的Tris-HCl缓冲液(pH≈8)中,配制得0.5%的纤维蛋白原溶液。稀释凝血酶至5NIH\/ml。取0.2ml纤维蛋白原溶液,加入20μl水蛭素提取液,并滴加凝血酶至凝固,计算水蛭素含量=(凝血酶浓度×凝血酶用量)\/水蛭素提取液体积。1.2.2 乙醇浓度...

水蛭含量测定凝固终点怎么判
1、最近公开了一种基于便携式XRF的水蛭中元素含量测定方法,对水蛭样品进行简单预处理,其中包括烘干,粉碎,过筛以及压实处理,对标准样品进行便携式XRF法标定以及实验室方法标定,通过比对PXRF法结果和实验室方法结果建立PXRF读数的分段线性回归校准曲线,应用校准曲线方程可校准未知元素含量水蛭样品的PXRF读数以...

2020药典水蛭含量计算公式是什么
C1×V1。中国药典中水蛭素含量计算方法为:C1×V1。C1:凝血酶溶液的浓,V1:凝血酶的体积。

水蛭在哪年被载入《中华人民共和国药典》
1963年版《中国药典》增设中药部分,将水蛭作为药物品种列入。最初起草的“水蛭”草案中仅收录了水蛭科动物宽体金线蛭作为水蛭的药用品种。水蛭,俗名蚂蟥,在《神农本草经》中已有记载,具有很高的药用价值;在内陆淡水水域内生长繁殖,是中国传统的特种药用水生动物,其干制品泡制后中医入药,具有治疗中风、...

贝加尔湖水蛭名典鉴别
药用时仅需选取水中小型水蛭,与生长在石上的石蛭和泥中的泥蛭有所区别,后者头尖腰粗,颜色为赤。宋代寇宗奭提到,当时人将大水蛭称为马鳖,黄腹者称为马蟥。到了明代,《本草蒙筌》确认了水蛭为马蝗蜞,明确指出入药时应选择小型水蛭。清代的《本草从新》则简化了称谓,直接称之为马蟥。

水蛭是什么 水蛭是什么东西
1、水蛭,俗名蚂蟥,在《神农本草经》中已有记载,具有很高的药用价值;在内陆淡水水域内生长繁殖,是中国传统的特种药用水生动物,其干制品泡制后中医入药,具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、跌打损伤等功效。近年新发现水蛭制剂在防治心脑血管疾病和抗癌方面具有特效。它在历史上以自然捕捞为主,因近年...

水蛭是什么东西呢?
水蛭亦称医蛭,俗称水蚂蝗,分布于世界各地,共有300多种,我国有100多种。 宽体金线蛭、茶色蛭及日本医蛭干燥的动物全体被《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)认定为中药药材。分布情况:中国大部地区的湖泊、池塘以及水田中均有生产。主产于山东微山、东平、南阳湖等湖中,以微山湖产量最大,...

《中国药典》对黄曲霉毒素的限量进行了规定,其检查的成分有
有第一法和第二法,并规定当测定结果超出限度时,采用第二法进行确认。规定每1000g样品中含黄曲霉素B1不得过5μg,黄曲霉毒素G2、G1、B2和B2的总量不得过10μg。《中国药典》规定进行黄曲霉毒素限量检查的药材有:大枣、水蛭、地龙、肉豆蔻、全蝎、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海、...

曾有人跟我提过水蛭素,当时没在意,水蛭素到底是什么?有怎么样的作用...
水蛭素是水蛭(Leech)及其唾液腺中已提取出多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分,它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽)。作用:水蛭含有丰富的水蛭素,水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用,是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂。 水蛭素具有极强的抑制凝血作用和抗血栓...

有谁知道水蛭素是什么东西?水蛭素是拿来干什么的?
(1)水蛭,通常被称为蚂蟥,属于蛭纲动物,是我国传统中药材之一。历史上的《神农本草经》以及现代的《中国药典》都对水蛭有所记载,认为它具有破血、逐瘀、通经等作用。在某些国家和我国,活体水蛭在外科手术中得到了应用。(2)水蛭,民间亦称蚂蟥,学名为水蛭,主要生活在淡水环境中,如水库、沟渠、...

临朐县19495167030: 水至的功能与作用? -
臧府优泌: 1、水蛭素的抗凝抗栓效果,取决于其在血液中的浓度,测定其血浓度的方法,主要是通过测定血液凝固时间或用底质发色的方法,求出它与过量的凝血酶反应后,残存的凝血酶的量.也有用放射性标记法和免疫法来测定. 2、给狗、兔和大鼠...

临朐县19495167030: 65的因数有几个 在1到100各数中,2的倍数有几个 在1到100各数中,既是2的倍数,又是5的倍数有几个 -
臧府优泌: 65的因数有4个(1,5,13,65) 在1到100各数中,2的倍数有50个在1到100各数中,既是2的倍数,又是5的倍数有10个...

临朐县19495167030: 蚂蟥有什么药物作用? -
臧府优泌: 水蛭前后端各有一个吸盘,叮人时在皮肤上切开一个“Y”开伤口.由于它的唾液里含有水蛭素,可以阻止血液凝固,所以它边吸血边分泌唾液,血液也就不会凝固.它身体虽小,而食量很大,因为它的消化道里有许多盲囊,能够贮存大量食物...

临朐县19495167030: 柠檬酸钠和水蛭素的抗凝机理是什么? -
臧府优泌: 血浆中含纤维蛋白原、血小板遇到粗糙的血管壁伤口,就被破坏并释放出促使血液凝固的凝血酶.这种酶的前身是凝血酶原,在Ca2+参与下,凝血酶原激活物可催化凝血酶原转化为具有活性的凝血酶.在凝血酶、Ca2+和其它一些因子的作用下...

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臧府优泌: 水蛭素的医药学意义 世界上不少国家在古代都有用医蛭的吸血习性来给病人放血,特别是在欧洲曾大量采用. 许多地方采集医蛭,甚至在池中人工培养.我国对医蛭的利用更早,古籍上记载有把饥饿的蚂蟥装入竹筒,扣在洗净的皮肤上,令...

临朐县19495167030: 水蛭的唾液中有防止血液凝固的物质叫什么 -
臧府优泌: 水蛭素是水蛭及其唾液腺中已提取出的多种活性成分中活性最显著并且研究得最多的一种成分,它是由65—66个氨基酸组成的小分子蛋白质(多肽),水蛭素对凝血酶有极强的抑制作用,是迄今为止所发现最强的凝血酶天然特异抑制剂.

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