聚丙烯酰胺凝胶电泳实验操作过程中，应注意哪些事项？
（1）由于与凝胶聚合有关的硅橡胶称、玻璃板表面不光滑洁净，在电泳时会造成凝胶板与玻璃板或硅橡胶条剥离，产生气泡或滑胶；剥胶时凝胶板易断裂，为防止引现象，所用器材均应严格地清洗。硅橡胶条的凹槽、样品槽模板及电泳槽用泡沫海绵蘸取“洗洁净”仔细清洗。玻璃板浸泡在重铬酸钾洗液3～4h或0.2mol/L KOH的酒精溶液中20min以上，用清水洗净，再用泡沫海绵蘸取“洗洁净”反复刷洗，最后用蒸馏水冲洗，直接阴干或用乙醇冲洗后阴干。
（2）安装电泳槽和镶有长、短玻璃板的硅橡胶框时，位置要端正，均匀用力旋紧固定螺丝，以免缓冲液渗漏。样品槽板梳齿应平整光滑。
（3）在不连续电泳体系中，预电泳只能在分离胶乡合后进行。洗净胶面后才能制备浓缩胶。浓缩胶制备后，不能进行预电泳，以充分利用浓缩胶的浓缩效应。
（4）电泳时，电泳仪与电泳槽间正、负极不能接错，以免样品反方向泳动，电泳时应选用合适的电流、电压，过高或过低无可影响电泳效果。
（5）SDS纯度：在SDS-PAGE中，需高纯度的SDS，市售化学纯SDS需重结晶一次或两次方可使用。重结晶方法如下：称20g SDS放在圆底烧瓶中，加300ml无水乙醇及约半牛角匙活性碳，在烧瓶上接一冷凝管，在水浴中加热至乙醇微沸，回流约10min，用热布氏漏斗趁热过滤。滤液应透明，冷却至室温后，移至-20℃冰箱中过夜。次日用预冷的布氏漏斗抽滤，再用少量-20℃预冷的无水乙醇洗涤白色沉淀3次，尽量抽干，将白色结晶置真空干燥器中干燥或置40℃以下的烘箱中烘干。
对的。用直尺分别量取各个标准分子量的条带到凝胶顶端的距离，计算各个条带的相对迁移率（
mR =样品迁移距离（cm）/染料迁移距离（cm）），然后 以标准蛋白质分子量的对数对相对迁移率作图，得到标准曲线；最后根据待测样品的相对迁移率，从标准曲线上查出其分子量。
二、加样时要注意：1.每空的上样量不能过大，以免样品溢出，造成各泳道相互污染;
2.为了避免边缘效应，在未加样的泳道加入等量的样品缓冲液。注意事项
（1）由于与凝胶聚合有关的硅橡胶称、玻璃板表面不光滑洁净，在电泳时会造成凝胶板与玻璃板或硅橡胶条剥离，产生气泡或滑胶；剥胶时凝胶板易断裂，为防止引现象，所用器材均应严格地清洗。硅橡胶条的凹槽、样品槽模板及电泳槽用泡沫海绵蘸取“洗洁净”仔细清洗。玻璃板浸泡在重铬酸钾洗液3～4h或0.2mol/L KOH的酒精溶液中20min以上，用清水洗净，再用泡沫海绵蘸取“洗洁净”反复刷洗，最后用蒸馏水冲洗，直接阴干或用乙醇冲洗后阴干。
（2）安装电泳槽和镶有长、短玻璃板的硅橡胶框时，位置要端正，均匀用力旋紧固定螺丝，以免缓冲液渗漏。样品槽板梳齿应平整光滑。
（3）在不连续电泳体系中，预电泳只能在分离胶乡合后进行。洗净胶面后才能制备浓缩胶。浓缩胶制备后，不能进行预电泳，以充分利用浓缩胶的浓缩效应。
（4）电泳时，电泳仪与电泳槽间正、负极不能接错，以免样品反方向泳动，电泳时应选用合适的电流、电压，过高或过低无可影响电泳效果。
（5）SDS纯度：在SDS-PAGE中，需高纯度的SDS，市售化学纯SDS需重结晶一次或两次方可使用。重结晶方法如下：称20g SDS放在圆底烧瓶中，加300ml无水乙醇及约半牛角匙活性碳，在烧瓶上接一冷凝管，在水浴中加热至乙醇微沸，回流约10min，用热布氏漏斗趁热过滤。滤液应透明，冷却至室温后，移至-20℃冰箱中过夜。次日用预冷的布氏漏斗抽滤，再用少量-20℃预冷的无水乙醇洗涤白色沉淀3次，尽量抽干，将白色结晶置真空干燥器中干燥或置40℃以下的烘箱中烘干。
（6）用SDS处理蛋白质样品时，每次都会在沸水溶中保温3～5min，以免有亚稳聚合物存在。
（7）标准蛋白质的相对迁移率最好在0.2～0.8之间均匀分布。值得指出的是，每次测定未知物分子量时，都应同时用标准蛋白制备标准曲线，而不是利用过去的标准曲线。用此法测定的分子量只是它们的亚基或单条肽链的分子量，而不是完整的分子量。为测得精确的分子量范围，最好用其他测定蛋白分子量的方法加以校正。此法对球蛋白及纤维状蛋白的分子量测定较好，对糖蛋白，胶原蛋白等分子量测定差异较大。
（8）对样品的要求：应采纳低离子强度的样品。如样品中离子强度高，则应透析或经离子交换除盐。加样时，应保持凹形加样槽胶面平直。加样量以10～15μl为宜，如样品系较稀的液体状，为保证区带清晰，加样量可增加，同时应将样品溶解液浓度提高二倍或更高。
（9）由于凝胶中含SDS，直接制备干板会产生龟裂现象。如需制干板，则用25%异丙醇内含7%乙酸浸泡，并经常换液，直到SDS脱尽（约需2～3天），才可制备干板。为方便起见，常采用照像法，保存照片。
一、凝胶制备时：TEMED和AP要后加，加入后用玻棒缓慢匀速的混匀，避免有气泡产生；然后马上注入电泳槽内，插入梳子，这时也要匀速，但不能太慢，因为太慢的话底部的胶会比上面的胶凝的快，影响胶的质量，同时小心有气泡；
二、加样时要注意：1.每空的上样量不能过大，以免样品溢出，造成各泳道相互污染;
2.为了避免边缘效应，在未加样的泳道加入等量的样品缓冲液。
一、凝胶制备时：TEMED和AP要后加，加入后用玻棒缓慢匀速的混匀，避免有气泡产生；然后马上注入电泳槽内，插入梳子，这时也要匀速，但不能太慢，因为太慢的话底部的胶会比上面的胶凝的快，影响胶的质量，同时小心有气泡；
二、加样时要注意：1.每空的上样量不能过大，以免样品溢出，造成各泳道相互污染;
2.为了避免边缘效应，在未加样的泳道加入等量的样品缓冲液。
1、电泳槽中的胶板不要夹得太紧，不然电泳泳道易发弯。
2、染色液要混匀，染色时间不宜过长，否则不易区分目的带。
3、点样时一定要点上marker。
看电极有没有弄反了
sds-page凝胶电泳原理
SDS-PAGE凝胶电泳原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂N，N’一亚甲基双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵，N，N，N’，N’四甲基乙二胺作用下，聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。SDS-PAGE凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立，其原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联...
凝丙烯酰胺凝胶电泳 胶体结果如何判断正负极?
正电泳是指荷电的胶体颗粒在电场中的移动。凝丙烯酰胺凝胶电泳 胶体结果如何判断正负极，有六种方法。方法一：根据两极du材料判断。一般活泼金属zhi为负极，活泼性较弱的金属或能导dao电的非金属为正极；方法二：根据电极现象判断。一般情况下功夫电极逐渐溶解为负极，电极增重可放出气体的为正极；方法三...
试述聚丙烯酰胺凝胶电泳原理。
利用聚丙烯酰胺凝胶作电泳的支持物来分离蛋白质、核酸等大分子化合物的聚丙烯酰胺凝胶电泳法。聚丙烯酰胺单体(Acr)与交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂过硫酸铵或维生素B2作用下聚合交联而形成三维网状结构凝胶。在催化过程中同时加入四甲基乙二胺作为加速剂。聚丙烯酰胺凝胶不但可以作为电泳支持物，同时具有...
SDS-PAGE相关知识
注：丙烯酰胺是神经毒剂，应戴手套操作。电泳时的试剂应达到电泳纯，并使用重蒸水配制溶液。（2）分离胶配方 A液\/ml B液\/ml 重蒸水\/ml 10%AP\/μl TEMED\/μl x\/30×10=x\/310\/4=2.510-x\/3-2.5约503～5 根据聚合的快慢来调节AP和TEMED的用量，使凝胶在20～60min...
分辨率最高的电泳
非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。而SDS-PAGE仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。该技术最初由shapiro于1967年建立，他们发现在样品介质和丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂（...
谁能告诉sds-聚丙烯凝胶电泳实验过程??
还有一本叫蛋白质电泳的工具书丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。 聚丙烯酰胺凝胶有以下优点: ①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳...
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理及应用,主要是应用哦,查了很多资料都没...
丙烯酰胺聚合成网状结构。蛋白与SDS形成聚合体，消除了蛋白本身的电荷，统一带负电，那么在电泳中它的泳动速度只跟分子量大小有关。从而能达到分离不同分子量蛋白的目的。主要用在检定蛋白混合物中的目的蛋白含量，或是电泳后用于WB分析。
聚丙烯酰胺凝胶电泳是利用什么原理制成的?
过硫酸铵就是引发剂，而TEMED可以催化过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。聚丙烯胺凝胶由单体丙烯酰腋甲叉双丙烯酰胺聚合而成，催化聚合的常用方法有两种: 化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵(AP)为催化剂，以四甲基乙二胺(TEMED)为加速剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳简称PAGE ，是以聚丙...
聚丙烯酰胺凝胶电泳加速剂是什么
聚丙烯酰胺凝胶电泳加速剂是聚丙烯酰胺凝胶的一种加速反应剂，聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N、N-甲叉双丙烯酰胺，在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。
解释聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理,最好清晰点
聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(简称Acr)和交联剂亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂的作用下，聚合交联而成的含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。还要结合聚丙烯酰胺凝胶电泳三个不连续，即：凝胶孔径不同、缓冲液pH不同、缓冲液离子成分不同 和三个效应：浓缩效应、电荷效应、分子筛效应来一起说 ...
舌哀盐酸： 电泳法SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法操作法(1)制胶用30%丙烯酰胺溶液分离胶缓冲液20%十二烷基硫酸钠溶液10%过硫酸铵溶液(新鲜配制)四甲基乙二胺水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分离胶液,灌入模具内至一定高度(剩余体积留作制备浓缩胶用),用水封顶,聚合完毕,倾去水层
周至县13216216718： 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验步骤是什么? ？
舌哀盐酸： 1. 在两块玻璃板间夹以垫条,用手夹住玻璃板放入电泳槽主体内,缺口朝外,再插入斜楔板.
周至县13216216718： 使用SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中,不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于() - ？
舌哀盐酸：[选项] A. 电荷的多少 B. 分子的大小 C. 肽链的多少 D. 分子形状的差异
周至县13216216718： 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验第一步该怎么做? ？
舌哀盐酸： 1)丙烯酰胺单体贮液:14.55g丙烯酰胺加上0.45g N,N'-甲叉双丙烯酰胺,先用40mL双蒸水搅拌溶解,直到溶液变成透明,再用双蒸水稀至50mL,过滤.用棕色瓶4°C保存备用.
周至县13216216718： 15%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的步骤 - ？
舌哀盐酸： 实验步骤:凝胶的制备:1、 清洗干净两块玻璃板,晾干后按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出.2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60℃角.把玻璃板在灌胶支架上...
周至县13216216718： SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量中,如何做好聚丙烯酰胺垂直板电泳?哪些是关键步骤? - ？
舌哀盐酸： 一,清洁好制胶的玻璃板,一定要尽量用去离子水冲干净,以除去肉眼可见或不可见的杂质 二,根据你目的蛋白的分力量,选择合适的分离胶和浓缩胶 三,如果要获得最佳的胶图,可以一直使用恒流直至电泳结束,但要根据实际情况,不能把电流设置过小,防止电泳时间过长,蛋白在胶上会弥散,也不能设置太大,这样产热的原因,胶在局部位置可能会融化 四,蛋白尽量选择在胶中间的泳道上样,避免边缘效应 五,上样体积不宜过大,以上样孔1/3体积为最宜,相邻泳道最好保持体积一致 最后,如果你使用bio-rad等商业化电泳体系,自动忽略以上
周至县13216216718： SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的实验中.当分离胶加完之后为什么需要在上面加一层水呢?电极 - ？
舌哀盐酸： 加一层水称为水封 目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直. 并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上.甘氨酸是为了解离出甘氨酸根离子,甘氨酸根离子可以稳定的界面,使蛋白聚集在移动界面附近,浓缩在一起.样品液煮沸这个问题我个人认为是可以商榷的,因为理论上煮沸可以使SDS和蛋白更快更好的结合,以便于SDS-PAGE的进行.但是有些蛋白似乎不煮沸直接上样结果更好.对于非还原Loading buffer(即不含巯基乙醇)的样品,一般是不要煮沸的.长时间的电泳会使正极变酸,负极变碱.
周至县13216216718： SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质的实验中.当分离胶加完之后为什么需要在上面加一层水呢?电极缓冲液中甘氨酸的作用是什么呢?样品液为何要在... - ？
舌哀盐酸：[答案] 加一层水称为水封目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直.并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上.甘氨酸是为了解离出甘氨酸根离子,甘氨酸根离子可以...
周至县13216216718： 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的注意事项 - ？
舌哀盐酸： 1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关,还和蛋白质的分子量以及分子形状有关,其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子,要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统; 2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性,所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度; 3. 蛋白质的分子量较大,则电泳时间可以适当延长,以使目的蛋白质有足够的迁移率和其它的蛋白质分开,反之亦然; 4. 变性样品的离子强度不能太高(I<0.1mM).上样buffer中没有SDS之外,加入样品后不能加热.
周至县13216216718： SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的实验中.当加完分离胶后,为何要在其上加一层水? - ？
舌哀盐酸： 这个步骤称为水封目的是隔绝空气使催化反应快速进行,进而形成凝胶,还可使分离胶上沿平直. 并且加水后,保持分离胶表面的平整性,使浓缩胶和分离胶都处于同一水平面上.
