聚丙烯酰胺凝胶制备
聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配制
配制 Tris- 甘氨酸 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
溶液成分 不同体积（ ml ）凝胶液中各成分所需体积（ ml ）
5
10
15
20
25
30
40
50
6% SDS-PAGE
水
2.6
5.3
7.9
10.6
13.2
15.9
21.2
26.5
30% 丙烯酰胺溶液
1
2
3
4
5
6
8
10
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10% 过硫酸氨
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.004
0.008
0.012
0.016
0.02
0.024
0.032
0.04
8% SDS-PAGE
水
2.3
4.6
6.9
9.3
11.5
13.9
18.5
23.2
30% 丙烯酰胺溶液
1.3
2.7
4
5.3
6.7
8
10.7
13.3
1.5 mol/L Tris (pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5
6.3
7.5
10
12.5
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10% 过硫酸氨
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.003
0.006
0.009
0.012
0.015
0.018
0.024
0.03
10% SDS-PAGE
水
1.9
4
5.9
7.9
9.9
11.9
15.9
19.8
30% 丙烯酰胺溶液
1.7
3.3
5
6.7
8.3
10
13.3
16.7
1.5 mol/L Tris (pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5
6.3
7.5
10
12.5
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10% 过硫酸氨
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0.016
0.02
12% SDS-PAGE
水
1.6
3.3
4.9
6.6
8.2
9.9
13.2
16.5
30% 丙烯酰胺溶液
2
4
6
8
10
12
16
20
1.5 mol/L Tris (pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5
6.3
7.5
10
12.5
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10% 过硫酸氨
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0.016
0.02
15% SDS-PAGE
水
1.1
2.3
3.4
4.6
5.7
6.9
9.2
11.5
30% 丙烯酰胺溶液
2.5
5
7.5
10
12.5
15
20
25
1.5 mol/L Tris (pH8.8)
1.3
2.5
3.8
5
6.3
7.5
10
12.5
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
10% 过硫酸氨
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.4
0.5
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.008
0.01
0.012
0.016
0.02
聚丙烯酰胺易溶于冷水，质量分数超过10%以后，会形成凝胶状结构
(1)30%丙烯酰胺溶液 取丙烯酰胺60g与亚甲基双丙烯酰胺1.6g，加水至 200ml，滤纸滤过，避光保存。 (2)分离胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷36.3g、加水70ml，用盐酸调节pH值至8.8，加水至100ml。 (3)浓缩胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、加水70ml，用盐酸调节pH值至6.8，加水至100ml。 (4)电泳缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷6.0g、甘氨酸28.8g、十二烷基硫酸钠1.0g，加水至1000ml。 3.操作法 (1)制胶 用30%丙烯酰胺溶液－分离胶缓冲液－20%十二烷基硫酸钠溶液－10％过硫酸铵溶液（新鲜配制）-四甲基乙二胺-水(5.0∶1.5∶0.08∶0.1∶0.01∶5.3)制成分离胶液，灌入模具内至一定高度（剩余体积留作制备浓缩胶用），用水封顶，聚合完毕，倾去水层。再用30%丙烯酰胺溶液-浓缩胶缓冲液-20%十二烷基硫酸钠溶液-10％过硫酸铵溶液-四甲基乙二胺-水(0.8∶1.3∶0.025∶0.05∶0.005∶2.4)制成浓缩胶液，灌在分离胶上，插入样品梳（如为圆盘电泳，用水封顶），待浓缩胶液聚合后，小心除去样品梳或水。实验中为什么丙烯酰胺和过硫酸铵要分次加入
实验中丙烯酰胺和过硫酸铵要分次加入的原因：过硫酸铵就是引发剂，而TEMED可以催化过硫酸铵产生自由基，从而加速丙烯酰胺凝胶的聚合。AP为催化剂，TEMED为加速剂，TEMED可以加速AP释放游离O原子（自由基），催化聚丙烯酰胺单体聚合成网状结构。但是两者的量一定适宜，否则会有烧胶或带变形的可能。在注入分离...
氯化亚铁在丙烯酰胺凝胶中起何作用?
氯化亚铁可以促进丙烯酰胺凝胶。氯化亚铁水解，形成氢氧化亚铁，被氧化形成氢氧化铁胶体，具有巨大的表面积，可以促进丙烯酰胺凝胶的形成。二者相辅相成，在废水处理中，起不可缺少的作用。
sds-page凝胶电泳原理
SDS-PAGE凝胶电泳原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂N，N’一亚甲基双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵，N，N，N’，N’四甲基乙二胺作用下，聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。SDS-PAGE凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立，其原理：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联...
生化实验中常用的凝胶有哪些各有何特征
凝胶的网孔大小和凝胶的机械强度取决于琼脂糖浓度。因此琼脂糖凝胶可作为分子筛，常用于凝胶层析和电泳。聚丙烯酰胺凝胶：丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺交联剂在催化剂(如过硫酸铵)作用下形成的凝胶。凝胶孔径大小可以通过制备时所使用的浓度和交联度控制。常用做层析介质、电泳分离支持材料等。
丙烯酰胺在水中熔化后,用水蒸气加热,会产生什么样的东西?
丙烯酰胺分子式为CH2=CHCONH2，物化性质参楼上 丙烯酰胺是高分子聚合反应常用单体，由于其酰胺基的存在，该单体具有一定的亲水性。溶于水（楼主熔写错了）中由热引发可均聚。形成聚丙烯酰胺（PAM），聚丙烯酰胺水溶液粘度随浓度的增加而急剧上升，浓度超过10%时就形成凝胶体。聚丙烯酰胺是一种水溶性高...
聚丙烯酰胺凝胶的介绍
丙烯酰胺单体和甲叉双丙烯酰胺交联剂按一定比例混合，在催化剂（如过硫酸铵）作用下聚合而成的交叉网状结构的凝胶，使其产生分子筛效应。凝胶孔径大小可以通过制备时所使用的浓度和交联度控制。常用做层析介质、电泳分离支持材料等。
12%的聚丙烯酰胺凝胶显色时间
一个小时。12%的聚丙烯酰胺是它的浓度是12%，它的凝胶显色时间在一个小时内，需要充足的进行反应。聚丙烯酰胺凝胶指的是由丙烯酰胺单体，以次甲基双丙烯酰胺为交联剂。
聚丙烯酰胺凝胶可以保存吗
聚丙烯酰胺凝胶：是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。保存方法：将凝胶多次洗涤后脱水，干燥，可瓶装保存。注意膨化的凝胶不能直接高温烘干，否则会破坏凝胶的分子结构。
谁能告诉sds-聚丙烯凝胶电泳实验过程??
丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。 聚丙烯酰胺凝胶有以下优点: ①聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N,N'甲叉双丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝胶有 格子是带有酰胺侧链的碳-碳聚合物,没有或很少带有离子的...
引起聚丙烯酰胺凝胶未聚合的三点原因
例如，在pH 8.8条件下7％的丙烯酰胺溶液30分钟就能聚合完毕；在 pH 4.3时聚合很慢，要90分钟才能完成。温度与聚合的快慢成正比。通常在室温下就很快聚合，温度升高聚合更快。如将混合后的凝胶溶液放在近0℃的地方，就能延缓聚合。一般来讲，温度过低，有氧分子或不纯物质存在时都能延缓凝胶的聚合。...
初湛可朋： (1)30%丙烯酰胺溶液 取丙烯酰胺60g与亚甲基双丙烯酰胺1.6g,加水至 200ml,滤纸滤过,避光保存. (2)分离胶缓冲液 取三羟甲基氨基甲烷36.3g、加水70ml,用盐酸调节pH值至8.8,加水至100ml. (3)浓缩胶缓冲液 取三羟甲基...
北林区18322374511： 怎样把聚丙烯酰胺制备成凝胶 - ？
初湛可朋： 聚丙烯酰胺易溶于冷水,质量分数超过10%以后,会形成凝胶状结构
北林区18322374511： 聚丙烯酰胺凝胶 配制方法 - ？
初湛可朋： 去百度文库,查看完整内容>内容来自用户:艾渠5*TBE(组份浓度:5*TBE,pH 8.3;配制量:1 L):称取53.9 g Tris,27.5 g硼酸,量取20 ml 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0),置于1 L烧杯中;加入约800 ml超纯水,充分搅拌溶解;加超纯水将溶液定...
北林区18322374511： 怎样制备聚丙烯酰胺凝胶?在制备时,所用试剂都有哪些,配制时各试剂的比例是多少以及在配制过程中都需要注意哪些问题? - ？
初湛可朋：[答案] 聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配制 配制 Tris- 甘氨酸 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液 溶液成分 不同体积( ml )凝胶液中各成分所需体积( ml ) 5 10 15 20 25 30 40 50 6% SDS-PAGE水 2.6 5.3 7.9 10.6 1...
北林区18322374511： 变性聚丙烯酰胺凝胶的制备方法有哪些呢? ？
初湛可朋： 采用回流灌注法灌注凝胶.因制备好的胶室有弹簧夹,将胶室放置在一水平支架上.一人操作时以靠近操作者一侧胶室底角为最低点,左手托住对侧玻璃板中部抬高胶室约30°.右手从低侧短玻璃处缓缓灌注胶液成连续的细流,到达底部后逐步放低胶室,直至灌满,水平放置后插入梳子,6%凝胶聚合常需1~2小时.灌胶中如有气泡形成,调整胶室角度消除气泡后稍放缓灌胶速度常能凑效.
北林区18322374511： 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中凝胶的如何制备呢? ？
初湛可朋： 3. 上述溶液混匀后,用滴管迅速加入两玻璃板间,灌注高度为红色背景下沿线.然后滴上少量水饱和异丁醇,静置约15分钟.
北林区18322374511： 变性聚丙烯酰胺凝胶的制备有哪些步骤? ？
初湛可朋： (1)胶板的清洁是灌胶能否成功的第一关键步骤.反复使用时要将玻璃板和间隔片上凝胶去除干净,彻底洗净后干燥.用乙醇擦拭玻璃板上残留水渍.不能有一点残留的凝胶和残渣,否则灌胶时会产生气泡.
北林区18322374511： 如何制备聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的步骤 - ？
初湛可朋： 在网上你搜你所需要的相应的配方,比如说你需要跑的是DNA,则依据DNA的片段长短选取不同比例的ARC-BIS,然后配制,这些百度都有的,分子生物学课本上也有.配好之后直接灌胶即可.如果你跑的蛋白,则需要配浓缩胶和分离胶
北林区18322374511： 聚丙烯酰胺凝胶的PAM - ？
初湛可朋： 聚丙烯酰胺简称PAM、结构式为[-CH2-CH(CONH2)]n-,分子量100~ 500万.聚丙烯酰胺主要有两种商品形式,一种是粉末状的,另一种是胶体,还有聚丙烯酰胺乳液(上海合成树脂研究所研制).易溶于冷水,速度很慢,高分子量的聚丙烯酰...
北林区18322374511： SDS - 聚丙烯酰胺凝胶原理 - ？
初湛可朋： SDS使蛋白质变性,变成条状分子.消去了分子形状差异.在胶中的移动速度取决于电压和分子量大小. 不同浓度聚丙烯酰胺孔径不同.浓度大的交联程度大,孔径小,分离的分子小. 分子量大的跑得慢,分子量小的跑得快.染色脱色,紫外观察.根据条带可知有几种蛋白.根据marker还可知道蛋白的分子量.
