我现在才开始接触细胞生物学,谁能告诉我一下单克隆抗体制备流程?谢谢!成都这边有哪些生产企业?

作者&投稿:平山 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
制备单克隆抗体的过程~

你好!我是成都正能生物工作人员,你可以在http://t.sina.com.cn/1926705022与我微博联系。单克隆抗体制备试验流程:
1. 免疫动物:三只Balb/c小鼠

2. 佐剂:首先用完全弗氏佐剂(CFA),后用不完全弗氏佐剂(IFA)。

3. 免疫原:蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100μg免疫原。

4. 免疫:用PBS稀释免疫原,然后与相应的佐剂1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂,将该乳剂在小 鼠双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/8的免疫原。接着将1/2的免疫原进行腹腔注射,这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。以后每个星期进行腹腔注射直到达到要求的效价。

5. 第0星期 预采血
完全弗氏佐剂(CFA)混合的100μg抗原免疫小鼠。
第2星期
完全弗氏佐剂(CFA)混合的50μg抗原免疫小鼠。
第3星期
不完全弗氏佐剂(IFA)混合的50μg抗原免疫小鼠。
第4星期
溶解在PBS中的50μg抗原免疫小鼠。
第5星期
取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测,
溶解在PBS中的50μg抗原免疫小鼠。
第X星期
取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测,
溶解在PBS中的50μg抗原免疫小鼠。

6. 杂交瘤融合和筛选:用PEG方法将效价最好的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞F0进行融合。用抗原对融合的杂交瘤克 隆进行筛选,检测它们的特异性和敏感性。ELISA阳性的克隆可用WB检测,筛选出来的克隆至少还需要亚克隆两次。

7. 大规模抗体生产:筛选得到两个克隆最后进行大规模培养(每个克隆1L)或者取腹水(每个克隆5只小鼠)。 用蛋白A/G对培养液或腹水进行纯化,平均每个克隆可以得到3-5mg 抗体。

8. 注意:每个融合平均可以得到900多个克隆,对于多肽抗原可以得到100个左右的ELISA阳性克隆,重组蛋白抗原可以得到100-150个ELISA阳性克隆。亚克隆实验做的越早,越容易保存克隆。因此,为了保存和复苏阳性克隆,尽早进行筛选检测是必需的。

一般生物化学实验书上都有介绍。
成都那边的不了解


我现在才开始接触细胞生物学,谁能告诉我一下单克隆抗体制备流程?谢谢...
6. 杂交瘤融合和筛选:用PEG方法将效价最好的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞F0进行融合。用抗原对融合的杂交瘤克 隆进行筛选,检测它们的特异性和敏感性。ELISA阳性的克隆可用WB检测,筛选出来的克隆至少还需要亚克隆两次。7. 大规模抗体生产:筛选得到两个克隆最后进行大规模培养(每个克隆1L)或者取腹水(...

细胞培养技术必备小知识,新手必看
细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞,这是克隆技术必不可少的环节, 而且细胞培养本身就是细胞的克隆。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术,通过细胞培养既可以获得大量细胞,又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。通过细胞...

中国高中生接触海拉细胞吗
接触。海拉细胞供全球各地的科学家进行医学研究,所以中国高中生接触海拉细胞。海拉细胞是一种用于科学研究的永生细胞系,最早源于美国一位名为Henrietta Lacks的宫颈癌患者。

在细胞生物学之路,是什么让你坚持下来的?
一、细胞生物学。细胞生物学是在显微、亚显微和分子这三个层面上进行研究,其实听到了这个名字之后也是非常显而易见的,他就是和细胞学有关,去研究细胞的结构和功能,对于细胞的研究也有一两百年的历史了。自从列文虎克发明了显微镜之后,细胞研究的道路就慢慢展开了,很多科学家就开始对细胞进行了研究,...

这个世界到底是先有细胞还是先有病毒?
目前普遍认为是先有细胞,才有病毒,愿意是病毒需要寄生于活细胞才能复制。但是我觉得也不一定,有没有可能是先有了病毒再有了细胞:我想了几个愿意 1:我觉得生物的进化是由简单到复杂,没有理由先出现复杂的细胞结构后出现结构简单的病毒结构。2:有人可能会说,病毒没有活细胞怎么可能生存下去?但是...

目前细胞学的研究已进入什么水平
回答:研究细胞结构和功能的生物学分支学科。细胞是组成有机体的形态和功能的基本单位,自身又是由许多部分构成的。关于结构的研究不仅要知道它是由哪些部分构成的,而且要进一步搞清每个部分的组成。相应地,关于功能不仅要知道细胞作为一个整体的功能,而且要了解各个部分在功能上的相互关系。 有机体的生理功能和...

细胞对人体的重要性
在细胞学的启蒙时期,用简单显微镜虽然也观察到许多细小的物体——例如细菌、纤毛虫等,但目的主要是观察一些发育现象,例如蝴蝶的变态,精子和卵子的结构等。直到1827年贝尔发现哺乳类的卵子,才开始对细胞本身进行认真的观察。在这前后研制出的无色差物镜,引进洋红和苏木精作为使细胞核着色的染料以及切片机和切片技术的初创...

动物细胞工程最早起始于细胞融合现象的发现。
细胞融合现象的发现并不是一蹴而就的。在19世纪末,科学家们通过显微镜观察到细胞之间存在一些微小的突起,这些突起被称为“突触”,并且发现它们可以在细胞之间进行接触,从而引发一些化学反应。随后,在20世纪初,研究者们开始研究突触的作用,并提出了一些假说。随着时间的推移,研究者们发现细胞融合不仅...

细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
③穿着容易起静电或吸附灰尘的衣物必须更换为白大褂后才能进入细胞间。④实验开始前需要确定戴的手套没有问题,只要接触过生物安全柜之外的物品,必须及时对手套进行消毒。⑤进入细胞培养间后关好门,坐下来尽量少走动以免影响生物安全柜的风帘。工作开始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶盖。事先要严格检查所...

细胞学和细胞生物学得起源过程
细胞学的起源过程 :细胞(cell,源于拉丁文cella原意为空隙、小室)一词是1667年R.胡克在观察软木塞的切片时看到软木中含有一个个小室而以之命名的。直到1827年К.M.贝尔发现哺乳类的卵子,才开始对细胞本身进行认真的观察。M.J.施莱登在1838年描述了细胞是在一种粘液状的母质中经过一种像是结晶样的...

根河市19741096127: 当前细胞生物学的研究热点 -
轩贤伊甘: 其实现在细胞生物学研究有四大热点:第一,细胞骨架;第二,细胞信号转导及其第二信使的信号放大调节;第三,细胞的增殖和调控及其癌变;第四,细胞的衰老和凋亡,并强调与信号和癌变的联系性. 总体上来说,现在细胞生物学研究就是这么四个热点,其他的就是这四个大的方面的边缘延伸.

根河市19741096127: 本人普通本一,想考清华生物学研究生,请问专业课考细胞生物学好还是生化和分子好,复试应注意些什么. -
轩贤伊甘: 专业课考什么主要根据你自己的兴趣和学习能力决定,比如你感觉自己对细胞感兴趣而且学起来很轻松的话,那就考细胞.细胞、分子、生化这几门很多东西都是想通的,比如细胞学就用到很多分子和生化当中的理论和实验技术.复试的话首先是联系导师,导师在很大程度上决定你能否录取,当然前提是你能上清华的初试线,可以在复试期间提前去清华大学那边面见导师,和实验室的师兄师姐打好关系,表现你的科研热情,当然,复试的一些科目也要有所准备,如专业课、英语口语、实验操作.这些都是初试之后的事,你现在的任务就是好好努力把初试给过了,复试很简单的!祝你成功!不是要赞同呀,要采纳呀大哥,大哥....

根河市19741096127: 生物学包括那些? -
轩贤伊甘: 你现在的状态让我想到了我自己当年的经历.我也是在初中的时候喜欢上了生物这门学科.我是上海生,我读高中那会儿,高考还分文理的,理科里面我就毫不犹豫地选择了生物.(我们理科里面包括物理、化学、生物;考生可以选择一门和语...

根河市19741096127: 谁能告诉我一下现在生物科学这个专业怎么样? -
轩贤伊甘: 这个专业大概有四分之一的会选择考研 动物营养、饲料研发、动物遗传育种、动物繁殖、生产管理工作、相关企业的管理和市场营销 或者转行

根河市19741096127: 我是一名2014考研的学生,现在想咨询清华生命学院生物学方向的问题 -
轩贤伊甘: 个人感觉生化和分生比较有前途,这个是当代生物学的主流,细胞生物学想要做好一样要精通生化,建议生化+分生,专业课是自主命题的,还有其他问题吗

根河市19741096127: 细胞是谁发现的? -
轩贤伊甘: 谁首先发现了细胞-罗伯特·虎克还是列文虎克?迄今,国内学术界大都认为,英国学者罗伯特·虎克(Robert Hooke 1635~1702)在1665年发现了细胞,这似乎已成了定论.1985年出版的中学《生物》教科书中就明确写道:“细胞是英国物理...

根河市19741096127: 19实际自然科学的三大发现是什么? -
轩贤伊甘: 19世纪自然科学的三大发现及其发明者是: 1.细胞学说 19世纪30年代 ,由德国的植物学家施莱登和动物学家施旺提出 主要内容是:细胞是动、植物有机体的基本结构单位,也是生命活动的...

根河市19741096127: 请问现在细胞生物学中的热点是什么? -
轩贤伊甘: 干细胞,细胞凋亡,细胞分化等还有一个永久不变的话题:癌细胞 其实很多东西都是相关的.

根河市19741096127: 我现在是刚高考玩,但是只考了个三本,就是想问问我如果想主研究基因的话,是读生物学的什么类型 -
轩贤伊甘: 研究基因是属于分子生物学方面的,合成生物学、细胞生物学等都有研究.专业为生物科学、生物技术等名称. 生物这个行业目前就业形势非常不好,请慎重考虑.(一本的也很难找到好工作.)

根河市19741096127: 生物科学的研究已经深入到基因水平,还需要研究细胞吗? 求150个字 -
轩贤伊甘: 事物是具有系统性的,分为部分和整体,相互制约不可分割,部分是整体的部分,整体式部分的整体,如果只注意基因而忽略了他所在的细胞整体,就很难明白基因的存在环境.如果没有线粒体提供能量,基因不可能自主地复制等如果没有一定的细胞液环境,基因很可能受损.所以细胞十分有必要研究.

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