高效液相色谱梯度洗脱流动相设置
高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。
在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
扩展资料：
cs—溶质在固定相中浓度；cm—溶质在流动相中的浓度； Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。
正相液-液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。反相液-液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。
参考资料来源：百度百科-高效液相色谱
不同的工作站的设置和操作方式是不一样的。一般而言都是在色谱条件栏目中设置的。也有的有专门的梯度设置菜单。色谱问题建议你到“生化色谱网”去看看。那里非常专业。
一、这个具体还要看你的仪器类型。 15c好像是单泵。如果是这样就不可能进行梯度洗脱。简单地说就是一个通道。不可能设置梯度。当然了，如果是低压二元泵，或者是双泵的话就可以。在梯度洗脱的地方设置：
比如，流速是1.0ml/min
A B
0 10 90
20 50 50
30 50 50
调整梯度的时候
时间 单元
0.01 PUMP FLOW 1.0
0.01 pump B.CONC 90
20.00 PUMP B.COMC 50
30.00 PUMP B.COMC 50
二、工具按钮，这个太多……没办法一一解释。如果你是中文版，你把鼠标移到按钮上，上面就会显示功能的。
大约是这个吧：
另外关于批处理的问题。那个和梯度没有关系好不好？批处理一个是用来跑序列的，一个是用来处理图谱的。
如果你们有自动进样器，那么就可以编辑批处理运行序列。其中有几个参数必须要写：
样品瓶，就是瓶号
样品架，架子一般是由1、2两个。有的有一个。
方法：运行的方法。比如你的是序列方法
数据文件：图谱保存的路径和文件的名字
进样体积：一针扎多少？20ul还是10ul
其他的样品的id或者名称都是可写可不写的。
三、液相也不是岛津一家独大。基本上是岛津、安捷伦和Waters并列。岛津胜在性价比。不过安捷伦的国际认可性比岛津好很多。岛津可以改图，安捷伦不可以。所以国外的科研机构、国内的国家企业大多用安捷伦。
如果是新手，光是这么问没办法回答你。岛津会有说明书，上面关于仪器的问题和工作站的问题写得很详细。具体的去参考那个看一下。网上也有电子版的。细节的东西都是从那上面可以学到的。
高效液相色谱仪器的结构及其各部分作用是什么?
输液泵，将储液器中的流动相连续不断地以高压形式进入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。梯度洗脱装置，是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成增加洗脱能力的一种装置。2、进样系统；进样器：是将样品送入色谱柱的装置，进样方式可以分为两种：阀进样或自动进样。比较常用的是采用自动进样器...
高效液相色谱法对流动相的要求有哪些?
1、选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性。2、选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。3、选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂；若使用视差折光检测器，就不能用梯度洗脱。4...
高效液相色谱仪原理及操作步骤
在已知的有机化合物中,约有80%能用高效液相色谱法分离、分析,而且由于此法条件温和,不破坏样品,因此特别适合高沸点、难气化挥发、热稳定性差的有机化合物和生命物质。HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。 其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部位。有的仪器还有梯度洗脱装置...
如何优化液相色谱柱的分离性能?
在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是优化分离条件。以下是详细解答：1、优化流动相：通过选择合适的流动相，可以改善柱效。流动相的选择应考虑溶解样品的能力、溶剂的纯度和稳定性等因素。对于复杂样品，可以采用梯度洗脱方法，即在分析过程中逐渐调整流动相的组成，以实现更好的分离效果。2、选择合适的...
高效液相色谱分析法的原理是什么?
废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。（二）高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一...
高效液相色谱仪使用中需注意的几个问题?
4. 预防液相泵的故障 处于良好操作状态的泵，应该能使色谱图上的基线平稳；保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。 要保持泵的良好操作性能,必须维护系统的清洁,保证溶剂和试剂的质量,对流动相进行过滤和脱气.下面列出预防泵故障的几项措施：1）用高质量...
巯基的检测方法
从而建立了一种高灵敏度巯基检测方法。2. 采用分子荧光光谱法作为反应条件，用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基用OPA、丹酰氯、茚三酮与半胱氨酸反应，测其可见紫外吸收光谱及荧光光谱；在不同PH、温度、反应时间条件下，用OPA与半胱氨酸反应测其荧光度；分别吸收0.1mmol\/L半胱氨酸溶液0、20、40、...
高效液相色谱原理
液相色谱仪是一款以用户为核心的智能化的色谱仪，具有常规HPLC的基本性能，并扩展了更多智能化的功能，能很好的满足用户的各类不同的应用要求，使用户能更加轻松的使用，并获得准确的分析数据。一、原理：高效液相色谱法的原理是在原始的经典色谱法基础上面引用气象色谐的理论，色谱柱则是用特殊的方式用小...
高效液相色谱法的优化操作有哪些?
我想你问的最主要的还是这个分析方法的优化吧。分析方法的优化要从流动相，色谱柱，柱温，检测器，梯度洗脱，样品前处理，等多方面进行选择、优化。以前我写过的研发分析方法开发初探，你可以在网上下载看看。1、流动相的选择：反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整...
高效液相的原理,最好详细点
高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、.分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点。 1.进样系统 一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。 2.输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一...
仉明意施： 水是纯水,这只是一个比例,也就是3比1,没有什么大的要求.配好以后,抽滤一下(用0.22微米,也有用0.25微米的膜),但我也见过不过滤的.如果有条件还是过滤一下,有的检测器对气泡还是比较敏感的,也有利于仪器的保护.
肇东市19267663755： 哪个高手知道液相色谱梯度洗脱时流动相的浓度比怎么去定? - ？
仉明意施： 关于流动动相梯度选择的问题,个人习惯不同,方法 也不尽一样.据我愚见,一般应该选择乙腈:水=90:10进行首选.30-60分钟的首次运行时间,观察最晚出峰时间.以此为据进行流动相及梯度的选择.如果物质出峰时间者在10分钟以前出来,才有必要进行梯度变换.梯度变换原则是达到所有物质的基线分离,同时兼顾总计的分析时间,超始用大比例水相,小比例有机相.随着时间改变,增加有机相到80或90的比例,把所有物质洗脱,最后再把梯度比例达到初始阶段就行了.一般来说,梯度方法 设置到20-30分钟之间较为合适.具体比例参数要看出峰时间及物质性质等. 详细可参见我写的文章:化学化工分析方法选择-研发分析方法开发初探,进阶及高级.
肇东市19267663755： 液相色谱中怎么在软件中编辑洗脱梯度: - ？
仉明意施： 首先,前提是你必须要有双泵或者四元泵,才能梯度洗脱. 其次,不管是哪种仪器都是在泵控制里面去设置.
肇东市19267663755： 梯度设置实验 - 梯度设置液相 ？
仉明意施： 梯度设置实验密度梯度仪利用旋转混合的原理,用于快速制备完全线性的密度梯度介质溶液,能够有效提高样品后续密度梯度离心分离的效果.仪器在马达控制的喇叭状吸...
肇东市19267663755： 高效液相色谱分析法中为什么采用梯度淋洗 - ？
仉明意施： 梯度淋洗,就是程序洗脱,简称就是梯度. 主要就是变化流动相比例.主要目的就是为了分离样品,其次还有减短分析时间,改善峰型,提高灵敏度等等. 比如这个梯度,流动相A是磷酸盐水相,B是乙腈保留时间(min) 乙腈(%) 0 10 20 30 30 3032 10 40 10 相当于这种状态 就是从0-20min这段时间,逐步往里面加入乙腈,这样的话有助于极性相似的物质分离.如果是里面有一个极性比较小的物质,那么乙腈量增大,这个物质出峰时间就会提前.减短了分析时间.
肇东市19267663755： 高效液相色谱仪流动相如何配置 - ？
仉明意施： 水是纯水,这只是一个比例,也就是3比1,没有什么大的要求.配好以后,抽滤一...
肇东市19267663755： 高效液相色谱的原理及分析方法 - ？
仉明意施： 分析色谱图 手动进样步骤 配置好流动相,将滤嘴洗头放入流动相页面内,打开泵和检测器,快跑排除气泡,设置既定流速,稳定一段时间,让基线跑平,用液相针吸取称量融配脱气后的对照(含量已标定),打开定量环将液相针里的液体匀速...
肇东市19267663755： hplc现在有用乙醇做流动相的吗?要是能的话怎么和水配比?怎么设置梯度?谢谢.急! - ？
仉明意施： 理论上乙醇是可以用作流动相.一般情况下不选择乙醇作流动相,因为乙醇的黏度相对较大,用作流动相时柱压太大.以水作1计,乙醇1.2 丙酮0.32 甲醇0.60 乙腈0.37 .另外,使用乙醇的成本要高于甲醇,所以一般不用乙醇用流动相. 设置梯度的话,需要两个以上的高压泵,设置其中的一个泵为主泵,其它的泵都设为副泵.再在主泵或工作站中设置梯度参数,如下,以双泵为例 time A :水(%) B:甲醇(%) 0.00 20 80 10.0 50 50 20.0 60 40 25.0 80 20 这样就设置了0~10min,10~20min,20~25min三个不同的梯度.
肇东市19267663755： 高效液相色谱仪操作 - ？
仉明意施： 准备好流动相(比如甲醇和水),开机(开泵,检测器,有柱温箱和自动进样器的也一同打开),开工作站,设定流动相比例和流量,设定检测波长,然后启动泵,等基线平稳后即可进样了.老弟你好相一点不懂呀,最好找一个明白人现场给你操作一次,和你讲一讲,免得把仪器弄坏.我是济南的.希望能解决您的问题.
肇东市19267663755： 最近做液相,想请问高效液相色谱仪器是如何操作的,新手!务必详细!谢谢,还有那些条件,数据,等~~ - ？
仉明意施： 1、配制缓冲液 2、用滤膜过滤缓冲液 3、根据你的出峰时间需要,配制不同乙腈比例的流动相,比如说乙腈:缓冲液=1:6或1:4之类 4、将配好的流动相进行超声脱气15-20min 5、流动相配好之后,打开色谱工作站,设置方法,查看基线,并进行零点校正 6、取样进样检测
