[甲基化问题锦集]

作者&投稿:姚若 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
~ 今天和大家聊聊甲基化。

问:什么是表观遗传修饰?

答:基因组表观遗传修饰主要包括DNA甲基化修饰与核小体中组蛋白的修饰等,使得被修饰DNA的空间结构发生改变或使染色体结构发生改变,导致基因的沉默或过度表达。这两种修饰都是在不改变DNA碱基种类与数量的前提下使生物体表型呈现出多样化。

问:什么是DNA甲基化?

答:DNA甲基化是指在DNA 甲基化转移酶的作用下,将甲基选择性地添加到胞嘧啶上形成5’-甲基胞嘧啶的过程。

问:DNA甲基化修饰有什么作用?

答:DNA甲基化是最早发现的一种表观遗传修饰,可能存在于所有高等生物中, 它并不改变基因的碱基序列, 而是通过改变基因的表达影响细胞的功能,与基因沉默、X染色体失活、基因组印记、RNA i以及肿瘤等生物事件密切相关,它们的共同作用机制是调节基因的表达。

问:不同生物,DNA甲基化类型是一样的吗?

答:当然不一样啦。原核生物中甲基化多发生在CCA/TGG和GATC序列,而真核生物中DNA甲基化一般只发生在CpG位点上,哺乳动物DNA甲基化只发生在CpG岛的胞嘧啶,植物甲基化发生在CpG和CpNpG。

问:什么是CpG岛?

答:CpG双核苷酸在人类基因组中的分布很不均一,而在基因组的某些区段CpG序列密度很高,可达到均值5倍以上即所谓的CpG岛。CpG岛主要位于基因的启动子(promotor)和第一外显子区域,约有60%以上基因的启动子含有CpG岛。CpG岛的GC含量大于50%,经常出现在真核生物的编码基因的调控区。

问:CpG岛为什么要有个"p",而不叫CG岛?p有什么特殊含意?

答:CpG是胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤的缩写,p代表磷酸。

问:如何预测CpG岛?

答:由于CpG 岛区域较小,研究起来更为方便,因此,众多的研究热点集中在CpG 岛甲基化状态的研究上。而研究CpG岛甲基化的前提条件是确认最合适的CpG 岛区域。

目前有一些网站可以进行CpG岛的预测,我推荐几个比较好用的:

CpG Island( http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx ) http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/?term=TPM1+HOMO

http://www.urogene.org/methprimer/

CpGfinder( http://www.softberry.com/berry.phtml?topic=cpgfinder&group=programs&subgroup=promoter )

CpG islands revealing( http://l25.itba.mi.cnr.it/cgi-bin/wwwcpg.pl )

CpGPlot/CpGReport/Isochore( http://www.ebi.ac.uk/emboss/cpgplot/index.html )

然后用实验证实,可以用bisulfite sequencing来比较处理前后的不同,找到甲基化位点。

问:验证特定甲基化位点,并进行甲基化程度分析有哪些方法?

答:采用对照组和实验组样本进行甲基化验证。

(1) MSP方法:可进行特定位点甲基化验证,适用于甲基化芯片后的结果,无法进行甲基化程度分析;

(2) BSP克隆测序法:验证某些相关基因的甲基化位点,并精确计算出甲基化程度百分比;

(3) HRM法:适用于大批量样本甲基化验证,并能计算出甲基化程度范围。

(4) 焦磷酸测序:测序有效长度不超过60bp,精确定量每一个CpG位点。

(5) MassARRAY® 平台:用于单个基因启动子区域的甲基化检测;每个反应覆盖长达500 bp的多个CpG位点; 精准定量每一个CpG位点。

问:刚刚开始研究甲基化,如何寻找甲基化位点?

答:甲基化的研究是近年来较为火热的研究领域之一,您是不是也对它垂涎已久,却苦于无从下手?其实甲基化的研究并没那么难,一句话,还是套路!

首先,甲基化位点的筛选,可以使用全基因组Bisulfite测序(WGBS)、简化基因组甲基化测序(MethylRAD技术)或者甲基化芯片进行基因组整体水平甲基化检测,每种方法各有利弊,要根据实际的研究方向选择不同的方法。对于样品间差异甲基化位点的筛选,可以采用WGBS和MethylRAD技术,其中MethylRAD技术可以应用于无参考基因组的物种,Illumina Methylation EPIC芯片只能用于人类的DNA甲基化水平检测。当然也可以根据一些相关研究显示某些基因存在表达量降低的现象,预测该基因是否存在CpG岛;或者根据文献寻找相关基因的甲基化位点。

其次,对选择的特异位点进行甲基化验证,并进行甲基化程度分析。

最后,根据对照组和实验组样本的检测结果,分析甲基化位点与研究的相关性。

问:只知道基因名称,如何做甲基化检测?

答:只需要将物种及基因信息告知相应或测序公司,会为您提供全方位的检测服务。

原文: 甲基化问题锦集


[甲基化问题锦集]
首先,甲基化位点的筛选,可以使用全基因组Bisulfite测序(WGBS)、简化基因组甲基化测序(MethylRAD技术)或者甲基化芯片进行基因组整体水平甲基化检测,每种方法各有利弊,要根据实际的研究方向选择不同的方法。对于样品间差异甲基化位点的筛选,可以采用WGBS和MethylRAD技术,其中MethylRAD技术可以应用于无参考...

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甘南藏族自治州15658562991: 关于DNA甲基化的问题 -
家民小儿: 当然是不可缺少的.基因的表达必须有2个机制同时作用,既要有一个信号机制激活需要表达的基因 同时必须有一个抑制基因表达的机制 这和反馈调节有点像,而甲基化就是基因表达中的其中一个抑制机制.至于可不可以遗传不确定,但甲基化好像是之后对DNA的修饰作用 应该不可遗传. 选我做满意答案吧!!

甘南藏族自治州15658562991: 请教:甲基化的修饰问题 -
家民小儿: 甲基化是蛋白质和核酸的一种重要的修饰,调节基因的表达和关闭,与癌症、衰老、老年痴呆等许多疾病密切相关,是表观遗传学的重要研究内容之一. DNA甲基化能关闭某些基因的活性,去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达.DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而控制基因表达.

甘南藏族自治州15658562991: 甲基化为什么只发生在胞嘧啶上,其他碱基为什么不发生 -
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家民小儿: DNA甲基化是指在DNA 甲基化转移酶的作用下,发生在CpG二核苷酸上胞嘧啶5碳原子的替代以及通过转录后组氨酸修饰的DNA 包装的染色质变化.DNA甲基化是最早发现的一种表观遗传修饰, 可能存在于所有高等生物中, 它并不改变基因的碱基序列, 而是通过改变基因的表达影响细胞的功能, 与基因沉默、X染色体失活、基因组印记、RNA i以及肿瘤等生物事件密切相关, 它们的共同作用机制是调节基因的表达

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家民小儿: 如何分析promoter的甲基化 DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一,真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶,即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下的CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶转变为5'-甲基胞嘧啶.大量研究表明,DNA甲基化能引起染...

甘南藏族自治州15658562991: DNA甲基化对基因表达的调控机制 -
家民小儿: DNA甲基化发生于DNA的CpG island (CG序列密集区).发生甲基化后,那段DNA就可以和甲基化DNA结合蛋白相结合.结合后DNA链发生高度的紧密排列,其他转录因子,RNA合成酶都无法再结合了,所以这段DNA的基因就无法得到表达了....

甘南藏族自治州15658562991: 父母的dna甲基化能够遗传吗?子代遗传谁的甲基化多? -
家民小儿: 嗯···· 生物体甲基化的方式是稳定的, 可遗传.

甘南藏族自治州15658562991: 有机化学中的甲基彻底化怎么理解? -
家民小儿: 我插入了一张甲基彻底化的图解,希望你可以从中得到答案.另个这是一个由:氨与卤代甲烷--甲基化反应--甲胺--二甲胺--三甲胺--四甲基铵盐,一步一步化解的过程.

甘南藏族自治州15658562991: dna甲基化与人体的关系? -
家民小儿: DNA甲基化虽然发现较早但是仍然属于DNA研究比较前沿的热点,有很多未知的东西,总体来说DNA甲基化与DNA的差异性表达,基因活性与功能的改变有关

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